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广州市科技计划项目(2006Z1-E0091)

作品数：6 被引量：20H指数：3
相关作者：黄秀艳曾耀英赵令斋曾祥凤林长乐更多>>
相关机构：暨南大学中山大学附属第一医院广州市第八人民医院更多>>
发文基金：国家重点基础研究发展计划广州市科技计划项目更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生

主题

  • 5篇细胞
  • 3篇细胞活化
  • 3篇活化
  • 2篇清开灵
  • 2篇清开灵注射液
  • 2篇注射液
  • 2篇灵注射液
  • 2篇T细胞
  • 2篇T细胞活化
  • 2篇CD4^+
  • 1篇人类免疫
  • 1篇人类免疫缺陷
  • 1篇人类免疫缺陷...
  • 1篇神经胶质
  • 1篇神经胶质细胞
  • 1篇特异
  • 1篇体外
  • 1篇体外抑制
  • 1篇缺陷病
  • 1篇周期

机构

  • 6篇暨南大学
  • 1篇广州市第八人...
  • 1篇中山大学附属...
  • 1篇深圳市第三人...

作者

  • 6篇曾耀英
  • 6篇黄秀艳
  • 3篇赵令斋
  • 2篇林长乐
  • 2篇曾祥凤
  • 1篇唐先高
  • 1篇侯会娜
  • 1篇尹乐乐
  • 1篇张彩
  • 1篇王辉

传媒

  • 3篇中国病理生理...
  • 1篇免疫学杂志
  • 1篇暨南大学学报...
  • 1篇中山大学学报...

