国家高技术研究发展计划(2002AA245051)
- 作品数：28 被引量：123H指数：7
- 相关作者：毕英佐曹永长陈溥言焦新安潘志明更多>>
- 相关机构：扬州大学华南农业大学南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 减毒鼠伤寒沙门氏菌介导的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的实验免疫效果研究被引量：21
- 2006年
- 将运送H5亚型禽流感病毒DNA疫苗重组减毒鼠伤寒沙门氏菌以1.0×1010CFU剂量口服接种1日龄SPF雏鸡,结果表明重组菌对雏鸡具有良好的安全性。将重组菌SL7207(pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-HA)以2×109CFU的剂量两次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,同时,将重组菌分别与pVAX1-IFN-γ或pVAX1-IL2(200μg/只)联合免疫,通过测定小肠粘膜抗体效价,结果显示,重组菌单独免疫组和联合免疫组能激发机体产生粘膜免疫应答,且与空载体组、空白对照组以及油苗组之间存在显著性差异(P<0.05)。攻毒后,免疫保护结果显示无论是重组菌单独免疫组还是联合免疫组均与空载体组和空白对照组之间存在显著性差异(P<0.05),而重组菌单独免疫组与联合免疫组之间不存在显著性差异,说明重组菌SL7207(pVAX1-HA)和X4550(asd-pVAX1-HA)能够提供机体抵抗HPAIV H5亚型强毒攻击的良好的免疫保护作用,这为进一步筛选出基于粘膜免疫途径的新型禽流感基因工程疫苗奠定了基础。
- 焦凤超焦新安潘志明黄金林张小荣刘秀梵
- 关键词：减毒沙门氏菌DNA疫苗禽流感病毒免疫效力
- 以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性
- 根据Genbank中已经发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列,设计一对引物,通过RT-PCR扩增鹅源H5亚型高致病性禽流感病毒HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd-pVAX1得到重组表达载体pV...
- 张小荣焦新安潘志明张晓明黄金林张如宽刘秀梵
- 关键词：减毒沙门氏菌DNA疫苗H5亚型禽流感病毒免疫原性
- 文献传递
- 重组新城疫病毒HN与F蛋白免疫保护作用的初步研究被引量：1
- 2005年
- 95只1日龄SPF鸡随机分成5组,1～4组分别于10日龄接种ΦT4、ΦT4-Z1-HN、ΦT4-Z1-F、ΦT4-Z1-HN+ΦT4-Z1-F油乳剂疫苗,第5组接种ND弱毒疫苗,25日龄加强免疫一次。结果表明,重组HN和F蛋白均能诱导ND抗体产生,但抗体水平显著低于用弱毒疫苗免疫的第5组。60日龄时用100LD50NDV强毒株攻毒,第1组鸡100%发病和死亡,ΦT4-Z1-HN和ΦT4-Z1-F免疫组的死亡率分别为50%和15.8%;用ΦT4-Z1-HN+ΦT4-Z1-F和ND弱毒疫苗免疫的第4、5组鸡无一死亡。
- 刘铀毕英佐曹永长陈绍红
- 关键词：重组新城疫病毒HN蛋白F蛋白免疫保护作用基因工程疫苗
- 新城疫病毒F基因重组噬菌体的构建及其免疫原性被引量：3
- 2005年
- 用PCR方法扩增不含信号序列、长度为1566bp、编码522个氨基酸的新城疫病毒(NDV)F基因片段,将其克隆至pR质粒获得重组质粒pR-F,以此转化大肠杆菌E2,用溶菌酶缺陷噬菌体T4-Z1感染重组E2菌,F基因经同源重组整合到噬菌体基因组中,用PCR方法筛选重组噬菌体并命名为T4-Z1-F。将T4-Z1-F制备成油乳剂疫苗免疫10日龄SPF鸡,25日龄加强免疫1次。结果表明,表达F蛋白的重组噬菌体具有良好的免疫原性,可诱导免疫鸡产生特异性抗体并对NDV强毒攻击提供部分免疫保护。
- 刘铀毕英佐曹永长
- 关键词：新城疫病毒免疫原性SPF鸡诱导免疫R质粒油乳剂
- 表达绿色荧光蛋白的重组CVI988病毒的构建及特性被引量：9
- 2003年
- 提取马立克氏病毒Ⅰ型疫苗毒株CVI988的总DNA为模板,利用PCR技术扩增出病毒生长非必需的US2基因并克隆入T-easy载体。将CMV启动子和增强子控制的含GFP基因表达盒克隆入US2基因中,成功构建了含GFP基因的转移质粒载体pGUS2GFP。用脂质体将其与CVl988株共转染CEF细胞,用96孔板稀释法得到纯化的表达绿色荧光蛋白的重组CVI988病毒株rCVIGFP,并分别测定其在体内和体外的生长情况。表达EGFP基因的重组病毒在细胞上生长曲线与亲本毒CVI988类似,体外实验表明,1日龄腹腔接种该重组毒后,可以从鸡体内分离到表达绿色荧光的病毒。
- 张雪莲范伟兴周玉传缪德年钱莺娟陈溥言
- 关键词：绿色荧光蛋白重组病毒马立克氏病病毒
- 传染性法氏囊病病毒超强毒地方株HN01的分离鉴定及分子系统进化分析被引量：2
- 2005年
- 用分离的疑为鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒(vvIBDV)地方分离株HN01,经处理后接种SPF鸡,36h后接种鸡开始发病,发病率为100%,死亡率为70%以上。剖检可见与野外病例相同的病理变化,如肌肉、腺胃、心脏出血,法氏囊水肿且多呈"紫葡萄"样外观。经血清学试验、毒力试验、鸡胚接种试验、分子生物学和电镜形态学观察均证明该分离物为超强毒株,从而证明河南省鸡群中存在不同于IBDV一般强毒株、经典株和变异株的超强毒株。通过对IBDV不同毒株VP2基因高变区氨基酸序列的聚类分析发现,HN01与华南超强毒株G9201、欧洲超强毒株UK661关系最接近,而与HK46,OKYM,D6948,UPM92-04和KS等毒株关系依次渐远。
