江苏省自然科学基金(BK2006563)
- 作品数：5 被引量：64H指数：5
- 相关作者：徐剑宏祭芳史建荣陆琼娴杨慧勇更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院浙江大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省农业科学院科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)人工抗原及多克隆抗体的研制被引量：7
- 2008年
- 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxyn ivalenol,DON)是一种半抗原,没有免疫原性。为了制备抗DON的抗体,必须对其进行结构修饰,加大DON的分子量。本研究采用保护-去保护策略使DON的C3上的羟基与琥珀酸酐反应,使DON衍生后获得1个羧基。利用薄层色谱法跟踪反应进程,反应产物采用薄层色谱法纯化,高效液相色谱和电喷雾离子化质谱(ESI-MS)分析,得出[M+H]+为397.2,确认为3-半琥珀酰-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-HS-DON)。3-HS-DON与载体蛋白采用碳化二亚胺法进行偶联,偶联物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,推断偶联成功,并研制出多克隆抗体。
- 祭芳李华陈怀谷徐剑宏陆琼娴史建荣
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇结构修饰
- 赤霉毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)酶联免疫检测方法研究被引量：18
- 2007年
- 【目的】建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法,以保证麦类作物的安全生产以及谷物食品的安全性。【方法】以主要赤霉病菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)为对象,利用半琥珀酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇的牛血清蛋白偶联物(3-HS-DON-BSA)作免疫原,分别采用腹膜腔注射法和颈、背部多点注射法免疫Balb/c小鼠和豚鼠,获得DON的多抗血清,建立间接ELISA检测方法。【结果】多抗豚鼠血清的效价达到1∶6400,而小鼠混合血清的效价则为1∶12800。引起DON抗体最大结合50%抑制时,所需DON及其类似物3-Ac-DON和T-2毒素的量分别为63μg·ml-1、114μg·ml-1和>1000μg·ml-1;相对交叉反应率分别为100%,55.2%和6.3%。包被抗原的最适工作浓度为1/1500,小鼠血清工作浓度为1/1600。在包被原和小鼠血清的最适工作浓度下,20%以上的甲醇稀释度对DON免疫分析有显著的影响,低于10%浓度的甲醇对DON免疫分析基本无影响。建立的间接竞争ELISA法检测范围为0.01～100μg·ml-1,检出限为0.02μg·ml-1,平均回收率为82%～93%,精密度(CV%)为4.65%～21.3%。【结论】本文提出的毒素检测方法,检测成本低,方便易行,不仅可以应用于小麦赤霉病的病理学研究,也可广泛应用于谷物及其制成品中DON毒素的含量检测,具有较好的应用价值。
- 李华祭芳徐剑宏王裕中史建荣
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫学检测ELISA小麦赤霉病
- 小麦与赤霉病菌互作的分子机理研究进展被引量：5
- 2007年
- 为了让小麦科技工作者对小麦与赤霉病菌互作的分子机制有一个全面的了解,从小麦赤霉病抗性的遗传规律、抗性基因的分子定位、互作过程中寄主相关的防卫反应基因、赤霉病菌的致病机理及抗病转基因等方面进行了综述。小麦赤霉病抗性是由2-3个主效基因和几个微效基因决定的数量性状,在3BS、5A、6BS等染色体上均发现了与赤霉病抗性相关的QTLs。其中相关的分子标记可以直接用于小麦抗赤霉病的分子标记辅助选择。运用双向电泳、cDNA文库构建、抑制差减杂交文库构建等方法已经分离到很多受赤霉病菌诱导的抗病相关蛋白（或基因）,如：-β1,3-葡聚糖酶、病程相关蛋白、细胞色素P450及几丁质酶基因等。通过小麦转基因,已经获得了小麦对赤霉病菌的初步抗性。但是这种抗性只是在一定程度上减轻或延迟赤霉病菌的侵染,而最直接的小麦抗赤霉病基因还有待于发掘和验证。
- 林凡云陆琼娴杨慧勇徐剑宏祭芳史建荣
- 关键词：小麦赤霉病基因定位QTL
- 谷物真菌毒素的控制策略被引量：26
- 2007年
- 谷物真菌毒素主要是作物在生长阶段或者谷物存放过程中受到真菌感染而由真菌产生的次生代谢产物。被真菌毒素污染的食物和饲料对人和动物具有严重的急慢性毒性,因此研究去除毒素污染的途径,将有效保障谷物类产品的食用安全。本文综述了控制毒素产生的策略,及各种真菌毒素去除方法,主要包括控制真菌生长以减少毒素的产生,利用物理去除、化学吸附方法去除毒素,以及通过化学分解或酶促降解毒素等,并分析了这些方法的应用前景。
- 徐剑宏祭芳陆琼娴杨慧勇史建荣
- 关键词：真菌毒素降解食品安全
- 抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备被引量：8
- 2008年
- 【目的】小麦赤霉病菌产生的毒素不仅在病害发展过程中具有加重赤霉病的作用,而且污染谷物导致严重的食用安全性问题。由于赤霉病的普遍发生,有必要建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法,本试验旨在制备可用于检测被脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的粮谷类特异性单克隆抗体。【方法】本实验首先将脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的衍生物3-半琥珀酰-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-HS-DON-OVA)与卵清蛋白(OVA)采用碳化二亚胺法进行偶联得到人工抗原,以此人工抗原免疫BALB/C小鼠,取该鼠脾细胞与SP2/O鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,得到了1株能稳定分泌DON抗体的单克隆细胞株(3B2),并制备单克隆抗体腹水。【结果】经检测3B2的抗体类型及亚类均为IgG1,其轻链为κ链。腹水通过间接酶联免疫吸附测定效价在1×10-7以上。该单克隆抗体与脱氧雪腐镰刀菌烯醇特异性结合反应的50%抑制质量浓度为29μg/L,除与3-acetyldeoxynivalenol(3-Ac-DON)的交叉反应率为78.38%,与其他脱氧雪腐镰刀菌烯醇结构类似物无交叉反应。【结论】本实验所制备的单克隆抗体有较高的灵敏度和特异性,具有较好的应用价值。
- 祭芳陈正贤徐剑宏陆琼娴史建荣
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体酶联免疫吸附测定
- 抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备
- 用与牛血清蛋白(BSA)交联的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)人工抗原(3-HS-DON-OVA)免疫的 BAI B/C 鼠脾细胞与 SP 2/O 鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,得到了1株能稳定分泌 DON 抗体的单克隆细...
- 祭芳史建荣陈正贤徐剑宏陆琼娴
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体酶联免疫吸附测定
- 文献传递
