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国家自然科学基金(81001016)

作品数：14 被引量：28H指数：3
相关作者：杨吉成盛伟华缪竞诚王家融谢宇锋更多>>
相关机构：苏州大学常熟市第二人民医院上海交通大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金江苏省卫生厅医学科研项目江苏省卫生厅面上基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 14篇中文期刊文章

领域

  • 11篇医药卫生
  • 3篇生物学

主题

  • 9篇细胞
  • 7篇腺病
  • 7篇腺病毒
  • 6篇ING4
  • 5篇生长抑制因子
  • 5篇基因
  • 4篇生长抑制因子...
  • 4篇腺癌
  • 4篇肺腺癌
  • 4篇RGD
  • 3篇抑癌
  • 3篇增敏
  • 3篇双基因共表达
  • 3篇肿瘤
  • 3篇腺病毒载体
  • 3篇基因共表达
  • 3篇共表达
  • 3篇肺癌
  • 3篇癌细胞
  • 3篇病毒载体

机构

  • 14篇苏州大学
  • 3篇常熟市第二人...
  • 2篇上海交通大学

作者

  • 13篇杨吉成
  • 11篇盛伟华
  • 8篇缪竞诚
  • 5篇王家融
  • 5篇谢宇锋
  • 4篇黄锦宏
  • 4篇凌春华
  • 4篇赵大国
  • 3篇朱晔涵
  • 2篇韩亚丽
  • 2篇张凤娟
  • 2篇杜贤荣
  • 2篇陈华昕
  • 1篇盛建华
  • 1篇李东蓉
  • 1篇黄晨
  • 1篇谢宇峰
  • 1篇赵云根
  • 1篇吕海涛
  • 1篇陈瑶

传媒

  • 3篇中国生物工程...
  • 2篇中国肿瘤生物...
  • 2篇中华结核和呼...
  • 1篇临床荟萃
  • 1篇中国免疫学杂...
  • 1篇中国肺癌杂志
  • 1篇北华大学学报...
  • 1篇苏州大学学报...
  • 1篇上海交通大学...
  • 1篇内科理论与实...

