国家自然科学基金(30671084)
- 作品数：9 被引量：72H指数：5
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- 苦荞黄酮提取物的体外抗肿瘤活性研究
- 目的研究苦荞黄酮类提取物在体外对人食管癌细胞株EC9706的增殖抑制和凋亡的影响。方法采用醇提法提取得到苦荞总黄酮,高压液相检测黄酮含量。用MTT法观察不同时间和浓度的苦荞黄酮对人食管癌细胞株EC9706增殖抑制作用。用...
- 闫斐艳李玉英崔晓东王转花
- 关键词：黄酮苦荞细胞凋亡
- 文献传递
- 荞麦胰蛋白酶抑制剂的原核表达及纯化被引量：5
- 2007年
- 根据文献报道的荞麦胰蛋白酶抑制剂的氨基酸序列及本研究室先前已获得的部分基因序列设计引物,经过RT-PCR扩增,获得荞麦胰蛋白酶抑制剂编码区基因全序列.将该基因克隆到原核表达载体pQE-31中,并转化至大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达获得可溶性目的蛋白,其表达量约占菌体总蛋白的25%.该目的蛋白经Ni2+-NTA柱亲和纯化,SDS-PAGE分析显示,在大约9kD处出现明显的目的条带,与预计蛋白分子量大小一致.Western blot鉴定证实,目的蛋白N端带有6个组氨酸标签.活性测定表明,目的蛋白具有专一性的胰蛋白酶抑制剂活性,抑制活性约为77U/mg纯化蛋白.本实验为进一步研究荞麦胰蛋白酶抑制剂结构与功能的关系奠定了基础.
- 李玉英张政李晨王转花
- 关键词：荞麦胰蛋白酶抑制剂抑制活性
- 荞麦生物活性物质的研究进展被引量：18
- 2008年
- 荞麦是一种古老的杂粮作物,在世界一些国家和高寒地区都有种植,在某些地区还是当地的主要粮食作物。由于它的化学和生物学成分独特,目前在食品和医药方面的应用前景十分广阔。本文对其生物活性物质,尤其蛋白酶抑制剂的理化性质及其功能等进行了综述。
- 赵飞王转花
- 关键词：荞麦生物活性物质蛋白酶抑制剂抗肿瘤作用
- TBa过敏原表位区段的表达及免疫活性分析
- 目的确定苦荞过敏原TBa（tartary buckwheat allergen）的主要表位区段,为进一步研究荞麦过敏原结构和功能及低致敏性荞麦品种提供依据。方法以TBacDNA为模板,设计引物,构建TBa的四个表位区段的...
- 任晓霞张政蔡桂红李玉英王转花
- 关键词：表位免疫活性
- 文献传递
- 重组荞麦胰蛋白酶抑制剂对人肝癌细胞的凋亡及半胱氨酸天冬酶活性的影响被引量：10
- 2009年
- 先前的研究表明,基因重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)具有诱导不同肿瘤细胞凋亡的作用.为了揭示其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机理,从基因水平上探讨与凋亡有关的分子事件,本研究用不同浓度的rBTI体外作用于人肝癌细胞HepG2后,采用MTT比色法检测抑制剂对HepG2细胞的抑制率,用DNA凝胶电泳和细胞核的形态学观察检测HepG2细胞的凋亡.结果表明,rBTI在体外能够明显抑制HepG2细胞的增长,并诱导细胞凋亡.另外,细胞凋亡与Bcl-2/Bax mRNA水平有关.通过RT-PCR检测发现,细胞经过rBTI处理后,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA水平下调,促凋亡基因Bax mRNA有所上调,而对照GAPDH无变化.对HepG2细胞中Fas/Fas配体及半胱氨酸天冬酶(caspase)的研究证明,细胞经过rBTI处理后,对死亡受体Fas mRNA没有影响;rBTI可明显激活caspase-3和caspase-9酶活性,对caspase-8活性几乎无影响.上述结果表明,rBTI对HepG2细胞具有明显的诱导凋亡作用,其诱导细胞凋亡的机制与caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关,未涉及Fas/Fas配体途径.
