国家自然科学基金(30170209)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：中国CDC辐射防护与核安全医学所浙江理工大学苏州大学更多>>
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- 携带人可溶性TRAIL基因的重组腺病毒在肺癌细胞中的转染效率及表达特性研究
- 2010年
- 目的研究重组腺病毒感染肺腺癌细胞A549的转染效率及重组腺病毒介导的人可溶性肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(hTRAIL95-281)基因的体外表达。方法用不同感染滴度(MOI)(0-10 000 VP/cell)的重组腺病毒Ad-CMV-EGFP转染A549细胞后48 h收集细胞,经流式细胞仪检测其转染效率,并在共聚焦荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;用MOI为5 000 VP/cell的Ad-CMV-EGFP感染肿瘤细胞后不同时间(24 h、48 h、72 h和96 h)收集细胞,经流式细胞仪检测其转染效率;用重组腺病毒Ad-CMV-hTRAIL95-281感染293T细胞后不同时间收集培养物用ELISA方法检测上清中的TRAIL表达。结果重组腺病毒载体对A549细胞的转染效率和绿色荧光蛋白表达在一定范围内随着MOI的增加而增高,MOI为5 000 VP/cell时转染效率达峰值,MOI为10 000 VP/cell时转染效率反而降低。重组腺病毒转染A549细胞后72 h内转染效率随时间的变化而增高,峰值为98%,96 h有所降低(P<0.05)。转染重组腺病毒Ad-CMV-hTRAIL95-281的293T细胞在转染后24 h表达量最高(P<0.001),达到131.45 pg/ml,48 h时TRAIL蛋白表达量明显降低(P<0.01),72小时也有继续降低的趋势。结论重组腺病毒在适宜的MOI值下,在A549细胞中96小时内均有较高的转染效率,且重组腺病毒介导的可溶性hTRAIL基因在体外能够有效表达。
- 朴春姬田梅杨巍李修义
- 关键词：重组复制缺陷型腺病毒A549转染效率肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体
- 类胰岛素生长因子-1何以折叠成2种高级结构的分子基础
- 2007年
- 胰岛素和IGF-1属于同一超家族,具有共同的结构模体和非常类似的三维结构,但两者的折叠行为却迥然不同。胰岛素和单链胰岛素(PIP)折叠成唯一的热力学稳定的三维结构,而IGF-1则折叠成两种热力学稳定的三维结构。即是说:IGF-1的同一序列编码两种折叠信息。是序列中的什么部位决定胰岛素/PIP和IGF-1具有不同的折叠行为?这是一个极为有趣且长期为人们所困惑的问题。本实验室在PIP和mini-IGF-1工作的基础上,用蛋白质工程技术先后设计表达了一系列胰岛素和IGF-1的杂交分子,阐明了胰岛素和IGF-1不同折叠行为的分子基础。此外,还研究了文昌鱼胰岛素类似肽(aILP)的体外再折叠,结果提示胰岛素和IGF-1的不同折叠行为是由它们的祖先分子aILP分支进化而来的。
- 黄启龙程龙霄冯佑民
- 关键词：胰岛素蛋白质折叠
