国家自然科学基金(30672292)
- 作品数：10 被引量：32H指数：4
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- 过氧化氢对人晶状体上皮细胞增生及VEGF表达的影响被引量：11
- 2008年
- 目的:研究不同浓度的过氧化氢(H2O2)对体外培养的人晶状体上皮细胞增生及VEGF表达的影响。方法:体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04,在培养液中分别加入浓度为1,10,100nmol/L;1,10,100μmol/L和1mmol/L的过氧化氢处理40min,对照组无过氧化氢,随后在正常培养液中继续培养,在0,6,12和24h用MTT方法检测晶状体上皮细胞的增生活力;在24h用ELISA方法检测培养液上清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果:在培养液中加入1nmol/L^10μmol/L浓度的H2O2处理组,晶状体上皮细胞增生率(A值)随浓度较对照组明显增加,其中以10nmol/L最为明显;而100μmol/L,1mmol/L处理组,晶状体上皮细胞出现生长抑制。ELISA检测结果显示,1nmol/L^10μmol/L的过氧化氢刺激后,VEGF水平均高于对照组,且呈浓度依赖性,峰值出现在10nmol/L和10μmol/LH2O2处理组。结论:低浓度(1nmol/L^10μmol/L)的H2O2可以促进晶状体上皮细胞增殖,并使VEGF分泌增加;提示VEGF可能作为一种氧化应激产物,对晶状体上皮细胞起到保护、免受损伤的作用。
- 关小荣周健惠延年张自峰杜倩张乐
- 关键词：晶状体上皮细胞过氧化氢氧化应激VEGF
- 基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制剂系统与糖尿病眼部并发症被引量：3
- 2014年
- 基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制剂（MMPs/TIMPs）系统是降解和重塑细胞外基质（ECM）最重要的酶系统,它参与调节眼的一些生理和病理过程,如眼的发育、炎症、伤口愈合、新生血管形成、肿瘤转移等,与多种眼病,如增生性玻璃体视网膜病变、增生型糖尿病视网膜病变、糖尿病性白内障、孔源性视网膜脱离、视网膜母细胞瘤、年龄相关性黄斑变性、眼外伤、青光跟等的发生密切相关.就MMPs/TIMPs系统的生物学特性及其在糖尿病眼部并发症研究方面的应用进行综述.
- 任美侠周健
- 关键词：基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶组织抑制剂糖尿病视网膜病变白内障角膜病变
- 白细胞介素1、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α对人晶状体上皮细胞移行的作用被引量：1
- 2012年
- 背景晶状体上皮细胞（LECs）在保持晶状体的透明性方面发挥重要的作用。研究表明炎症反应参与了一些类型白内障的形成过程，且炎性因子对LECs的生物学行为产生影响，但其对LECs移行的影响尚不明确。目的探讨白细胞介素1d（IL-1d）、IL-1B、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF—α）及4种炎性因子混合物对人LECs细胞系HLEB-3迁移的影响。方法HLEB-3细胞用含质量分数0．5％胎牛血清的DMEM培养液进行饥饿培养，将10μg/L的IL—1α、IL—1β、IL-6、TNF—α及这4种炎性因子的混合物分别加入培养液中作用24h后进行细胞划痕实验和Transwell实验。于上述因子处理后即刻和24h在倒置显微镜下观察并用数码相机记录划痕区，在200倍显微镜下计数划痕线内移行的细胞数量。