国家教育部博士点基金(20060631006)
- 作品数：21 被引量：39H指数：4
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- p115和MIF在肝癌细胞和正常肝细胞的表达情况
- 2011年
- 目的:研究人肝癌低分化SMCC-7721细胞株,高分化HepG2细胞株和人正常肝细胞株LO2的高尔基体转运蛋白p115和巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitoryfactor,MIF)的表达情况。方法:采用RT-PCR方法检测3组细胞株中p115和MIF的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测3组细胞株中p115和MIF的蛋白表达情况。结果:SMCC-7721,HepG2的p115和MIF mRNA表达和蛋白表达水平明显增加且SMCC-7721表达更强,与对照组正常肝细胞株LO2的表达量比较有显著差异(P<0.05);细胞免疫组化方法结果显示:SMCC-7721,HepG2中p115在主要位于除高尔基体外的细胞质中,但在细胞质中HepG2着色相对较淡,而LO2中位于细胞核旁的高尔基体上。MIF主要分布于细胞质中,其在SMCC-7721、HepG2、LO23组细胞表达量呈明显减弱,统计学有显著差异(P<0.05)。结论:p115和MIF的含量在SMCC-7721、HepG2、LO2 3组细胞株中呈递减性变化。说明随着细胞恶性程度增加,p115和MIF表达增高,提示二者可能与肿瘤细胞的异常分化有关。
- 文雪易永芬邓玮闫田静屈玉玲
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子HEPG2
- 敲低高尔基体α甘露糖苷酶2(GM2)增强BGC-823人胃癌细胞的黏附及机制被引量：3
- 2017年
- 目的通过敲低高尔基体α甘露糖苷酶2(GM2)基因的表达,探讨其对BGC-823人胃癌细胞黏附能力的影响。方法设计并构建3个针对GM2基因的短发卡RNA(shRNA)质粒表达载体,同时合成阴性对照载体,并将其转染至BGC-823细胞,实时定量PCR和Western blot法检测转染后BGC-823细胞GM2 mRNA及蛋白表达水平,筛选出敲低效果最佳的质粒;再分别运用同质细胞黏附试验、细胞-基质黏附实验、内皮细胞黏附实验观察GM2基因敲低后对BGC-823细胞黏附能力的影响;同时采用Western blot法检测GM2基因敲低后上皮钙黏素(E-cadherin)、CD44v6、细胞间黏附分子1(ICAM-1)及P选择素(P-selectin)等黏附分子的蛋白水平。结果与空白对照组及转染GM2-shRNA-NC组相比较,GM2-shRNA-2质粒可有效敲低GM2基因的表达;敲低GM2表达水平后,BGC-823细胞同质细胞之间黏附数目明显增加,而与基质和血管内皮细胞之间的黏附数目明显减少。敲低GM2基因表达后E-cadherin蛋白表达明显增加,P-selectin蛋白表达明显降低,而CD44v6和ICAM-1表达水平未见明显变化。结论敲低GM2基因表达水平后,胃癌BGC-823细胞间的黏附能力增强,而与细胞外基质和血管内皮细胞之间的黏附能力减弱,可能与敲低GM2后E-cadherin表达上调,而P-selectin的表达下调有关。
- 曾波曾珍刘畅杨雅莹
- 关键词：BGC-823细胞
- shRNA抑制高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ基因的表达对胃癌细胞侵袭力的影响及机制
- 2014年
- 目的:初步分析高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi alpha-mannosidaseⅡ,GMⅡ)在低中不同分化人胃癌细胞系中的差异表达,以探讨GMⅡ在胃癌发生发展中的作用。方法:应用阳离子脂质体法将合成的靶向GMⅡ基因的pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ-1406质粒载体,分别转染至低分化胃癌细胞MGC-803和中分化胃癌细胞SGC-7901中,然后荧光倒置显微镜观察并计算转染率,最后经过G418筛选出稳定转染的细胞株。应用RT-PCR和Western blot检测转染后GMⅡ和E-cadherin、α-catenin的mRNA及蛋白表达变化情况,同时利用细胞划痕实验和Transwell体外侵袭实验来测定GMⅡ被沉默后两株细胞侵袭能力的变化。结果:GMⅡ短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染胃癌MGC-803和SGC-7901细胞后GMⅡ的mRNA和蛋白表达明显抑制,而E-cadherin和α-catenin的2种因子检测结果明显升高(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,转染重组质粒pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ-1406组(GMⅡshRNA组)与对照组(空白对照组,阴性对照组)相比,GMⅡ被沉默后的胃癌细胞的侵袭能力降低(P<0.05);Transwell体外侵袭实验中GMⅡshRNA组胃癌细胞较空白对照组、阴性对照组细胞侵袭能力都明显降低,18 h穿过小室的细胞数分别为:(65±5)、(197±6)、(186±5),(72±4)、(178±4)、(184±5)个与对照组相比差别具有统计学意义(MGC-803:P=0.000,SGC-7901:P=0.000)。结论 :GMⅡ基因沉默后的胃癌细胞的侵袭能力下降,可能与上调E-cadherin、α-catenin的表达有关。
