农业部全国畜牧总站动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题(2010ZD103)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：刘中华郑新民肖红卫刘西梅乔宪凤更多>>
- 相关机构：湖北省农业科学院西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：农业部全国畜牧总站动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题湖北省国际科技合作项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 两种方法研究不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰效应
- 2010年
- 目的:旨在观察不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰作用。方法:采用体外培养的Vero细胞,选用不同茎部长度串联shRNA表达载体+EGFP表达载体+脂质体转染的方法,将构建好的干扰载体转染Vero细胞,然后使用实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。在小鼠腿部肌肉注射干扰质粒,实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。结果:转染Vero细胞时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的4.3%、3.0%和6.9%;小鼠腿部肌肉注射干扰质粒时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的2.5%、1.3%和5.1%。结论:在细胞和个体水平,不同茎部串联干扰载体对目的基因的抑制效应均很明显(达到90%以上),比单一位点产生的沉默效应要强许多,不同茎部长度干扰效应彼此间差异不显著。
- 肖红卫刘中华刘西梅郑新民乔宪凤李莉
- 关键词：SHRNA表达载体EGFP基因沉默效应干扰质粒PEGFP-C1脂质体转染
- 不同长度茎部shRNA表达载体构建与鉴定
- 2010年
- 本研究针对同一目的基因设计构建不同茎部长度的shRNA表达载体,并对其在细胞及胚胎水平的干扰效应做一比较。以绿色荧光蛋白基因为沉默效应的靶基因,设计茎部长度分别为21bp、27bp、29bp的干扰片段,退火后连入带有H6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中(分别命名为EGFP-21siRNA、EGFP-27siRNA和EGFP-29siRNA),将构建成功的载体以脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞,利用荧光定量PCR对其荧光表达进行精确定量。不同茎部长度的shRNA载体均使绿色荧光蛋白基因表达降低,茎部为29bp时比21bp、27bp表现出更明显的沉默效应。细胞水平沉默效应的初步验证,为筛选适合小鼠个体水平的最佳发夹结构奠定了基础。
- 刘中华乔宪凤肖红卫刘西梅王华岩郑新民
- 关键词：基因沉默SHRNA绿色荧光蛋白小鼠荧光定量PCR