Transwell实验24h后取出小室用质量分数4％多聚甲醛溶液固定15min，草酸铵结晶紫溶液染色2min，于倒置显微镜下观察，选取12：00、3：00、6：00和9：00位以及中心部位5个观察区在200倍显微镜下进行细胞计数，以评价炎性因子对LECs移行的作用。用仅含0．5％胎牛血清的DMEM培养液进行培养的LECs作为空白对照组。结果划痕实验结果表明，各种炎性因子作用后24h，对照组划痕区LECs数量明显低于IL-1β作用组及TNF—α作用组，差异均有统计学意义（P=0．000、0．000），混合因子组划痕区细胞数量均明显高于IL-1β作用组及TNF-α作用组，差异均有统计学意义（P=0．000、0．000）；IL-1α作用组、IL-6作用组与对照组比较，划痕区细胞数量差异均无统计学意义（P=0．600、0．098）。Transwell实验显示，混合因子组作用24h小室膜下层LECs密度最大，与IL-α作用组、TNF—α作用组相比差异均有统计学意义（P=0．000、0．000），且IL-α作用组、TNF—α作用组小室膜下层LECs数量均多于对照组，差异均有统计学意义（P=0.000、0．000）。IL—1α作�
- 杜敏娟周健
- 关键词：炎性因子晶状体上皮细胞细胞移行
- Src-家族酪氨酸激酶特异性抑制剂对H_2O_2介导的晶状体上皮细胞Ca^(2+)内流的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察Src-家族酪氨酸激酶(SFK)抑制剂PP1对H2O2诱导的晶状体上皮细胞(LECs)内游离钙离子(Ca2+)浓度变化的影响。方法用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM负载人晶状体HLE-B3,用激光共焦显微镜观察在不同浓度H2O2刺激后细胞内Ca2+的荧光强度变化;进一步用0.1nmol/LPP1、0.3μmol/(L·min)过氧化氢酶和DMSO分别预处理细胞,观察在常规Ca2+、低Ca2+和高Ca2+培养基条件下H2O2刺激后细胞内Ca2+荧光强度的变化,评价PP1对H2O2诱导的LECs内Ca2+的作用。结果不同浓度H2O2刺激后细胞内游离Ca2+浓度升高,呈剂量依赖效应。用0.1mmol/LH2O2刺激细胞,在常规Ca2+培养基中,PP1组和过氧化氢酶组细胞内Ca2+荧光强度增长幅度与DMSO组比较分别降低(28.5±4.2)%、(33.8±3.7)%,差异均有统计学意义(q=3.73,P<0.05;q=4.21,P<0.05)。在低Ca2+培养基中,3个组细胞内Ca2+荧光强度增强均不明显;在高Ca2+培养基中,PP1组、过氧化氢酶组的荧光强度增加幅度较DMSO组分别降低(13.5±1.8)%和(21.3±2.4)%(q=5.58,P<0.01;q=7.11P<0.01)。常规Ca2+和高Ca2+培养基中,PP1组和过氧化氢酶组细胞内Ca2+荧光强度增长幅度的差异均无统计学意义(q=3.04,P>0.05;q=2.76,P>0.05)。结论 SFK特异性抑制剂PP1能有效抑制H2O2诱导的LECs的Ca2+内流,从而阻断依赖Ca2+激活的信号转导途径,阻止皮质性白内障的发生。
- 汪沙周健
- 关键词：过氧化氢晶状体上皮细胞钙离子
- 高浓度葡萄糖体外对人晶状体上皮细胞整合素连接激酶表达的影响被引量：5
- 2008年
- 目的:观察体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04在高浓度葡萄糖条件下细胞的增殖活性及整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的表达变化。方法:用人晶状体上皮细胞系SRA01/04,在培养液中加入不同浓度的葡萄糖溶液,使糖浓度分别为5.5mmol/L(正常对照组),15.5mmol/L,30.5mmol/L和50.5mmol/L,并设立5.5mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇组(甘露醇对照组)。