年份

  • 2篇2016
  • 2篇2015
  • 2篇2014
  • 2篇2013
  • 4篇2011
  • 2篇2010
共 14 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
腺病毒介导的ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其分子机制被引量：4
2014年
背景与目的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是一种重要的肿瘤抑制因子,研究发现ING4基因对多种肿瘤细胞具有抑癌作用。本研究旨在探讨ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在的作用机制。方法采用SPC-A1细胞株建立肺腺癌裸鼠移植瘤模型,15只荷瘤裸鼠随机等分为PBS组、腺病毒组(Ad-GFP组)、腺病毒介导的ING4组(Ad-ING4组),上述各组进行局部干预用药,动态测量肿瘤体积,治疗结束后摘取瘤体称重并计算瘤重抑瘤率;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测瘤体内细胞凋亡情况,免疫组织化学SP法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、环氧化酶-2(COX-2)、Fas与FasL的表达。结果 Ad-ING4组的肿瘤体积、瘤重均呈现明显下降,与Ad-GFP组抑瘤率(1.31%±0.31%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其抑瘤率为(33.17%±5.24%);Ad-ING4组的凋亡指数为(69.23%±6.53%),与PBS组(17.04%±1.10%)、Ad-GFP组(18.81%±1.93%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SP法检测结果显示,Ad-ING4可明显上调Caspase-3、Fas与FasL表达,下调COX-2表达。结论 ING4具有抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,该作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。
黄锦宏杨吉成凌春华赵大国谢宇锋由振华
关键词：生长抑制因子4肺肿瘤移植瘤
ING4及IL-24双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用研究被引量：8
2013年
目的用人肿瘤生长抑制因子(mING4)及人白介素24(IL-24)基因构建腺病毒双基因共表达载体(Ad-ING4-IL-24),并设Ad-ING4和Ad-IL-24单基因对照,研究双基因共表达载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用.方法首先将已构建成功的Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4及Ad-IL-24腺病毒感染QBI-293A细胞,经多轮扩增后获得高滴度的病毒子,测病毒效价后分别以100 MOI剂量感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING-4及IL-24在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法检测ING-4及IL-24基因表达对MG-63细胞的生长抑制效应;半定量RT-PCR法检测ING4及IL-24基因表达对MG-63细胞中的Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34等相关基因表达的影响.结果获得了高滴度的重组腺病毒Ad-ING4-IL-24,Ad-ING4,Ad-IL-24和Ad-GFP;治疗后MG-63细胞中ING-4及IL-24双基因表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,ING-4及IL-24基因表达可通过上调细胞中Bax,Caspase3,p21和下调Bcl-2,CD34基因表达诱导细胞凋亡.在病毒子剂量为100 MOI时,Ad-ING4-IL-24对MG-63人骨肉瘤细胞抑制作用比对Ad-ING4和Ad-IL-24抑制效果更为显著.结论腺病毒介导的ING4或/和IL-24基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,且Ad-ING4-IL-24双基因比Ad-ING4和Ad-IL-24单基因的抑制效果更为显著,该现象可能是通过改变Bcl-2,Bax,Caspase3,p21,CD34基因表达水平来发挥抗肿瘤作用的.
王家融韩亚丽缪竞诚盛伟华杨吉成
关键词：ING4基因IL-24基因腺病毒载体
腺病毒介导的人抑瘤素M基因对A375人黑色素瘤细胞的抑制作用被引量：1
2011年
