国家自然科学基金(81072994)
- 作品数：10 被引量：56H指数：6
- 相关作者：隋春孙晶魏建和徐洁森陶韵文更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院东北林业大学教育部更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金中医药行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 不同因子对药用植物毛状根产量和次生代谢产物积累影响的研究进展被引量：11
- 2014年
- 以根为药用部位的药材占中药材种类的30%左右。毛状根培养体系是药用植物生产次生代谢产物的新途径、新方法。影响毛状根生长及其次生代谢物形成的因素有很多,如:物理因素、化学因素、前体物的添加、诱导子等。通过优化毛状根培养条件及培养基配比,可提高毛状根和次生代谢产物产量。本文就药用植物毛状根诱导形成及大规模生产中的根产量和次生代谢产物积累的影响因素与作用机理做一综述,为相关研究和应用提供参考。
- 孙晶杨洪一隋春
- 关键词：毛状根次生代谢产物
- 北柴胡毛状根诱导及其植株再生体系的建立被引量：12
- 2013年
- 本研究从设计多种诱导条件出发,探索建立稳定的柴胡毛状根诱导体系。发根农杆菌A4侵染北柴胡无菌苗叶基部,共培养3天后,转入抑菌培养,10天开始出现毛状根,经4～5周培养,转为液体摇培,获得大量毛状根,诱导产生的毛状根可再生成植株。毛状根再生成植株有两种方式:一种是液体摇培的毛状根自发脱落形成幼苗的继续培养,另一种是将毛状根产生脱落的类愈伤组织置于经筛选的再生固体培养基上再生成植株。柴胡毛状根及其植株再生体系的建立,为开展柴胡次生代谢研究,尤其是利用农杆菌介导的遗传转化研究和利用奠定了基础。由毛状根诱导出再生植株在新种质产生和品种改良选育方面具有应用价值。
- 孙晶徐洁森赵立子魏建和杨洪一隋春
- 关键词：北柴胡发根农杆菌毛状根再生植株
- 北柴胡UGT基因的克隆及其过量表达和RNAi转基因载体的构建被引量：8
- 2012年
- 目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的UGT基因,构建其过表达和抑制表达的转基因载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过RACE和LD-PCR方法扩增全长cDNA克隆。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增UGT基因的ORF和部分片段后,酶切,分别插入到pCAMBIA-SUPER1 300和pHANNIBAL中。重组的pHANNIBAL经Not I酶切后插入到pART27中。最终以构建出过表达和抑制表达的转基因载体。结果:扩增到了北柴胡1个UGT基因全长cDNA克隆,构建了这一基因的过表达和抑制表达转基因载体。结论:通过UGT基因的全长cDNA克隆和转基因载体构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础。
- 隋春徐洁森赵立子魏建和徐艳红孙鹏
- 关键词：北柴胡转基因载体
- 植物皂苷生物合成中UGT功能研究进展被引量：3
- 2013年
- 植物皂苷(Saponins)是广泛存在于绝大多数植物体中不可或缺的一类次生代谢产物。其中多种植物皂苷具有重要的药理活性。尽管皂苷的生物合成途径还未彻底解析,但近年来,皂苷生物合成途径研究,尤其是合成途径下游多基因家族编码酶催化的反应,取得了很大进展。目前,已在个别植物中克隆到了催化个别单体皂苷生物合成的UGT基因,其功能研究取得了一定进展。本文就皂苷合成途径下游催化皂苷元糖基化的糖基转移酶基因克隆和功能研究做一综述,为加快皂苷生物合成途径的解析提供借鉴。
- 陶韵文徐洁森孙晶魏建和隋春刘娟
- 关键词：生物合成基因克隆晶体结构
- 北柴胡细胞色素P450酶基因的克隆及其植物过量表达载体的构建被引量：5
- 2012年
- 目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的细胞色素P450酶基因,构建其过量表达载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序获得5'和3'端部分cDNA序列的基础上,利用LD-PCR方法获得全长cDNA,根据全长cDNA序列设计含有酶切位点的PCR引物,利用高保真酶,以RNA反转录产物为模板PCR扩增细胞色素P450酶基因的开放读框,扩增产物与pEASY-T1 Simple载体连接,转化大肠杆菌DH5α;重组质粒pT1-P450经菌液PCR和酶切方法验证后测序,采用NCBI在线Blastx、DNAman和MEGA4软件对序列进行生物信息学分析,随后将pT1-P450的酶切产物插入双元载体pCAMBIA-SUPER 1300,菌液PCR和酶切验证重组质粒p1300-P450。结果:扩增到了北柴胡细胞色素P450酶基因BcCYP87E,构建了这一基因的过量表达载体。结论:细胞色素P450酶基因的克隆和转基因载体的构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础。
- 徐洁森魏建和赵立子隋春徐艳红
- 关键词：北柴胡细胞色素P450酶基因克隆植物表达载体
- 植物细胞色素P450在三萜皂苷生物合成中的功能研究进展被引量：12
