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用RDA技术筛选与造血相关的新基因: 2000年; 目的建立4月龄人胎肝组织差异表达基因(expressed sequence tag,EST)文库,并分离未知功能基因以寻找造血相关的新基因。方法表达性差异显示分析(representational difference analysis,RDA)、核苷酸序列分析、竞争PCR及Northern杂交。结果建立了4月龄人胎肝组织差异表达基因EST文库。该文库富集了造血及肝生长调控相关基因,部分克隆序列测定及分析表明该文库含有重要的未知功能新基因,且有一株新基因可能与红细胞增殖、分化有关。结论用RDA技术建立EST文库为研究胚胎肝组织特异表达基因提供了有力的工具。; 王丹汪思应许望翔魏汉东杨晓明; 关键词：造血胎肝 RDA 新基因人胎功能基因

一种新型丝氨酸苏氨酸激酶CPK的初步克隆及功能被引量：2: 2005年; 从人胎肝cDNA文库中分离到一种cDNA ,推测的蛋白氨基酸序列具有明显的丝氨酸苏氨酸激酶结构域,可能编码一种新的丝氨酸苏氨酸激酶(命名为CPK ,cellproliferationassociationkinase) .CPKmRNA全长约3 0kb .RT PCR检测表明CPKmRNA在增殖活跃组织或细胞如人胚胎组织、肿瘤细胞株中呈高丰度表达,在成人组织则呈低丰度或不表达.利用PCR技术扩增大鼠同源cDNA ,以此为探针,Northern杂交发现CPK表达于多种成年小鼠组织,以脑组织丰度最高.小鼠2 3肝部分切除可迅速诱导CPKmRNA的表达,在术后2 4～4 8h达高峰,与2 3肝部分切除后细胞增殖期吻合.以小鼠同源cDNA片段为模板,合成RNA探针,原位杂交显示在胚胎发育期CPK低丰度表达在大多数组织,以神经系统组织变化最大,在第8d胚胎神经管内皮细胞中即出现表达,11～13d在端脑、脑膜、间脑、脊神经节表皮细胞、海马、小脑神经胶质细胞等多种神经细胞中表达且丰度较高,16d后这些组织的表达迅速下降到较低水平,表明CPK可能与神经系统的生长发育有一定关联.利用信号通路检测技术,观察到CPK的表达对MAPK ,p38MAPK途径的激活有明显的影响,并可显著增强表皮生长因子对这两条途径的激活,提示该激酶可能参与细胞因子的信号转导.; 汪思应陈兵许望翔詹轶群崔玉芳李长燕杨晓明

胚胎肝发育相关基因-1在氯高铁血红素诱导分化的红白血病细胞中的表达被引量：2: 2000年; 目的　研究胚胎肝发育相关基因 1(EDAG 1)在红系肿瘤分化中的表达及意义。方法　用细胞生物学、RT PCR及Northern杂交法。结果　含 4 0× 10 -5mol·L-1氯高铁血红素 (Hemin)的RPMI 16 40培养K5 6 2细胞 5天 ,可使70 %～ 80 %细胞呈现正常红系特征 ;EDAG 1、c fos表达降低。结论　Hemin可诱导红白血病细胞分化 ;EDAG 1、c fos表达下调可能与其有关。; 王丹汪思应胡兆平许望翔杨晓明; 关键词：氯高铁血红素红白血病

一株与大鼠肝细胞再生相关的新cDNA克隆被引量：1: 2002年; 目的 :用表达性差异显示分析 (RDA)技术发现的一株新基因为目的基因。研究该基因与肝细胞再生的可能关系及在组织中的分布等初步的生物学功能。方法 :用狭线杂交、Northern杂交、RT -PCR、cDNA文库筛选及序列分析法研究新基因cDNA序列、组织分布及初步功能。结果 :从大鼠胎肝cDNA文库中筛选出该基因的克隆 ;杂交等证实其在肝大部切除后表达迅速上调 ,在EGF诱导的肝细胞及肿瘤组织中呈高丰度表达 ;对该基因进行序列测定并获得全长核苷酸序列 ;分析表明该核苷酸序列仅编码 70余个氨基酸。结论 :该基因与肝细胞再生相关 ;可能仅编码小分子多肽或其N -端具有更长的序列。; 汪思应程洁郑红张平张宝霆许望翔魏汉东杨晓明; 关键词：CDNA克隆肝细胞肝部分切除肝再生

Rapid induction of mRNAs for PC3 by partial hepatec-tomy and epidermal growth factor被引量：3: 2001年; The expression of immediate early gene plays a pivotal role in rat hepatocyte proliferation from G0 to G1 phases and the progression through G1 phase of the cell cycle within several hours after 2/3 hepatectomy. We investigated the different gene expressions within 1 h after 2/3 hepatectomy by representational difference analysis. Sequence analysis indicated that PC3 induced by NGF was a kind of immediate early gene and might be correlated with liver regeneration. Moreover, we found that 2/3 hepatectomy could induce the expressing of PC3 mRN A by Northern blot with a peak 1-2 h after surgery. In primary cultures of rat hepatocytes, addition of EGF resulted in rapid and transient induction of PC3 mRNA. It was first reported that PC3 gene belongs to immediate early gene associated with liver regeneration.; WANG GeWANG SiyingXU WangxiangYANG Xiaoming; 关键词：REGENERATION IMMEDIATE GENE PC3

