中央高校基本科研业务费专项资金(JUSRP31002)
- 作品数：5 被引量：22H指数：3
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- Clostridium cellulolyticum D-塔格糖3-差向异构酶基因的克隆、表达及酶活性被引量：7
- 2011年
- D-塔格糖3-差向异构酶是生物法生产新型功能性因子D-阿洛酮糖最为有效的酶。作者克隆到一种新型的D-塔格糖3-差向异构酶基因,来源于微生物Clostridium cellulolyticumH10。以pET-22b(+)为载体质粒,E.coliBL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重组菌,IPTG可诱导目的蛋白质的过量表达;经亲和层析纯化的重组蛋白质样品进行SDS-PAGE分析,在约31 000处出现显著的特征蛋白质条带;活性检测结果表明:该重组酶具有较高的转化活性。
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- 关键词：克隆
- Clostridium bolteae ATCC BAA-613 D-塔格糖3-差向异构酶的诱导表达、纯化及活性研究被引量：2
- 2012年
- D-塔格糖3-差向异构酶是生物法生产新型功能性因子D-阿洛酮糖最为有效的酶。一种新型的能够编码D-塔格糖3-差向异构酶的基因CLOBOL_00069被克隆,它来源于Clostridium bolteae ATCC BAA-613。以pUC57为克隆载体,以pET-22b(+)为载体质粒,E.coli BL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重组工程菌。IPTG诱导剂诱导目的蛋白的表达;通过镍柱亲和层析,杂蛋白与目的蛋白得到了很好的分离。对纯化的重组蛋白样品进行SDS-PAGE分析,在约32ku处出现明显的特征条带。通过活性研究表明,Clostridium bolteae ATCC BAA-613 DTEase属于DTEase家族,并具有较高的生物转化率,反应10h后转化率达到20%。
- 储菲菲沐万孟邢庆超周榴明张涛江波
- 关键词：基因重组
- 耐热β-半乳糖酶在乳酸克鲁维酵母及毕赤酵母中的表达研究被引量：4
- 2011年
- 将嗜热脂肪芽孢杆菌来源的耐热β-半乳糖酶基因bgaB分别插入穿梭质粒pKLAC1、pPIC9k的α-因子信号肽下游,构建bgaB基因的乳酸克鲁维酵母真核表达载体pKLAC1-bgaB及毕赤酵母真核表达载体pPIC9k-bgaB。载体经酶切线性化后采用电击方法分别转化到乳酸克鲁维酵母K.lactis GG799及毕赤酵母GS115中,并通过同源区各自整合到宿主基因组中。重组酶进行镍柱纯化、Western Blot杂交鉴定及酶学性质分析。结果表明,耐热β-半乳糖苷酶在酵母表达系统中可以实现外源表达且热稳定性保持良好,但不能被酵母系统有效分泌。
- 董艺凝王霁昀陈海琴张灏陈卫
- 关键词：乳酸克鲁维酵母毕赤酵母酶学性质
- D-阿洛酮糖的分离纯化被引量：10
- 2011年
- 通过生物法以D-果糖为原料生产D-阿洛酮糖,产物的分离纯化采用阴阳离子交换树脂脱色脱盐,再通过DTF-Ca2+型离子交换树脂进行分离纯化。最佳分离条件:柱温60℃,10mL进样量,1mL/min流速。通过高效液相色谱测定,分离得到的D-阿洛酮糖纯度为98.3%。
- 邢庆超沐万孟江波周榴明储菲菲张涛
- 关键词：离子交换树脂纯化
- D-塔格糖3-差向异构酶的固定化研究
- 2012年
- 从14种离子交换树脂和吸附树脂中,筛选出固定化效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂D301-Ⅲ为载体,以戊二醛为交联剂,通过先吸附后交联的方法对D-塔格糖3-差向异构酶的固定化进行研究。结果表明,最佳固定化条件为:加酶量为2.00mL/g(粗酶液/树脂),吸附pH7.5,吸附时间为8h,吸附温度为30℃,戊二醛浓度为0.05%,交联时间为3h,固定化酶活回收率可达50%以上。固定化酶重复使用10次,酶活仍能稳定保持在初始酶活的65%以上,具有良好的操作稳定性。
- 周林芳储菲菲张涛江波
- 关键词：树脂固定化