目的:构建抑瘤素M(OSM)重组腺病毒载体,研究其对人黑色素瘤细胞A375的抑制作用。方法:以PEGZ-OSM重组质粒为模板,通过PCR技术扩增出OSM片段,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人OSM氨基酸序列相同的重组腺病毒子Ad-OSM,感染A375细胞,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot法检测OSM在A375细胞中的转录和表达;荧光显微镜观察A375细胞的形态学改变;MTT法和流式细胞术(FCM)检测Ad-OSM对A375细胞的生长抑制和细胞周期的抑制效应;半定量RT-PCR法检测OSM基因表达对A375细胞中的Bax、Bcl-2基因表达的影响。结果:基因测序和PCR分析结果显示,成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体;RT-PCR和Western blot法检测到OSM基因在A375细胞中的转录和表达;OSM基因的表达对A375细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,OSM基因可通过上调细胞中Bax和下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。结论:成功构建了Ad-OSM腺病毒表达载体,感染OSM基因可明显抑制A375人黑色素瘤细胞的生长,诱导其凋亡,该现象可能是通过改变Bax、Bcl-2基因表达水平来发挥抗肿瘤作用。
张凤娟杨吉成盛伟华王家融缪竞诚
关键词：腺病毒载体黑色素瘤凋亡
双基因共表达的重组腺病毒载体对人A549肺癌细胞的抑癌增效作用
2010年
生长抑制因子4（inhibitor of growth 4,ING4）基因是近年来新发现的一种肿瘤抑制因子,广泛参与肿瘤的发生及发展过程,并可增强化疗药物的敏感性.ING4主要在细胞内发挥抑癌作用.
朱晔涵杜贤荣陈华昕谢宇锋盛伟华黄建安杨吉成
关键词：双基因共表达抑癌作用重组腺病毒载体肺癌细胞肿瘤抑制因子生长抑制因子
IRES/polyA-promoter介导的Ang-1与VEGF165双基因表达效率的对比分析被引量：2
2010年
目的：构建IRES及polyA-promoter介导人血管生成素-1（Angiogenin-1,Ang-1）和人血管内皮生长因子165（vascular endothelial growth factor165,VEGF165）双基因共表达的腺病毒载体,比较IRES与polyA-promoter不同表达模式及其对位于二者前后基因的表达效率和诱导兔角膜新生血管的形成功能,为今后构建双基因或多基因高效共表达载体提供实验依据。方法：以pAdTrack-CMV-Ang-1-IRES-VEGF165质粒为模板,PCR扩增人VEGF165及Ang-1基因片段,分别将其亚克隆至改建的pAdTrack-CMV-PolyA-promoter及pAdTrack-CMV-IRES转移质粒中,构建pTrack-CMV-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165、pTrack-CMV-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1、pTrack-CMV-VEGF165-IRES-Ang-1基因重组转移质粒,再与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中同源重组,然后经PacI线性化后转染QBI-293A人胚肾成纤维细胞（简称293A细胞）,收获腺病毒重组病毒子Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165及Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165在QBI-293A细胞中的转录,ELISA法分别检测不同腺病毒载体目的基因的表达量,比较分析Ang-1与VEGF165基因在IRES和polyA-promoter介导的不同腺病毒表达载体中的表达能力,及在同一腺病毒表达载体中前后不同位置的表达效率。并进一步于兔角膜缘注射Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165,Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,Ad-Ang-1-IRES-VEGF165,检测角膜新生血管的面积,并比较其诱导血管形成能力的差异。结果：测序显示Ang-1和VEGF165序列正确,不同重组腺病毒载体均获得成功包装,病毒效价可达2~5×1010pfu/m l,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165均能有效转录,ELISA法检测结果表明Ang-1、VEGF165基因不仅均能在细胞中有效表达,而且IRES介导的Ang-1及VEGF165基因,无论在IRES上游或下游,其表达量均低于polyA-promoter相同位置的Ang-1及VEGF165基因表达量,大约降低60%~70%左右,同时Ang-1/VEGF165在同一载体上、下�
陈瑶缪竞诚韩亚丽盛伟华包婉蓉田丽娜张凤娟吕海涛杨吉成
关键词：血管生成素-1血管内皮生长因子IRES
Ad-PTEN对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生长的抑制作用被引量：1
2011年
