上海市科学技术委员会资助项目(034119849)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 重组卡介苗和传统卡介苗免疫原性的比较被引量：3
- 2009年
- 目的观察分泌人白细胞介素（IL）-2的重组卡介苗（rBCG）和传统卡介苗（BCG）对小鼠免疫应答的影响，评价其免疫原性，初步探讨rBCG免疫治疗的作用机制。方法连续6周对BALB／C小鼠尾静脉注射rBCG和BCG，分别在第2、4和6周后杀死小鼠取腹腔巨噬细胞和脾脏。以一氧化氮（NO）释放量检测巨噬细胞吞噬活性，以淋巴细胞刺激指数（SI）反映细胞增殖能力，以流式细胞仪测定T淋巴细胞CD亚群分化和酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清细胞因子分泌的变化，比较rBCG治疗组和BCG治疗组之问的差异。结果在连续6周观察期间，随着免疫时间的延长，rBCG对小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖能力逐渐增强，CD4＋、CD8＋T细胞和CD4＋／CD8＋的比例逐渐增高，腹腔巨噬细胞的吞噬活性逐渐增高，诱导小鼠脾淋巴细胞分泌的Th1型和Th2型细胞因子逐渐增多。在同一时点上，不同rBCG和BCG的上述作用均高于空白对照组（P均0．01），差异有统计学意义；rBCG治疗组的上述作用均高于BCG治疗组。结论rBCG具有良好的免疫原性，能明显增强BALB／c小鼠的免疫应答反应。rBCG诱导的T细胞免疫应答主要是CD4＋T细胞依赖的，CD4＋细胞免疫应答主要是以Th1型细胞因子参与为主，Th2型细胞因子也发挥一定作用。
- 刘海涛夏术阶孙晓文韩邦旻阮渊卓见
- 关键词：卡介苗免疫原性免疫应答
- 分泌人白介素-2的重组卡介苗构建、表达与鉴定
- 2006年
- 目的构建分泌人白介素-2(IL-2)的重组卡介苗(BCG)。方法采用PCR技术从BCG基因组中扩增出Ag85B的信号肽基因序列,从pBIL-2质粒中扩增出IL-2cDNA全长序列。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pMV261结核杆菌HSP60启动子下游,构建一个分泌型的卡介苗穿梭表达质粒pMSIL-2。利用电穿孔技术将质粒pMSIL-2转入BCG得到重组BCG,分别用PCR扩增和Western blotting检测重组BCG菌体和培养上清中IL-2的DNA和蛋白表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测重组BCG培养上清中IL-2的含量。结果酶切鉴定、PCR扩增和DNA测序分析结果均表明,所克隆的信号肽DNA片段和IL-2片段与文献结果完全一致,pMSIL-2的连接方向正确,阅读框与预期完全一致。以重组BCG质粒DNA为模板,通过PCR扩增得到IL-2的基因片段,Western blot证实重组BCG分泌的蛋白能与人IL-2的抗体特异性结合,ELISA法检测到重组BCG培养上清中高含量的IL-2。结论构建的重组BCG能够分泌具有功能活性的细胞因子IL-2,有望成为膀胱肿瘤免疫治疗的一种有效方法。
- 刘海涛孙晓文凡杰王丰卓见夏术阶
- 关键词：膀胱肿瘤白细胞介素-2卡介苗
