国家重点基础研究发展计划(2012CB113904) 作品数:6 被引量:33 H指数:4 相关作者: 陈劲枫 李季 娄群峰 钱春桃 徐建 更多>> 相关机构: 南京农业大学 姜堰区农业委员会 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
黄瓜遗传转化体系优化的研究 被引量:8 2015年 为了提高农杆菌介导的黄瓜遗传转化效率,以亚洲生态型长春密刺、欧洲生态型Poinset76和Marketmore763种黄瓜为材料,筛选了适合遗传转化最佳的基因型,并通过改变培养基固化剂、添加抗氧化剂和有机添加物的方式对遗传转化体系进行优化。结果发现,3种基因型黄瓜中,长春密刺的抗性芽诱导分化表现最佳,而Poinset76和Marketmore76稍差;在脱乙酰吉兰糖胶为固化剂的培养基上,3种基因型的抗性芽诱导率比以琼脂粉为固化剂的培养基诱导率分别高28.21,19.71,15.39个百分点;共培养基中添加50 mg/L抗氧化剂α-硫辛酸时,长春密刺抗性芽诱导率最高达66.67%,平均芽分化数最高达1.32;在选择培养基中添加1.5 g/L的有机添加物水解酪蛋白,长春密刺抗性芽诱导率和平均芽分化数最高,分别为67.15%和1.42。此外,在前人建立的农杆菌介导的遗传转化体系的基础上,得到了以长春密刺为遗传转化的最适基因型,脱乙酰吉兰糖胶为培养基固化剂,共培养基中添加50 mg/Lα-硫辛酸或选择培养基中添加1.5 g/L水解酪蛋白的优化遗传转化体系,极显著提高了外植体抗性芽诱导率和平均芽分化数,推动了黄瓜转基因进程。 李蕾 孟永娇 张璐 娄群峰 李季 钱春桃 陈劲枫关键词:黄瓜 基因型 固化剂 抗氧化剂 有机添加物 黄瓜单性结实候选基因预测与表达分析 被引量:8 2016年 为发掘黄瓜单性结实基因并通过表达分析预测相关基因的功能,以黄瓜单性结实性状QTL定位结果为基础,对主效QTL区段内的基因进行生物信息学分析,发现118个基因与细胞周期、细胞生长以及激素信号传导等生物学过程有关。结合黄瓜单性结实转录组研究结果,共筛选出10个在黄瓜单性结实过程中转录水平有剧烈变化的基因。利用q RT-PCR技术分析这些基因在授粉、未授粉及单性结实的黄瓜果实发育过程中的转录变化,结果表明,Cs CRT1、Cs LON、Cs TRAPPC4、Cs RABEPK和Cs POT基因在单性结实坐果过程中特异性的上调表达,Cs5NG4基因在单性结实和授粉结实过程中呈相反表达趋势,因此推测这6个基因为黄瓜单性结实候选基因。本研究为进一步利用候选基因资源改良现有黄瓜栽培品种的单性结实性奠定了基础。 张婷 武喆 张开京 徐建 娄群峰 李季 陈劲枫关键词:黄瓜 单性结实 基因预测 基于iTRAQ技术的黄瓜单性结实分子机理及生长素受体基因功能验证研究 单性结实是指子房在缺少授粉或其他刺激的条件下成功发育成为果实的现象。果实正常坐果与发育通常依赖于成功的授粉受精,而授粉受精容易受到不利环境因素影响.进而造成果实产量下降与品质降低。单性结实不仅能够避免因种子发育不良造成减... 徐建关键词:黄瓜 单性结实 分子机理 文献传递 西双版纳黄瓜多心室性状的QTL定位 被引量:5 2015年 【目的】西双版纳黄瓜是中国特有的黄瓜种质资源,有多心室特性。在探明西双版纳黄瓜多心室性状表现及遗传规律的基础上进行多心室QTL定位,为进一步了解其分子机理和标记辅助育种奠定基础,也为黄瓜果实性状改良提供有益参考和帮助。【方法】对‘北京截头’黄瓜(CC3,3心室)和西双版纳黄瓜(SWCC8,5心室)不同时期的子房进行石蜡切片观察;基于以‘北京截头’黄瓜和西双版纳黄瓜为亲本构建的含124个株系的F9代RIL群体,利用已完成的遗传图谱,结合两个季节的RIL群体心室数目统计结果进行多心室QTL定位分析。【结果】石蜡切片观察发现,西双版纳黄瓜子房由5个心皮内卷构成多心室的结构,与3心室黄瓜相比,其子房横径大且胎座数量多;QTL定位分析发现5个控制多心室性状的QTL(LOD>2.5),分别分布在1、2、6号染色体上,其中位于1号染色体上的QTL ln1.1和ln1.3在2013年秋季、2014年春季这两季统计结果中都稳定存在,ln1.1在两季的LOD值分别为10.96和9.24,贡献率分别为39.24%和20.49%,位于标记SSR16472—SSR12070。ln1.3在两季的LOD值分别为27.31和21.45,贡献率分别为75.90%和47.11%,位于标记UW083751—SSR04278,认为这两个位点是控制多心室的主效QTL,其余位点为微效位点。ln1.1区段的遗传距离为6.3 c M,物理距离为0.97 Mb,包含159个基因。ln1.3区段的遗传距离为4.9 c M,物理距离为2.07 Mb,包含227个基因。