教育部科学技术研究重点项目(109148)
- 作品数：13 被引量：29H指数：3
- 相关作者：华进联胡玥张姗姗于萌王龙更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 奶山羊睾丸组织冷冻保存及复苏后精原干细胞的分离培养被引量：4
- 2011年
- 以关中奶山羊为材料,比较了2种玻璃化冷冻法和1种慢速冷冻法对睾丸组织保存的效率,复苏后发现3种冻存方法均有较高的成活率(超过50%),其中玻璃化Ⅱ组达65%以上,培养及检测后均有精原干细胞存活,在体外培养可以形成胚胎干细胞样克隆,其表达精原干细胞和多能性干细胞的相关特异性标记:碱性磷酸酶(AP)、CD49f、CD133、C-Myc、Oct4和Klf4阳性,证明睾丸组织冷冻可以提供一种有效的奶山羊精原干细胞的保存方法。试验中所使用的低温保存方法简便易行,效果良好,表明这些方法可为癌症治疗等造成的无精症及少精症等不育症患者的医治以及一些珍稀濒危物种和优良畜禽的生殖细胞保存提供一种简捷有效的途径。
- 朱海鲸华进联宋文聪黄建升田泽华
- 关键词：睾丸组织精原干细胞奶山羊
- 小鼠Dazl基因融合蛋白表达载体的构建及转染被引量：1
- 2013年
- 根据NCBI数据库上公布的小鼠Dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠Dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-Dazl,单双酶切和测序验证正确。将pEGFP-C1-Dazl质粒转染293和NIH-3T3细胞,荧光显微镜下观察到融合表达的绿色荧光蛋白,且呈胞质表达;对照组转染pEGFP-C1,绿色荧光遍布整个细胞。Dazl蛋白的免疫荧光试验也证明重组载体转染后,Dazl基因和GFP共同定位于胞质部分。pEGFP-C1-Dazl融合蛋白表达载体的成功构建为进一步研究生殖特异性基因Dazl在小鼠和大型动物的表达特性奠定了一定的基础。
- 王龙周莹胡玥于萌白耀富华进联
- 关键词：小鼠生殖细胞绿色荧光蛋白
- 表观遗传学与生殖细胞发育分化研究发展被引量：1
- 2010年
- 从DNA甲基化修饰、组蛋白甲基化和乙酰化修饰、基因印记和RNA干扰等几个方面,综述了表观遗传学的基本机制及其对哺乳动物生殖细胞发育分化的影响。表观遗传学对于动物机体生长、代谢及功能的正常维持具有重要作用,其中任何方面的异常都会导致体细胞和生殖细胞的生长分化调控失常,甚至引发疾病。
- 孙军伟华进联
- 关键词：表观遗传学甲基化组蛋白生殖细胞
- Retinol促进小鼠雄性生殖干细胞的增殖
- 2013年
- Retinol(RE)作为维生素A的一种,对生命有机体内多种生理生化和代谢反应均有重要的影响。本试验以雄性生殖干细胞(mGSCs)为对象,用RE培养mGSCs,探讨RE对mGSCs增殖的影响。试验分别设置对照组,RE组,RE+LY(LY294002,PI3K抑制剂)组,RE+PD(PD98059,MAPKK抑制剂)组。选取培养不同时间的mGSCs进行半定量与定量PCR分析,检测基因的表达情况。对培养48h的mGSCs进行Brdu荧光染色。结果显示,RE培养能够显著促进mGSCs的增殖,培养后C-myc等增殖标记基因表达上调,加入LY、PD抑制剂后,增殖效果显著降低;表明RE可能通过PI3K或MAPKK促进mGSCs的增殖。本研究证明了RE具有促进mGSCs增殖的作用,对于探明RE对mGSCs增殖调控的机理具有重要意义。
- 褚志礼孙军伟刘超王龙胡玥华进联
- 关键词：RETINOL增殖小鼠
- 维生素A类化合物与生殖细胞发育被引量：1
- 2011年
- 维生素A（VA）是生命有机体内细胞增长、分化、增殖和程序性凋亡的关键调节因子，其参与胚胎发育、组织分化、肿瘤细胞生长等重要过程，对视力、上皮组织及骨骼发育、配子生成及胎儿的生长发育等所必需。视黄酸（RA）是维生素A的生物活性代谢所产生的一种脂溶性的小分子物质，主要由环乙烯、侧链和极性基团组成。根据其双键构型的不同，可分为反式视黄酸和顺式视黄酸。
- 曹晖华进联
- 关键词：维生素A类化合物肿瘤细胞生长组织分化小分子物质视黄酸
- 成年昆明小鼠雄性生殖干细胞的分离培养及其多能性研究被引量：4
- 2010年
- 【目的】从成年昆明小鼠睾丸组织中分离具有多能性的雄性生殖干细胞(Male germline stem cells,mGSCs)。【方法】采用机械法和2步酶消化法分离出成年昆明小鼠的精原细胞,经差速贴壁后,培养在小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,2周后得到类胚胎干细胞(ESCs)样mGSCs。对得到的mGSCs进行碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色、RT-PCR、体内分化等检测。【结果】mGSCs具有类似ESCs的形态和多能性,AP染色呈阳性,免疫荧光Oct4、Vasa染色呈阳性,RT-PCR检测其表达Oct4、Nanog、Sox2等多能性基因和Vasa、C-kit等生殖细胞的标记基因,在免疫缺陷鼠体内能形成畸胎瘤,组织学检测其可形成包括3个胚层在内的多种类型细胞。【结论】从成年昆明小鼠睾丸分离的精原细胞,在体外培养去分化形成了具有类ESCs生物学特性的mGSCs,mGSCs既具有多能性,也具有生殖细胞的基本生物学特性。
