国家自然科学基金(81001161)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：刘海霞陈必良李佳张建芳董阳超更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学更多>>
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- Clusterin蛋白在大肠杆菌中的表达及其多抗制备
- 2013年
- 目的:在大肠杆菌中表达Clusterin蛋白,并制备其兔抗Clusterin蛋白的多克隆抗体。方法:从MCF-7细胞提取mRNA,逆转录为cDNA,以此为模板PCR扩增Clusterin编码基因;将Clusterin编码区cDNA插入的pRSET-A原核表达载体,构建pRSET-A-clusterin;将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,以IPTG诱导6×His-Clusterin融合蛋白的表达,经亲和纯化柱与凝胶柱进行层析纯化。经SDS-PAGE和Western-blot鉴定后,将纯化的融合蛋白与弗氏佐剂混合制备成油包水悬液,常规免疫新西兰大白兔制备多抗,Western-blot检测该抗体识别内源性clusterin的特异性。结果:成功构建了Clusterin蛋白的原核表达载体pRSETA-clusterin;经表达并纯化的Clusterin蛋白纯度达到98%以上,免疫新西兰大白兔后制备得到了特异性的抗Clusterin的多抗。结论:成功地表达并纯化了Clusterin蛋白,并制备了特异性抗Clusterin多抗。
- 潘鹭翔魏莉杨敬吕欣董阳超徐志凯雷迎峰
- 关键词：CLUSTERIN原核表达蛋白纯化多抗
- HSF1在子宫内膜癌细胞中的表达及其与抗氧化的相关性研究被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨子宫内膜癌细胞在受到过氧化氢刺激时热休克因子1(Heat Shock Factor 1,HSF1)表达的变化,以及HSF1对肿瘤细胞抗凋亡能力的影响。方法:选择子宫内膜癌的Ishikawa、HEC-1-B及RL95-2三株细胞。分别测定细胞中HSF1基因转录以及翻译表达水平。给予细胞不同浓度的H2O2刺激后,检测细胞内HSF1的mRNA表达变化并且统计受刺激后细胞受抑制情况,观察细胞存活和生长与HSF1含量的关系。结果:三株细胞中HSF1mRNA和蛋白表达的基水平不同;在受到H2O2刺激后,细胞内HSF1表达有不同程度的升高;Ishikawa、HEC-1-B细胞分别在受到较高浓度的H2O2刺激后,细胞存活率出现明显下降;而RL95-2细胞在受到相对低浓度的H2O2刺激后,细胞存活率即出现明显降低。结论:一定范围内浓度的H2O2刺激能够上调子宫内膜癌细胞中HSF1在转录以及蛋白水平的表达,而过高的浓度会使细胞中HSF1表达减少,对于不同细胞来说H2O2刺激的适宜浓度不同。而能使细胞增殖与增长发生明显变化的H2O2浓度与细胞内HSF1表达水平相关。
- 梁声茹陈必良李佳张建芳刘海霞
- 关键词：热休克因子1子宫内膜癌过氧化氢氧化应激