细胞经过处理0,6,12,24,48,72h后,用MTT法检测晶状体上皮细胞的增殖活性,并用Western blot法检测细胞在30.5mmol/L葡萄糖处理6,12,72h后ILK蛋白表达量的变化。结果:高糖作用下晶状体上皮细胞的增殖活力高于正常对照组和甘露醇组,在30.5mmol/L组最为明显,而且随高糖暴露时间的延长,在48,72h时细胞的增殖活力增加更显著。30.5mmol/L葡萄糖作用6,72h,晶状体上皮细胞ILK蛋白的表达明显增高,分别是正常组的1.25和1.28倍,而甘露醇并不引起ILK的表达增加。结论:高浓度的葡萄糖促进人晶状体上皮细胞的增生,使细胞中ILK的表达量增加,这些变化并不依赖于高糖引起的高渗透压改变。
- 杜倩周健惠延年张自峰张乐关小荣
- 关键词：人晶状体上皮细胞高浓度葡萄糖整合素连接激酶
- Na^+-K^+-ATP酶活性及其α_1催化亚基在鸡晶状体中的分布被引量：1
- 2009年
- 目的对Na+-K+-ATP酶催化亚基蛋白在鸡晶状体的上皮层、周边部和中央部纤维的分布和酶活性进行检测和比较。方法将部分胚胎第10天(E10)的鸡晶状体显微解剖为晶状体上皮部、周边部纤维和中央部纤维3个部分,剩余部分制备冰冻切片。利用免疫荧光染色和Western blot方法检测Na+-K+-ATP酶催化亚基(α)在晶状体各部分的表达,通过检测哇巴因敏感的ATP水解率测定Na+-K+-ATP酶的活性。结果在晶状体切片上,α1催化亚基蛋白在晶状体上皮细胞(LECs)膜上有很强的表达,而在晶状体纤维细胞膜的表达明显减弱,在周边部上皮细胞的表达有明显的极性,而在中央部上皮细胞中未见表达。Western blotting检测也再次证实α1催化亚基蛋白在LECs中的表达明显高于在晶状体纤维中的表达。上皮层Na+-K+-ATP酶的活性是周边部纤维酶活性的2倍,是中央部纤维酶活性的11倍。结论Na+-K+-ATP酶α1催化亚基蛋白在鸡晶状体的上皮细胞和纤维上表达;在鸡晶状体上Na+-K+-ATP酶及其活性的分布是不均一的。
- 何芳周健
- 关键词：NA+-K+-ATP酶晶状体
- 用BrdU标记滞留细胞联合Sox2表达检测晶状体干细胞
- 2013年
- 目的检测小鼠晶状体上皮细胞中可能存在的晶状体干细胞及其分布位置。方法 60只(60眼)Balb/c小鼠随机分为BrdU标记组和生理盐水对照组,每组各30只(30眼)。BrdU标记组以150mg·kg-1剂量的10g·L-1BrdU每天2次腹腔注射,连续注射10d。生理盐水对照组以15mL·kg-1生理盐水每天2次腹腔注射,连续注射10d。在BrdU或生理盐水注射结束后0周、1周、2周、3周、4周、6周、8周、10周、12和14周分别处死3只小鼠,制备眼球冰冻切片。通过免疫荧光化学染色观察晶状体上皮BrdU标记细胞的量和分布变化。在BrdU标记组,通过免疫荧光化学染色观察0周、4周、8周、12和14周晶状体上皮细胞Sox2蛋白的表达及分布规律。通过BrdU-Sox2双标记免疫荧光染色观察BrdU-Sox2双标阳性细胞。结果 BrdU标记组在完成BrdU标记时(0周),晶状体上皮中央区和赤道区BrdU标记率均达100%;随着时间延长,中央区和赤道区的BrdU标记率逐渐下降,至12周时降至最低,中央区和赤道区分别为14.23%、5.86%(P=0.000);14周时中央区和赤道区分别为14.97%、6.11%(P=0.000),分别与12周时两区比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。0周、4周、8周、12周和14周时,中央区Sox2阳性细胞率分别为3.74%、3.47%、4.23%、4.09%和3.70%,赤道区Sox2阳性细胞率分别为0.66%、0.37%、0.47%、0.33%和0.51%,各时间点中央区与赤道区Sox2阳性细胞率差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Sox2在晶状体上皮细胞内表达稳定,主要分布于中央区。部分BrdU阳性细胞表达Sox2,即BrdU-Sox2双标阳性细胞,集中分布于晶状体上皮中央区。结论表达Sox2的标记滞留细胞可能是晶状体干细胞,主要分布于晶状体上皮中央区。