目的研究重组腺病毒第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)对小细胞肺癌的抑癌增效和化疗增敏效应及其分子机制。方法采用重组腺病毒载体PTEN(简称Ad-PTEN)感染QBI-293A细胞,并用该细胞进行病毒扩增和效价测定。将Ad-PTEN感染NCI-H446小细胞肺癌细胞。分为5组:PBS组、空载体Ad组、Ad-PTEN组、顺铂(DDP)组和Ad-PTEN+DDP组,Western blot鉴定PTEN基因表达,MTT法和流式细胞仪(FCM)检测Ad-PTEN对NCI-H446小细胞肺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡的增效作用,用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因p53、bax、caspase-3、bcl-2、和survivin的转录。结果 Ad-PTEN可在QBI-293A细胞中增殖。Ad-PTEN感染NCI-H446细胞后,Western blot检测到了PTEN基因的表达。Ad-PTEN组、DDP组、Ad-PTEN+DDP组体外能明显抑制人NCI-H446小细胞肺癌细胞的生长和诱导凋亡,且Ad-PTEN+DDP组效应较Ad-PTEN组、DDP组更为显著(均P<0.05)。Ad-PTEN组、DDP组、Ad-PTEN+DDP组的NCI-H446细胞中的p53、bax及caspase-3基因表达均上调,而Bcl-2和Survivin基因表达均下调,这些凋亡相关基因的上调或下调的表达趋势以Ad-PTEN+DDP组最显著(均P<0.05)。结论 Ad-PTEN体外可抑制NCI-H446小细胞肺癌细胞生长,Ad-PTEN对DDP的细胞毒作用具有增敏效应,其机制可能与上调p53、bax及caspase-3基因表达和下调bcl-2和survivin基因表达有关。
李东蓉杨吉成盛伟华谢宇锋朱晔涵
关键词：小细胞肺癌抑癌效应化疗增敏
Ad.RGD-ING4和PTEN对白血病细胞株抑癌作用
2016年
目的：构建RGD修饰的生长抑制因子4（ING4）和（或）10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）单、双基因重组腺病毒载体,以研究其对白血病细胞株的感染效率和抑瘤作用的可行性。方法：在本科室已成功构建的p Ad Track-巨细胞病毒（CMV）-多腺苷酸（poly A）启动子腺病毒载体上,通过常规的分子生物学方法,获得RGD修饰的ING4和（或）PTEN单、双基因重组腺病毒,将其与未经RGD修饰的基因重组腺病毒同时感染QBI-293A细胞,检测和比较病毒的效价,并以10、50、100、200感染复数（MOI）不同剂量感染不同肿瘤细胞和人胚肺正常二倍体细胞系WI-38,培养48 h后在荧光显微镜下观察和用流式细胞仪检测,通过比较各组细胞中绿色荧光蛋白（GFP）阳性细胞比例来检测其对不同肿瘤细胞的感染效率。结果：经荧光显微镜观察各组重组腺病毒可见GFP的表达,反转录（RT）-PCR鉴定结果表明均可产生预期大小750 bp的ING4和1 209 bp的PTEN PCR产物,基因测序结果与预期序列相一致。RGD修饰的基因重组腺病毒载体效价分别比未经修饰的基因重组腺病毒效价高3～4倍（P=0.027）。流式细胞仪检测显示RGD修饰的基因重组腺病毒比未经修饰的基因重组腺病毒载体对各组肿瘤靶细胞有更高的GFP表达,感染效率明显提高,尤其对人白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01差异最为明显,未经改造的腺病毒载体感染白血病细胞后GFP阳性率仅3.16%～5.01%,而带有RGD的腺病毒载体感染后GFP阳性率可达到23.11%～31.58%（P=0.001 3）。结论 ：成功构建了RGD修饰的ING4和（或）PTEN单、双基因重组腺病毒载体。RGD修饰的ING4和（或）PTEN基因重组腺病毒明显提高了腺病毒的效价,在各种肿瘤细胞感染效率中以白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01最为明显。
韩亚丽王家融杨吉成盛伟华缪竞诚
关键词：RGD白血病细胞株生长抑制因子4
Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体的构建及表达被引量：1
2011年
目的:构建IRES介导的携带人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白介素24(IL-24)双基因的重组腺病毒共表达载体(简称为Ad-ING4-IRES-IL-24),研究其表达产物对A549肺癌细胞生长的影响。方法:将PCR扩增的IRES、ING4和IL-24基因片段分别插入pAdTrack-CMV载体中构建pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24双基因共表达重组转移载体。按腺病毒载体常规构建方法获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24,并在QBI-293A包装细胞中进行包装和病毒扩增。将扩增后的Ad-ING4-IRES-IL-24腺病毒感染A549肺癌细胞,并用RT-PCR和Western blot法鉴定ING4和IL-24基因在QBI-293A细胞或A549肺癌细胞中的表达,MTT法和流式细胞仪检测其对A549肺癌细胞生长抑制和诱导凋亡的功能和抑癌增效作用。结果:DNA测序结果显示pAdTrack-CMV转移载体中插入的ING4、IRES和IL-24片段的序列与GenBank报道的完全一致,Ad-ING4-IRES-IL-24能成功介导ING4和IL-24基因在QBI-293A和A549细胞中表达,不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡(72小时生长抑制率为62.82%±0.65%,凋亡率为19.40%±1.29%),而且与Ad-ING4-IRES(72小时生长抑制率为42.31%±0.43%,凋亡率为13.30%±1.85%)和Ad-IRES-IL-24单基因组(72小时生长抑制率为47.44%±0.39%,凋亡率为12.40%±1.05%)相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:成功构建了IRES介导的Ad-ING4-IL-24双基因共表达重组腺病毒载体,Ad-ING4-IL-24不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡,而且与Ad-ING4和AdIL-24单基因组相比具有抑癌增效作用。
