国家自然科学基金(31100049)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：初晓宇伍宁丰田健王培立龚攀更多>>
- 相关机构：中国农业科学院生物技术研究所贵州大学扬州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 热稳定性对甲基对硫磷水解酶在毕赤酵母中分泌的影响被引量：1
- 2015年
- 甲基对硫磷水解酶可生物降解有机磷农药,由于其特殊的应用价值,越来越受到人们的关注。来源于苍白杆菌的甲基对硫磷水解酶MPH-Och在毕赤酵母系统中不能有效地分泌表达。将热稳定性提高的突变体MPH-S274Q在毕赤酵母中表达,发现其毕赤酵母重组菌株经摇瓶诱导培养120 h后,培养上清的酶活力达到0.7 U/m L,蛋白分泌量是野生型的14倍,SDS-PAGE电泳图中培养上清有明显的蛋白质条带,进一步证明了分泌效率提高,该结果表明提高蛋白质的热稳定性可以作为提高外源蛋白在毕赤酵母中的分泌效率的一条有效途径。
- 龚攀范家佑田健伍宁丰初晓宇
- 关键词：甲基对硫磷水解酶分泌热稳定性毕赤酵母
- 一株普鲁兰酶产生菌的筛选及其基因克隆和酶学特性研究被引量：3
- 2013年
- 普鲁兰酶作为一种解支酶,能够特异地作用于多糖中的α-1,6糖苷键,将淀粉中高度分支的支链淀粉转变成直链淀粉。本文通过以普鲁兰糖为唯一碳源的功能平板筛选方法,从云南腾冲温泉淤泥中分离到1株产普鲁兰酶的菌株73号,经16S rDNA序列分析,该菌属于厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus sp.)。通过普鲁兰酶的保守区片段扩增及序列比对,最终从该菌中克隆得到普鲁兰酶编码基因pul73,全长2121bp,编码706个氨基酸。将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表达和纯化,获得酶蛋白Pul73最适温度50℃,最适pH6.0,在65℃有较好的热稳定性,保温30min后仍有72%的剩余酶活。50℃时Pul73对普鲁兰糖的Km为1.643mg/mL,其最大反应速度Vmax为1.34U/mg,kcat为535.8/s。
- 王培立初晓宇伍宁丰
- 关键词：普鲁兰酶基因克隆基因表达
- 组合突变提高甲基对硫磷水解酶MPH热稳定性的研究
- 2015年
- 来源于苍白杆菌Ochrobactrum sp.M231的甲基对硫磷水解酶MPH-Och具有优良的催化水解甲基对硫磷农药的能力,针对其热稳定性较差的缺点,通过组合3种提高蛋白热稳定性的突变策略,最终获得热稳定性改良的突变酶MPHM7,其T50达到65℃,在之前研究热稳定性提高的四点突变酶(S274Q/T183E/K197L/S192M)的基础上又提高了5℃。同时,该突变酶的催化效率也获得了一定的提高,其kcat/Km值是四点突变酶的3.8倍。热稳定性改良突变酶的获得证实了这些提高热稳定性的方法是有效的,并且其作用具有加合性,这为分子设计改良酶蛋白热稳定性提供了新的研究思路。
- 罗晓亮顾杏露田健初晓宇伍宁丰
- 关键词：甲基对硫磷水解酶热稳定性