- 贾赟张素芳周斌王旭东王川庆赵玉军陈溥言
- 关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒株VP2系统进化树
- 不同异源启动子与MDVgB启动子及其复合启动子的活性比较被引量：1
- 2006年
- 为了选择适宜的启动子调控外源基因的表达,以改善马立克氏病病毒为载体的重组病毒的免疫保护力。将hCMV立即早期启动子及增强子、SV40早晚期启动子及增强子或hCMV立即早期增强子的部分序列分别与马立克氏病病毒(MDV)自身的囊膜糖蛋白B基因(gB)启动子核心部分在体外杂合,分别构建复合启动子PhCMV-gB、PSV-gB或Pen-gB;将这些启动子与虫荧光素酶报告基因相连,构建表达载体。利用脂质体将以上质粒与内标质粒(pSV-β-LacZ)共转染鸡胚成纤维次代细胞,于转染后48h,将细胞刮下来,利用荧光素酶测定试剂盒和β-半乳糖苷酶测定试剂盒分别测定转染细胞的荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性,通过荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性的比值获得虫荧光素酶的相对活性,利用虫荧光素酶的相对活性进行启动子的活性比较。结果表明,复合启动子相对马立克氏病病毒自身的gB启动子,活性有不同程度的提高,其中复合启动子PhCMV-gB的活性最高,而复合启动子PSV-gB和Pen-gB的活性相当;但与商业强启动子相比,复合启动子活性要弱一些或相当。因此,从某种意义上讲,这些复合启动子既具有gB启动子的一些特性,又有商业强启动子的一些特性,为以马立克氏病毒为载体的新兴疫苗的开发奠定了基础。
- 邱亚峰葛菲菲徐学清陈溥言
- 关键词：马立克氏病病毒虫荧光素酶
- 表达GFP基因的马立克氏病病毒(MDV)转移载体的构建及初步应用被引量：3
- 2006年
- 利用Primerprimer5.0软件设计两条引物,将loxP位点分别引入正、反向引物,以质粒载体pIRESgpt为模板,扩增获得LoxPCMVgptIRESLoxP基因表达盒(约2.9kb),将其克隆入质粒pBUS10(含有MDVUS10区)的BalI位点,获得重组质粒pUSgptIRES(L);对重组质粒pUSgptIRES(L)进行测序分析,发现两同向的loxP位点正确插入到pUSgptIRES(L)中;将含有完整的GFP基因以及polyA尾的基因片段,连入pUSgptIRES(L)中,把gpt基因替换掉,从而获得重组质粒pUSGFPIRES(L)。将转移载体pUSGFPIRES(L)瞬时转染CHO细胞,可以观察到绿色荧光,说明GFP基因获得有效表达;将pUSGFPIRES(L)转染已感染MDVCVI988株的CEF细胞,可以筛选到表达绿色荧光蛋白的重组病毒;通过测定重组病毒在细胞上的生长曲线,发现重组病毒与亲本毒生长曲线相吻合。为进一步探讨MDV在体内的特性奠定基础,同时,为Cre/LoxP重组酶系统在MDV中的应用奠定基础。
- 邱亚峰葛菲菲张雪莲陈溥言
- 关键词：马立克氏病病毒绿色荧光蛋白LOXP位点重组病毒
- 表达IBDV VP2融合蛋白的重组MDV的构建及其免疫特性
- 将增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)与鸡传染性法氏囊病病毒(1BDV)的VP2基因融合,插入马立克氏病毒(MDV)CVI988／Rispens的非必需区US10片段中,成功构建表达VP2融合蛋白的MDV CV1988 转...
- 刘红梅秦爱建刘岳龙金文杰叶建强陈鸿军邵红霞李迎晓
- 关键词：传染性法氏囊病病毒重组病毒VP2
- 文献传递
- 融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8^+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定被引量：5
- 2004年
- 依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经PCR扩增和序列测定分析,证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒pYAGFPL＿O,将此重组质粒pYAGFPL＿O转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,获得重组沙门氏菌X4550(pYAGF PL＿O)。用SDS＿PAGE电泳测得重组菌表达的融合蛋白约为30kD。同时,荧光显微镜下观察到X4550(pYAGFPL＿O)发出黄绿色荧光。这些结果表明LCMV和OVAT细胞表位已成功表达。重组菌X4550(pYAGFPL＿O)的获得为研究沙门氏菌载体携带外源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础。
- 王芳焦新安潘志明张晓明黄金林Richard Lo-ManClaude Leclerc刘秀梵
- 关键词：绿色荧光蛋白T细胞表位减毒鼠伤寒沙门氏菌
