广东省中医药管理局科研基金(2009191)
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- TLR2基因稳定沉默膀胱癌细胞株T739-TLR2Δ建立及生物学特征鉴定
- 2010年
- 目的通过载体表达的RNA干扰技术(RNAi)阻断小鼠膀胱癌T739细胞TLR2基因的表达,建立TLR2基因稳定沉默的细胞株。方法构建3种pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-TLR2重组质粒,脂质体法转染T739细胞,用RT-PCR法筛选干扰效果最强的重组质粒。再将该重组质粒转染T739细胞,用杀稻瘟菌素筛选抗性细胞克隆,即获得TLR2受体及其mRNA稳定表达最低的稳转细胞株,并鉴定其生物学特征。结果测序结果显示设计合成的DNA片段已正确插入载体,将沉默效果最强的重组质粒pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-TLR2转染T739细胞,筛选出有效沉默T739细胞TLR2基因表达的细胞株T739-TLR2Δ。TLR2mRNA和受体表达分别下降95%和90%以上;T739-TLR2Δ细胞增殖指数降低、群体倍增时间延长,未发现明显凋亡细胞。结论构建pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-TLR2重组质粒能稳定抑制T739细胞TLR2表达,可用于研究TLR2基因在T739细胞的功能与作用。
- 危建安曾星韩凌黄羽
- 关键词：RNA干扰基因沉默TOLL样受体2膀胱肿瘤