在ln1.1和ln1.3区段内分别预测了2个调控多心室性状的基因,包括2个WD40重复蛋白基因(Csa1M071910.1和Csa1M072490.1)和2个Aux/IAA生长素应答基因(Csa1M231530.1和Csa1M207820.1)。【结论】位于1号染色体上的ln1.1和ln1.3是控制多心室性状的主效QTL。预测2个参与植物激素信号转导的基因Csa1M207820.1和Csa1M231530.1,以及2个与WD40重复蛋白相关的基因Csa1M071910.1和Csa1M072490.1为候选基因。 张开京 宋慧 薄凯亮 李季 马政 娄群峰 钱春桃 陈劲枫关键词:西双版纳黄瓜 QTL定位 石蜡切片 黄瓜T-DNA插入突变体库的构建 被引量:3 2016年 [目的]为了进一步研究黄瓜基因的功能,本文构建了黄瓜T-DNA插入突变体库。[方法]以黄瓜栽培品种‘长春密刺’子叶节为转化外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方法,将T-DNA插入突变载体pROK2后转化黄瓜;通过筛选压力梯度试验,确定遗传转化体系最适合的卡那霉素(Kan)筛选浓度;使用PCR检测和斑点杂交方法鉴定T0和T1代转化植株;以‘长春密刺’植株为对照,统计T1代植株表型。[结果]确定100 mg·L-1为最适合的Kan抗性芽筛选浓度。T0代植株PCR检测结果初步证明,pROK2成功整合到14S1和14S2两个T0代株系基因组中。14S1自交后获得55个T1代单株,对其进行PCR检测,发现其中12个单株均扩增出了35S和NPT-Ⅱ片段。以Dig标记的35S和NPT-Ⅱ为探针,对这12个单株及随机从剩余T1代中选取的11个单株进行斑点杂交检测,得到了2个含有35S和NPT-Ⅱ杂交信号的单株:14S1-27和14S1-34。性状调查统计显示:T1代植株在生长各阶段相对于野生型无明显突变表型。[结论]pROK2重组质粒成功整合到了14S1株系的基因组中。对14S1自交后代的PCR检测和斑点杂交检测结果进一步证明了14S1为转化植株,确定14S1为插入突变体。结合T-DNA插入位点鉴定技术可进一步开展相关基因分离及功能研究工作。 李蕾 李季 孟永娇 张璐 娄群峰 钱春桃 陈劲枫关键词:黄瓜 T-DNA 插入突变 转基因 黄瓜细胞分裂素合成关键酶IPT基因家族序列特征及其表达分析 被引量:7 2013年 为了分析黄瓜 IPT 家族基因,以及黄瓜 IPT 基因 CsIPT 与果实发育的关系,以黄瓜单性结实自交系‘EC1’和非单性结实自交系‘8419s-1’为试材,应用荧光定量 PCR 技术,在分析不同器官中CsIPT 表达特征的基础上,寻找果实发育中的作用基因,进一步分析这些基因在果实发育过程中的表达特征。结果表明:8 个黄瓜 IPT 基因(CsIPT1 ~ CsIPT8)核苷酸相似性在 17.3% ~ 33.2%范围内,氨基酸长度在 280 ~ 504 AA 之间,具有共同的 ATP/GTP 结合功能域[(A,G)-X4-G-K-(S,T)],CsIPT4 氨基酸序列中包含有一个锌指基序(C-X2-C-X12,18-H-X5-H)类似序列;黄瓜幼果中 CsIPT3、CsIPT5、CsIPT7 和 CsIPT8表达水平较高;CsIPT1、CsIPT3、CsIPT4 和 CsIPT5 的表达量在未发育的果实中有增加的趋势,CsIPT2和 CsIPT8 在未发育的果实中表达基本无变化,而在授粉后发育的果实中表达量很高,说明这两个基因可能与授粉后黄瓜果实发育调控有关。此外,CsIPT2 在天然单性结实材料‘EC1’果实发育早期表达较高,推测其在黄瓜单性结实果实发育中发挥着重要作用。 张停林 李季 崔利 苏芃 徐建 陈劲枫关键词:黄瓜 单性结实 IPT 黄瓜生长素响应因子CsARF10亚家族3个基因的克隆与表达分析 被引量:3 2013年 利通过蛋白序列同源比对和 PCR 技术从黄瓜中克隆获得了 3 条生长素响应因子 ARF10 基因序列,分别命名为CsARF10a、CsARF10b和CsARF10c。系统发育进化树分析发现CsARF10a与番茄SlARF10基因进化距离较近,而 CsARF10b 和 CsARF10c 与拟南芥 AtARF10 相似性更高;启动子分析显示 CsARF10家族基因具有多样化的激素应答元件,荧光定量 PCR 结果也证明黄瓜幼苗在不同 NAA 浓度处理以及其他激素的处理下,CsARF10 家族基因呈现不同的表达模式;荧光定量 PCR 结果还显示 CsARF10 家族基因在黄瓜幼苗的根、茎、叶及雄花中都具有较高的转录水平;CsARF10a、b、c 在黄瓜果实发育的早期具有相同的表达趋势,但 CsARF10a 的转录水平较高,而 CsARF10b 和 CsARF10c 表达量较低。 郭勤卫 李季 崔利 张停林 Kere George Mbira 陈劲枫关键词:黄瓜 基因克隆