- 李芳李玉英白崇智田欣张政王转花
- 关键词：细胞凋亡人肝癌细胞
- 苦荞黄酮提取物的体外抗肿瘤活性研究
- 目的研究苦荞黄酮类提取物在体外对人食管癌细胞株EC9706的增殖抑制和凋亡的影响。方法采用醇提法提取得到苦荞总黄酮,高压液相检测黄酮含量。用MTT法观察不同时间和浓度的苦荞黄酮对人食管癌细胞株EC9706增殖抑制作用。用...
- 闫斐艳李玉英崔晓东王转花
- 关键词：黄酮苦荞细胞凋亡
- 文献传递
- BTI基因转染诱导EC9706细胞凋亡及G_1阻滞被引量：2
- 2010年
- 为了研究荞麦胰蛋白酶抑制剂(buckwheat trypsin inhibitor,BTI)对肿瘤细胞凋亡与细胞周期的影响,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与BTI融合蛋白真核表达质粒.将BTI基因成功克隆至pEGFP-N1中转染食管癌EC9706细胞后,激光共聚焦显微镜镜检显示,BTI-EGFP获得良好表达.表达的融合蛋白大部分分布于细胞核,在细胞质中有少量分布.Western印迹检测可见约27kD和36 kD的特异性条带.流式细胞术分析结果显示,BTI能够诱导EC9706细胞发生凋亡,并使细胞停滞于G0/G1期.
- 李玉英田欣张政王转花
- 关键词：绿色荧光蛋白食管癌EC9706细胞细胞周期
- 荞麦BTI全长基因的克隆及表达分析被引量：5
- 2007年
- 【研究目的】扩增荞麦胰蛋白酶抑制剂(Buckwheat trypsin inhibitor,BTI)基因,并对其表达特性和氨基酸同源性进行分析。【方法】根据荞麦胰蛋白酶抑制剂氨基酸的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,以荞麦cDNA为模板,扩增BTI基因并进行序列及其表达谱分析。【结果】克隆得到了BTI基因。它的cDNA全长为459bp,含有一个216bp的完整阅读框,编码72个氨基酸。同源性分析表明,其蛋白质序列与已报道的荞麦种子提取的BWI-1的氨基酸序列的同源性达96%,与笕属植物ATI、亚麻属植物Luti、马铃薯蛋白酶抑制剂PPI-I的氨基酸序列的同源性分别为65%、59%、48%。RT-PCR分析表明,BTI基因可在不同的组织中进行表达,但经伤害处理后的叶片中其表达量略高于生长各阶段。这可能与逆境情况(如外界损伤)下的应答等生理过程有关。【结论】荞麦BTI基因的获得,可为荞麦胰蛋白酶抑制剂的基础及应用研究奠定基础。
- 李玉英张政王转花
- 关键词：荞麦胰蛋白酶抑制剂半定量RT-PCR基因表达
- 苦荞种子总黄酮提取方法的比较研究被引量：16
- 2010年
- 目的比较不同方法提取苦荞种子总黄酮的效果。方法分别用乙醇回流提取法、微波辅助提取法、超声波提取法、碱水浸提法及热水浸提法提取苦荞种子总黄酮,用高效液相色谱法测定总黄酮含量,计算提取产率。结果乙醇回流提取法提取总黄酮产率最高,微波和超声波提取法次之,碱水和热水浸提法最低。结论微波提取法具有明显的高效性,适于大量提取苦荞种子总黄酮。
- 闫斐艳杨振煌李玉英王转花
- 关键词：苦荞总黄酮高效液相色谱法
- TBa过敏原表位区段的表达及免疫活性分析
- 目的确定苦荞过敏原TBa（tartary buckwheat allergen）的主要表位区段,为进一步研究荞麦过敏原结构和功能及低致敏性荞麦品种提供依据。方法以TBacDNA为模板,设计引物,构建TBa的四个表位区段的...
- 任晓霞张政蔡桂红李玉英王转花
- 关键词：表位免疫活性
- 文献传递