- 2012年
- 三萜皂苷是许多药用植物的药效成分,其生物合成通常可分为前体形成、骨架构建以及后修饰3个部分。后修饰过程是植物调控形成众多种类单体皂苷的重要过程,其机制至今尚未完全阐明。植物细胞色素P450是由少数几个超基因家族编码的,参与多种生物过程,包括三萜皂苷次生代谢的后修饰过程。目前,已在少数植物中克隆到了催化个别单体皂苷生物合成的P450基因,其功能研究取得了一定进展。将就此进行综述,为进一步开展相关研究提供借鉴。
- 徐洁森魏建和陶韵文孙晶隋春
- 关键词：三萜皂苷生物合成细胞色素P450基因克隆
- 北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1的表达分析及其原核表达与蛋白纯化被引量：6
- 2013年
- 本研究分析了北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1 ORF序列,预测了其蛋白三维结构,利用qRT-PCR分析了BcUGT1的茉莉酸甲酯诱导表达和组织表达特性。结果表明,BcUGT1可能参与柴胡皂苷生物合成。随后,构建了BcUGT1原核表达载体,成功诱导出目标蛋白,并进行了纯化。原核表达实验中共采用了3种载体:pRSET-A、pET-28a(+)和pET-30a(+),3种宿主菌:BL21(DE3)plysS、BL21A1和BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,进行了不同诱导条件的探索,包括不同诱导物(L-阿拉伯糖和IPTG)的不同浓度、不同诱导时间和温度,结果以pET-28a(+)和pET-30a(+)为载体,BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL为宿主菌,0.5或1 mmol.L 1IPTG,16℃,20 h为条件,诱导出目标蛋白。利用PrepEase His标签蛋白纯化试剂盒,纯化获得了目标蛋白,为后续开展BcUGT1基因的功能研究奠定了基础。
- 陶韵文徐洁森魏建和孙晶徐艳红杨欣张岩刘娟隋春
- 关键词：北柴胡原核表达蛋白纯化
- 北柴胡糖基转移酶基因BcUGT3,BcUGT6的表达分析及其原核表达被引量：2
- 2014年
- 该研究测定了北柴胡中2个糖基转移酶基因BcUGT3和BcUGT6在不同组织中的转录水平及MeJA处理后不定根中的转录水平。BcUGT3在根、叶、花和果中的转录水平无明显差异,但均高于茎中的转录水平。BcUGT6在叶中转录水平最高,在花中最低。以未处理的为对照,BcUGT6在MeJA处理后2 h,8 h,24 h,2 d,4 d的北柴胡不定根中,转录水平均提高近2倍,表明BcUGT6的转录受MeJA影响较小。BcUGT3转录水平随处理时间的延长不断增加,4 d时,达7倍左右。利用载体pET-28a(+),进行了2个基因的原核表达。IPTG诱导后,宿主菌表达出了目的蛋白,并获得了纯化蛋白。为后续开展这2个基因的功能研究奠定了基础。
- 陶韵文徐洁森孙晶魏建和刘娟隋春
- 关键词：北柴胡原核表达蛋白纯化
- 北柴胡糖基转移酶基因BcUGT8的克隆、序列分析及其原核表达载体构建被引量：8
- 2013年
- 目的克隆北柴胡Bupleurum chinense中可能参与柴胡皂苷生物合成的糖基转移酶基因BcUGT8,构建其原核表达载体,为通过体外表达和纯化蛋白的催化活性,分析验证其功能奠定基础。方法在Roche(454)GS FLX系统高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)和长距离PCR扩增方法(LD-PCR)克隆全长cDNA。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增其开放阅读框(ORF),酶切后,插入到pET-28a(+)载体中,构建出原核表达载体。结果扩增到北柴胡1个糖基转移酶(UGT)基因全长cDNA,构建了这一基因的原核表达载体。结论通过BcUGT8基因的全长cDNA克隆、序列分析和原核表达载体的构建,为后续开展体外酶蛋白表达、纯化和催化活性分析实验,验证其生物功能奠定了基础。
- 徐洁森魏建和陶韵文孙晶隋春
- 关键词：北柴胡糖基转移酶基因原核表达载体PCR
- 北柴胡花药愈伤组织高效再生体系的建立被引量：2
- 2013年
- 以花粉发育处于单核期的北柴胡花药为外植体诱导出愈伤组织,愈伤组织经多次继代培养后,置于20种含不同植物激素的分化培养基上诱导分化。分别在培养21,49 d后,统计每种培养基中分化出苗数,同时观察再生植株生长状况,从中筛选出分化率高,分化速度快,且植株生长状态良好的分化培养基。结果共在19种培养基均可分化出苗,分化率在3%~60%,大部分低于20%。在MS＋KT 0.5 mgL-1＋蔗糖30 gL-1＋植物凝胶5 gL-1培养基上分化率最高,为60%,其次为MS＋ ZT 1.0 mgL-1＋蔗糖30 gL-1＋植物凝胶5 gL-1,为58%。另外,针对在分化培养基中未能生根的再生芽,进行了生根培养基筛选。结果显示再生芽在生根培养基MS＋蔗糖30 gL-1 ＋植物凝胶5 gL-1和1/2 MS＋ NAA 0.5 mgL-1＋蔗糖30 gL-1 ＋植物凝胶5 gL-1中均可生根,生根率均为100%。由此建立了北柴胡花药愈伤组织高效稳定的再生体系。
- 徐洁森赵立子魏建和陶韵文孙晶隋春杨成民
- 关键词：北柴胡愈伤组织