用PCR技术从cDNA文库中获取目的基因长片段被引量：2: 2003年; 目的　建立一种简便有效的获取cDNA大片段的实验技术。方法　应用PCR原理 ,设计特异引物结合文库载体引物对大鼠胎肝cDNA文库进行PCR扩增 ;用随机引物标记法标记已知小片段“目的基因”(30 0bp± )作为探针 ,对PCR产物进行Sorthern杂交以检验“目的基因”片段的正确性及长度 ;回收“目的基因”片段并连接入PGEM T载体 ,转染JM 10 9并扩增后 ,提取“目的基因”测序。结果　琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增产物有多条不同长度的段 ,Sorthern杂交发现一段长度为 1 5kb的cDNA片段为“目的基因” ;测序结果与GeneBank进行Blaste分析 ,该基因为一株新的序列 ,已在GeneBank中登录注册 (RatLiverRegeneration relatedPro tein 1,RLRP 1AF2 36 0 5 4 )。; 汪思应郑红程洁余科科许望翔李俊; 关键词：PCR技术 CDNA文库分子生物学

肝部分切除及表皮生长因子迅速诱导PC3基因的表达被引量：9: 2000年; 2/3肝部分切除后数小时内早期反应基因的表达在肝细胞由G0到G1期的转变和G1期进程中起关键作用. 利用表达性差异显示分析技术研究了2/3肝部分切除后1 h的基因表达差异, 序列分析揭示一种由神经生长因子(NGF)诱导产生的瞬时早期反应基因PC3基因可能与肝再生调控有关, 进而以Northern杂交证实2/3肝部分切除可迅速诱导PC3基因的表达, 其表达高峰为术后1～2 h, EGF在原代培养大鼠肝细胞体系中可迅速诱导表达PC3基因, 提示PC3基因是一种与肝再生调控密切相关的早期反应基因.; 王阁汪思应许望翔杨晓明; 关键词：肝再生肝部分切除细胞

TEC酪氨酸激酶基因是一种与肝再生调控相关的早期反应基因被引量：7: 2001年; 肝再生过程中立即早期反应基因的表达在成熟肝细胞由G0 期向G1期的转变中起着关键作用 .为探讨肝再生早期基因表达的变化 ,利用表达性差异显示分析 (RDA)技术研究了 2 3肝部分切除后 1h再生肝选择性基因表达 ,发现一株TEC酪氨酸激酶同源序列存在于差减产物中 ,RNA狭缝杂交证实确为差异表达基因 .从大鼠肝cDNA文库中分离其全长cDNA ,序列分析结果表明 ,该基因为小鼠人TEC酪氨酸激酶的同源体 ,进而以该cDNA为探针 ,用Northern杂交证实 2 3肝部分切除后TEC酪氨酸激酶基因在 1h内呈现瞬间表达增加 ,其表达水平较基础水平增高 2 5倍 ;在原代培养大鼠肝细胞体系中 ,EGF可迅速诱导TEC基因表达 ,且不被蛋白合成抑制剂阻断 .结果表明 ,TEC基因是一种与肝再生调控密切相关的早期反应基因 .; 汪思应王阁许望翔魏汉东杨晓明; 关键词：肝再生立即早期基因

用差异显示杂交技术筛选与造血相关的新基因被引量：4: 2000年; 目的　建立 4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库 ,并分离未知功能基因以寻找造血相关的新基因。方法　表达性差异显示技术 (RDA)、核苷酸序列分析、竞争PCR及Northern杂交。结果　建立了 4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库。该文库富集了造血及肝生长调控相关基因 ,部分克隆序列测定及分析表明该库含有重要的未知功能新基因 ,具有一株新基因可能与红细胞增殖、分化有关。结论　RDA技术为寻找新的基因提供了有效的手段。; 汪思应卢海妹郑红王丹胡兆平许望翔魏汉东杨晓明; 关键词：造血系统 RNA

用表达性差异显示分析技术分离人胎肝组织选择性表达基因被引量：2: 2001年; 目的 :建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,为研究胚胎肝组织特异表达基因提供有力的工具。方法 :采用表达性差异显示分析 (representationaldifferenceanalysis,RDA)技术建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,并测定部分克隆核苷酸序列 ,以竞争PCR检测代表性基因的差异表达。结果与结论 :以珠蛋白家族基因为标志 ,所建差减cDNA文库中α 珠蛋白家族基因的表达频率较未差减cDNA文库增高 7倍 ,同时该文库也含有多种与肝生长密切相关的基因 ,表明RDA技术确是研究差异表达基因的有效手段 ,所建EST库富集胎肝特异表达基因 .部分克隆序列分析获得 2种未报道序列 ,其中一株含有丝 /苏氨酸激酶结构域。; 许望翔魏汉东汪思应杨晓明; 关键词：人胎肝基因表达基因分离

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