盛伟华谢宇锋缪竞诚顾范博单云波朱晔涵陈华昕杜贤荣杨吉成
关键词：腺病毒ING4IL-24肺癌肿瘤基因治疗
腺病毒介导ING4或/和P53基因表达对人肺腺癌细胞的生长抑制作用被引量：2
2015年
目的在本室已构建Ad.RGD空载体和Ad.RGD-ING4腺病毒基础上,再构建Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53单双基因重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞的生长抑制作用。方法 PCR克隆P53基因,构建pAd.RGD-P53和pAd.RGD-ING4-P53同源重组腺病毒质粒,用QBI-293A细胞进行包装扩增和检测效价。将Ad.RGD、Ad.RGD-ING4、Ad.RGD-P53、Ad.RGD-ING4-P53分别感染A549细胞后,流式细胞仪检测各组重组腺病毒对A549细胞的感染效率。Western blotting检测A549和PC-9细胞中ING4或/和P53蛋白的表达。MTT法检测A549细胞生长,流式细胞仪检测各组A549和PC-9细胞的凋亡率。real-time PCR检测A549细胞内凋亡相关基因Caspase-3、BAX及BCL-2 mRNA的表达水平。结果 PCR和酶切鉴定结果表明：成功构建了pAd.RGD-P53和pAd.RGD-ING4-P53同源重组腺病毒质粒,包装扩增后经效价检测可达1×109~1×1010pfu/m L;各组重组腺病毒感染A549细胞后,感染效率可达90%~95%。Western blotting检测结果表明ING4或/和P53蛋白可在A549和PC-9细胞中成功表达。MTT法检测发现ING4或/和P53单双基因重组腺病毒均能明显抑制A549细胞生长,流式细胞仪检测表明ING4或/和P53基因表达均可诱导A549和PC-9细胞凋亡,且Ad.RGD-ING4-P53双基因重组腺病毒组较Ad.RGD-ING4和Ad.RGD-P53单基因组更为明显（P〈0.05）。real-time PCR检测表明腺病毒介导的ING4或/和P53基因表达能够上调A549细胞内Caspase-3、BAX mRNA表达,下调BCL-2 mRNA的表达,且双基因组较单基因组更为明显（P〈0.05）。结论成功构建了Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53重组腺病毒。各重组腺病毒目的基因表达均能明显抑制人肺腺癌细胞的生长,诱导细胞凋亡,且双基因组较单基因组效果更优,其分子机制可能与细胞内凋亡相关基因Caspase-3、BAX表达上调及BCL-2表达下调有关。
何峰李帅朱霞霞杨吉成盛伟华缪竞诚
关键词：ING4基因P53基因人肺腺癌细胞
Ad-ING4联合放疗抑制肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤的生长被引量：1
2013年
目的:研究腺病毒介导的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth family 4,ING4)联合放疗对肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤生长的抑制作用。方法:制备SPC-A1细胞荷瘤小鼠模型,随机分为PBS组、Ad组、Ad-ING4组、放疗组、Ad-ING4+放疗组。测量各组荷瘤小鼠移植瘤的体积变化,治疗15 d后摘取瘤块,称质量并计算抑瘤率;H-E染色观察瘤体组织细胞的形态学变化,免疫组化法检测瘤体组织中Bax、caspase-3、Bcl-2、VEGF等因子的表达。结果:治疗后第15天SPC-A1移植瘤体积:Ad-ING4组为(1 136.03±151.58)mm3、单纯放疗组为(1 035.67±86.27)mm3、Ad-ING4+放疗组为(743.84±109.06)mm3,联合组可有效抑制肿瘤生长(P<0.01);此外,联合组抑瘤率也显著高于单纯Ad-ING4组或放疗组(69.62%vs 33.17%、35.41%,P<0.01),呈现放疗增敏协同作用(Q=1.22)。免疫组化结果显示,Ad-ING4及其联合放疗组能明显上调Bax、caspase-3等蛋白的表达,下调Bcl-2、VEGF等蛋白的表达,且Ad-ING4+放疗组对这些蛋白表达的调节作用强于Ad-ING4组、单纯放疗组(P<0.01)。结论:Ad-ING4联合放疗可有效抑制肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤的生长。
赵大国黄锦宏金钧谢宇峰盛伟华杨吉成凌春华
关键词：肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤生长抑制因子4
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