- 潘少辉胡玥张姗姗王静李飞飞高志敏杨春荣华进联
- 关键词：精原细胞多能性
- Figla基因过表达促进小鼠胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化被引量：3
- 2012年
- 生殖系a因子(Figla)是最早表达的生殖细胞特异性转录因子之一,对卵泡的发育、Zp基因的表达和透明带的形成具有调节作用.Figla基因异常会引起卵巢早衰的发生.本研究通过PCR自小鼠基因组中扩增出Figla基因,将其克隆到真核报告载体pDsRed1-N1,构建了携带609 bp的Figla重组载体pDsRed1-N1-Figla.用该载体转染小鼠胚胎干细胞(mESCs)系J1、小鼠成纤维细胞系NIH-3T3、小鼠畸胎瘤细胞P19和小鼠精原细胞系GC1,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白(RFP)在细胞中的表达,同时检测转染细胞中Figla基因及其它生殖细胞特异性基因的表达.结果显示,转染2 d,mESCs内Figla总表达量明显增加,且内源性表达量亦有所提高,即转入的外源性Figla基因可以促进内源性Figla的启动和表达.免疫荧光染色显示,表达RFP的细胞同时表达生殖特异性基因Vasa,减数分裂特异性基因Stra8、Scp3及卵母细胞标志基因Zp3.通过QRT-PCR检测发现,在转染3 d的细胞中,Vasa、Scp3和Zp1的表达较对照组均有明显上调,而Oct4和Stra8的表达量下降.研究表明,Figla基因对生殖特异性基因的表达具有调控作用,可以激活雌性生殖基因表达,为更清楚地了解Figla基因在生殖细胞生长发育过程中的调控机制,以及发现该基因在生殖细胞中的新功能奠定了基础.
- 胡玥褚志礼白耀富王龙王一然彭莎华进联
- 关键词：胚胎干细胞
- 关中奶山羊Prm1基因的克隆及真核表达
- 2012年
- 【目的】研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础。【方法】利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较。同时用PCR、western blotting及免疫组化技术检测Prm1在不同年龄雄性关中奶山羊睾丸中的表达。将克隆出的奶山羊Prm1基因与pIRES-GFP载体连接构建重组真核表达载体,转染GC1细胞和人的脐带基质细胞检测Prm1基因的超表达情况。【结果】Prm1基因在成年奶山羊睾丸组织中的表达量很高,且只定位于精子头部,在其它时期的睾丸组织中基本不表达。同时扩增得到了关中奶山羊Prm1基因CDS序列,与其它物种比对,发现其与许多物种具有较高的同源性,与牛的同源性高达97.4%,最后在GC1细胞和人的脐带基质细胞中进行了超表达。【结论】得到了关中奶山羊Prm1基因的表达规律及完整的CDS序列。
- 李明昭刘超孙军伟朱海鲸曹晖吕晓仇普斌华进联
- 关键词：关中奶山羊基因克隆
- Nanos2与生殖细胞发育分化被引量：2
- 2012年
- Nanos在果蝇巾是最先被鉴定的一个母源效应基因，位于早期胚胎的后极^[1]。它编码一种RNA结合蛋白，这种蛋白与Pumilio RNA结合蛋白相互作用形成一种核糖核蛋白复合物一起抑制母源mRNA hunchback的翻译，从而调控果蝇胚胎后腹部细胞的分化^[2-3]。Nanos对果蝇生殖细胞的发育是必需的，此基因缺失的果蝇的生殖细胞产生异常，
- 廉智敏于萌华进联
- 关键词：生殖细胞发育分化RNA结合蛋白蛋白相互作用早期胚胎蛋白复合物
- Nanos3与生殖细胞发育分化被引量：3
- 2012年
- 小鼠Nanos3基因是果蝇Nanos的同源基因,是Nanos基因家族的一员.Nanos3是一种RNA结合蛋白,靠近其C端有两个非常保守且连续的Cys-Cys-His-Cys特异锌指结构域.研究显示,Nanos3在小鼠生殖细胞中特异表达,不仅在原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的维持方面发挥重要作用,而且是一种启动雄性生殖细胞分化程序的内源性因子,其在精子发生中的重要作用已引起越来越多的关注.探讨Nanos3的生物学功能,有助于了解生殖细胞发育过程中的部分重要机制.本文就Nanos3维持生殖细胞更新和原始生殖细胞的维持等作用作一综述.
- 于萌廉智敏华进联
- 关键词：自我更新生殖细胞