- 王潆周健
- 关键词：BRDUSOX2标记滞留细胞
- 高压氧治疗在眼病治疗中的应用进展被引量：2
- 2009年
- 高压氧治疗在临床上已被用于多种眼科疾病的治疗,其中包括伴有视觉症状的动脉气体栓塞和减压病、视网膜血管阻塞性疾病、眼及眼周的气性坏疽、鼻眼脑型毛霉菌病、眼周坏死性筋膜炎、有视觉症状的一氧化碳中毒后遗症、放射性视神经病变、放射线或者丝裂霉素C所致的巩膜坏死等。本文就高压氧治疗对眼部疾病治疗的原理、适应证和有效性进行综述。
- 宋毅果周健
- 关键词：高压氧治疗眼病适应证
- ILK siRNA对高浓度葡萄糖诱导的人LECs增生和上皮向间质转化的抑制作用被引量：6
- 2009年
- 目的探讨整合素连接激酶(ILK)对高浓度葡萄糖诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)增生和转化的作用。方法将体外培养的人LECs系SRA01/04细胞分别培养在含葡萄糖5.5mmol/L(正常对照组)和30.5mmol/L(高糖组)的培养液中,用RT-PCR检测培养0、6、24h后ILK mRNA的表达;用ILK siRNA脂质体转染细胞,转染6h后,加入2组培养液处理24h,检测ILK、细胞增生核抗原(PCNA)、LECs转化指标α-SMA和FN在mRNA水平的表达。结果高糖组培养6h和24h,SRA01/04细胞ILK mRNA是正常对照组的2.48倍和2.32倍(P<0.01),刺激后24h,SRA01/04细胞PCNA、α-SMA、FN的mRNA表达分别是正常对照组的1.75、1.96和1.75倍(P<0.01)。ILK siRNA干扰后,正常对照组ILK的表达是非转染细胞的30%,高糖组转染细胞ILK mRNA水平(P<0.01)是非转染细胞的21%(P<0.01),转染细胞PCNA、α-SMA和FN的表达分别是非转染细胞的29%、33%和39%(P<0.01)。结论高浓度葡萄糖可诱导LECs增生、上皮向间质转化及ILK表达上调,抑制ILK的高表达能阻止这些过程。
- 储昭节周健惠延年
- 关键词：整合素连接激酶细胞增生晶状体上皮细胞
- Src-家族酪氨酸激酶对皮质性白内障晶状体中缝隙连接蛋白的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨抑制Src-家族酪氨酸激酶的异常激活在皮质性白内障的形成中对晶状体缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响。方法分离10d的鸡胚胎全晶状体并在M199培养液中培养10d为对照组;加入0.1nmol/LSFK特异性抑制剂PP1作为PP1组。观察2组晶状体的混浊程度、计算晶状体的混浊面积百分比。对培养1、5、10d的晶状体细胞进行WGA、DAPI免疫荧光染色,观察晶状体组织学改变及Cx43分布和表达量的变化。在晶状体前囊膜上进行Lucifer Yellow染料负荷试验,测量染料弥散距离,评价缝隙连接的功能。结果对照组晶状体的混浊面积百分比在4d、10d分别为26%和50%,而PP1组为20%和14%(P<0.01)。培养5d、10d对照组晶状体上皮细胞(LECs)出现死亡,Cx43主要在LECs间表达;PP1组LECs死亡明显减少,Cx43的表达在上皮与纤维的交界面明显增强。在培养后1d、10d,对照组染料弥散距离与PP1组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论在体外培养鸡胚晶状体模型中,PP1可能通过保护Cx43缝隙连接功能以保持晶状体上皮组织结构正常,减缓皮质性白内障的发生。
- 裴瑞周健
- 关键词：缝隙连接蛋白43晶状体白内障
