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甘肃省科技攻关计划(GK972-2-81A)
作品数:
2
被引量:5
H指数:2
相关作者:
贺雪姣
朱任之
郁荣
杨国嵘
薛永杰
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相关机构:
解放军第一医院
兰州大学
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发文基金:
甘肃省自然科学基金
甘肃省科技攻关计划
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相关领域:
医药卫生
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医药卫生
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原核表达
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作者
2篇
何晓霞
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薛永杰
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杨国嵘
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郁荣
2篇
朱任之
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贺雪姣
传媒
1篇
中国病理生理...
1篇
西北国防医学...
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1篇
2007
1篇
2005
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胶原沉积抑制因子cDNA的分子克隆及其在大肠杆菌DH5α的表达
被引量:3
2005年
目的:获取胶原沉积抑制因子(Decorin)互补脱氧核糖核酸(cDNA)并在大肠杆菌DH5α中表达出成熟蛋白。方法:用巢式逆转录聚合酶链反应(nest-RT-PCR)法从体外培养的成纤维细胞(2BS)中获取Decorin cDNA,克隆入pMD18-T载体。测序后,将成熟蛋白区亚克隆入pGEX-4T-1中,用PCR法、限制性酶切和测序对融合克隆进行鉴定。经过鉴定的融合克隆在大肠杆菌DH5α中进行表达。结果:获取的1 181 bp的Decorin cDNA片段与基因bank中收录的序列相似性达99.75%;可从GST-Decorin成熟蛋白cDNA融合克隆中扩增出和酶切出1 005 bp的目的片段;融合克隆有完整的开放阅读框架;融合蛋白在大肠杆菌DH5α中成功表达。结论:获取了Decorin cDNA并在大肠杆菌DH5α中表达出GST-Decorin成熟蛋白。
杨国嵘
朱任之
何晓霞
薛永杰
贺雪姣
郁荣
关键词:
克隆
原核表达
胶原沉积抑制因子在大肠杆菌DH5α中的表达特性
被引量:2
2007年
目的:研究人胶原沉积抑制因子(decorin)在大肠杆菌DH5α中的表达特性。方法:用SDS-PAGE法检测pGEX-4T-1-decorin融合克隆在大肠杆菌DH5α中表达,选择阳性表达克隆;测定1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)最佳诱导时间;用超声波裂解法分析GST-decorin融合蛋白的可溶性。用West-ern blotting进行定性分析。结果:用1mmol/LIPTG诱导时,融合蛋白可在大肠杆菌DH5α中表达;最佳诱导时间为4h;大部分融合蛋白以包涵体的形式存在;所表达蛋白为GST融合蛋白。结论:GST-decorin融合蛋白可在大肠杆菌DH5α中大量表达,但以包涵体的形式存在。
杨国嵘
朱任之
何晓霞
薛永杰
贺雪姣
郁荣
关键词:
DECORIN
融合蛋白质类
原核表达
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