年份

  • 2篇2009
  • 4篇2008
共 6 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究被引量：10
2008年
目的:探讨人小胶质细胞(microglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法,为深入研究小胶质细胞功能建立一种简便的、稳定的细胞模型。方法:取5个月人工药物引产的胎儿脑组织,将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液,用DMEM/F12完全培养基调整细胞密度为2×1010cells/L,接种于75cm2培养瓶中(记作first0d);7-10d后,进行第1次纯化。此次纯化采用轻柔摇动法将贴壁不牢的小胶质细胞和少突胶质细胞与底层的星形胶质细胞分离并转入另一培养瓶继续培养扩增(记作second0d);4-5d后,混合的小胶质细胞和少突胶质细胞汇合成片,采用胰酶-EDTA消化法结合差速贴壁法进行第2次纯化。此次纯化将消化得到的细胞悬液离心和重悬,接种于培养瓶(记作0h);2h后,小胶质细胞贴壁生长,少突胶质细胞依然漂浮在培养上清中,此时通过移走上清以去除少突胶质细胞,即得到高纯度的小胶质细胞;运用激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术结合细胞表面或胞内免疫荧光抗体染色技术检测所分离的小胶质细胞CD45,CD11b和CD68的阳性率,以计算其纯度;通过吞噬荧光微球评价其吞噬功能;利用胞膜边缘波动(membrane ruffling)现象结合荧光标记的鬼笔环肽染色技术鉴定其活化水平。结果:我们所分离的小胶质细胞中,>98%的细胞表达CD45,CD11b和CD68,并且能够吞噬荧光微球。结论:我们成功地分离和纯化了人小胶质细胞,所得到的小胶质细胞高表达CD45,CD11b和CD68分子,并且具有很强的吞噬功能,为进一步进行其功能和蛋白质组研究奠定基础。
黄秀艳曾耀英张彩朱斌
关键词：小神经胶质细胞CD68
艾滋病发病学研究进展与药物和疫苗研发新策略被引量：3
2008年
A breakthrough has recently been made in the studies on pathogenesis of HIV disease,which result in some new theories.New strategies for HIV drug and vaccine development are emerging in the impact of these new understandings.The intestinal infection hypothesis proposes that HIV disease can be regarded as some kind of infectious disease of gut immune system as the major HIV infection is located in intestine.The acute catastrophe hypothesis suggests that the subsequent pathological changes are the fallout from a mucosal catastrophe of acute intestinal HIV infection,in which the majority of CD4+ T cells are deleted due to infection.The general immune overactivation hypothesis proposes that the general immune overactivation is harmful to patient as it increases the cell susceptibility to HIV infection and supportiveness of HIV replication.The host proteins related to HIV replication can be new targets for HIV drug discovery.The mucosal vaccine strategies,which attempt to induce HIV specific neutralizing antibodies on mucosal surface may be the first choice in development of prophylactic HIV vaccines.Induction of tolerance may be one of the strategies for HIV therapeutic vaccines because HIV disease can be regarded as autoimmune disease caused by HIV infection.
黄秀艳曾耀英
关键词：HIV肠黏膜艾滋病
灭活HIV-1颗粒对人CD4^+T细胞活化标记分子CD25、CD71和HLA-DR表达的作用被引量：1
2009年
目的通过深入研究AT-2灭活HIV-1颗粒对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB-MCs)来源的CD4+T细胞中期活化标记分子(CD25)和晚期活化标记分子(CD71和HLA-DR)的作用,进一步探讨HIV病中普遍性的免疫过度活化的病理机制。方法AT-2灭活HIV-1IIIB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量,调整p24抗原含量为50 ng/mL;然后按照p24抗原量为0.1 ng/mL(记作HIV-1 1/500组)、1 ng/mL(记作HIV-1 1/50组)和10 ng/mL(记作HIV-11/5组)的浓度加入到PBMCs中,以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组为阳性对照,24 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD25的表达百分率;48 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD71和HLA-DR的表达百分率。结果24 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD25的表达百分率为(9.46±2.12)%,PHA组为(79.45±3.72)%,HIV-1 1/500组为(14.89±2.53)%,HIV-1 1/50组为(19.04±2.41)%,HIV-11/5组为(23.50±2.21)%;48 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD71的表达百分率为(3.39±1.40)%,PHA组为(75.52±5.14)%,HIV-1 1/500组为(11.70±2.34)%,HIV-1 1/50组为(18.45±3.19)%,HIV-1 1/5组为(22.59±2.96)%;CD4+T细胞HLA-DR的表达百分率为(8.11±2.13)%,PHA组为(66.48±6.81)%,HIV-1 1/500组为(14.52±1.68)%,HIV-1 1/50组为(19.94±2.38)%,HIV-1 1/5组为(23.74±2.30)%。结论AT-2灭活的HIV-1IIIB颗粒能够明显的诱导PBMCs中CD4+T细胞活化,并可能引起CD4+T细胞增殖,从而为HIV-1感染提供更多的"燃料细胞"。
黄秀艳曾耀英王辉
关键词：CD25CD71HLA-DR
灭活HIV-1颗粒对人CD4^+ T细胞活化和全血Th1/Th2细胞因子分泌的影响被引量：3
2008年
目的:体外研究AT-2灭活的HIV-1颗粒对人CD4+T细胞活化和全血(whole blood,WB)Th1/Th2细胞因子分泌的影响。方法:AT-2灭活HIV-1ⅢB型病毒颗粒,运用ELISA法测定所制备的灭活病毒中p24抗原的含量,按照1/500、1/50和1/5(V/V)的浓度加入到WB中,以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组为阳性对照;24h后,收集WB培养上清,运用流式微球分析法(cytometric bead array,CBA)检测WB分泌Th1(IL-2、IFN-γ和TNF-α)和Th2(IL-4、IL-6和IL-10)细胞因子水平;同时运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测WB中CD4+ T细胞早期活化标记分子CD69的表达百分率。结果:我们所制备的灭活病毒中p24抗原的含量为85.5μg/L;24h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD69的表达百分率为(1.62±0.63)%,PHA组为(38.82±6.00)%,HIV-1(1/500)组为(3.83±1.07)%,HIV-1(1/50)组为(5.94±0.85)%,HIV-1(1/5)组为(9.30±1.22)%;空白对照组WB培养上清中细胞因子主要为IL-6和TNF-α,PHA组中Th1和Th2细胞因子全部升高,3个浓度的HIV-1组中Th1和Th2细胞因子也全部升高。结论:AT-2灭活的HIV-1ⅢB颗粒能够明显引起WB中CD4+ T细胞活化,并上调WB培养上清中Th1和Th2细胞因子的水平,其机制可能是除了HIV-1病毒蛋白的作用外,HIV-1出胞时,许多宿主细胞来源的免疫分子整合到病毒颗粒包膜中,而模拟抗原提呈细胞,从而产生免疫调节作用。
黄秀艳曾耀英赵令斋林长乐
关键词：细胞因子类CD4^+T细胞
清开灵注射液体外抑制HIV-1作用被引量：2
2009年
目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用。方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后,与MT-2细胞混合培养,2 h后在荧光下计数融合细胞数目,评价QKL对两种细胞早期融合的影响;用MTT法检测QKL对HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞的保护作用;用HIVp24抗原试剂盒检测HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞的培养上清p24抗原的含量,分析QKL对HIV-1复制的影响。结果:QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞的CC50分别为1/50.76和1/36.97;抑制H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞早期融合作用的EC50=1/235.29,SI=6.36;对HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞保护作用的EC50=1/144.93,SI=3.92;抑制p24抗原产生作用的EC50=1/175.44,SI=4.75。结论:QKL体外有抗HIV-1活性,作用机制可能是多靶点的,可抑制病毒进入细胞和胞内复制。
赵令斋曾耀英黄秀艳曾祥凤林长乐唐先高
关键词：清开灵注射液细胞融合
清开灵注射液对小鼠T细胞行为和DTH的影响被引量：3
2008年
【目的】研究清开灵注射液(QKL)对小鼠T细胞体外活化、增殖、细胞周期和迟发型超敏反应(DTH)的影响,探讨其免疫调节作用及机制。【方法】不同浓度的QKL作用于小鼠淋巴细胞4h后,加入刀豆蛋白A(ConA)刺激,于不同时间点收获细胞,利用流式细胞仪检测T细胞的活化、增殖和细胞周期分布情况;将小鼠分为正常对照组、二硝基氟苯(DNFB)诱导的DTH模型组和QKL治疗组,通过分析小鼠脾脏指数和耳朵肿胀率评价QKL对DTH的影响。【结果】ConA刺激12h后,T细胞表面CD69表达率为63.1%±1.3%,QKL下调CD69的表达,加入浓度为1/1280、1/320和1/80的QKL后,CD69表达率依次降为56.2%±2.4%、51.9%±2.8%和39.1%±1.4%,与ConA对照相比,差异有统计学意义(P<0.05);各浓度QKL明显降低ConA刺激的细胞增殖指数,且呈一定的浓度依赖性。对细胞周期分布的影响表现为:QKL增加ConA激活的细胞中处于S期和G2/M期的细胞数目,降低处于G0/G1期的细胞数目;体内应用QKL治疗小鼠DTH的结果为:QKL治疗组小鼠脾脏指数为4.96±0.90,与模型组(脾脏指数为5.78±0.85)相比,P<0.05;发病耳的肿胀率为28.4%±4.2%,与模型组(肿胀率为42.4%±4.6%)相比,P<0.01。【结论】QKL是一种有效的负向免疫调节剂,能抑制体内外的免疫反应,抑制T细胞的活化和增殖可能是其作用机制之一。
赵令斋曾耀英黄秀艳曾祥凤侯会娜尹乐乐
关键词：清开灵注射液细胞活化细胞周期迟发型超敏反应
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