- 张璐杨雅莹黄子洋易永芬
- 关键词：短发卡RNA胃癌
- 过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响
- 2012年
- 目的探讨过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响。方法构建GMⅡ基因真核过表达质粒EX-E2372-M03,通过脂质体Lipofectamine 2000转染BGC-823细胞,用400 mg/LG418筛选稳定转染的细胞。采用RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞中GMⅡ基因mRNA的转录水平以及蛋白的表达水平,Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术(Annexin V/PI双染)检测过表达GMⅡ后细胞的凋亡情况。结果转染重组质粒EX-E2372-M03后,BGC-823细胞GMⅡ基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平明显增加(P<0.05);细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。结论过表达GMⅡ可能通过抑制胃癌细胞的凋亡,进而促进胃癌的发生发展。
- 李钒杨雅莹易永芬
- 关键词：胃癌细胞凋亡
- 高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ和E-钙黏素在正常肝组织及肝癌组织中的表达及其意义被引量：2
- 2011年
- 目的探讨高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)和E-钙黏素(E-cadherin)在正常肝组织及不同分化的肝癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR法检测GMⅡ和E-cadherin mRNA在正常肝组织、高分化及中低分化肝癌组织中的表达;免疫组化SP法及Western blot法检测GMⅡ和E-cadherin蛋白在3种肝组织中的表达,并对GMⅡ和E-cadherin的差异表达进行相关性分析。结果 RT-PCR及Western blot分析显示,GMⅡmRNA和蛋白在正常肝组织中表达水平最低,在中低分化肝癌组织中表达水平最高,在高分化肝癌组织中表达居中,E-cadherin的表达则相反,各组间表达差异均有统计学意义(P<0.05);免疫组化SP法检测显示,GMⅡ主要表达于正常肝组织及肝癌组织的胞浆,在正常肝组织、高分化及中低分化肝癌组织的表达阳性率分别为40%、64%和86%,E-cadherin在正常肝组织的胞膜、胞浆中均有表达,而在肝癌组织中则主要表达于胞浆,其表达阳性率分别为70%、33%和9%,各组间表达差异均有统计学意义(P<0.05);GMⅡ和E-cadherin表达的Pearson相关系数r值为-0.415,P值为0.01。结论 GMⅡ和E-cadherin在肝癌组织中的表达呈负相关,GMⅡ对肝癌的发生发展可能发挥一定的作用。
- 闫田静易永芬邓玮文雪屈玉玲
- 关键词：E-钙黏素肝肿瘤
- α-甘露糖苷酶Ⅱ基因沉默对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)基因的表达对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。方法根据GenBank中登录的人GMⅡ基因mRNA序列及siRNA设计原则,设计了4条siRNA,并构建4个针对靶点的重组表达质粒pGPU6/GFP/Neo-1140、pGPU6/GFP/Neo-1303、pGPU6/GFP/Neo-1406和pGPU6/GFP/Neo-1817,同时合成阴性对照质粒pGPU6/GFP/Neo-shNC,经Lipofectamine 2000分别转染BGC-823细胞,通过RT-PCR及Western blot检测转染细胞中GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达,筛选沉默效果最佳的质粒;经MTT试验、细胞周期分布分析、Hoechst33258和Annexin V-FITC/PI双染试验分别检测沉默GMⅡ基因对人BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。结果 pGPU6/GFP/Neo-1303组GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),表明pGPU6/GFP/Neo-1303组沉默效果最好;与空白对照组和阴性对照组相比,pGPU6/GFP/Neo-1303组BGC-823细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01),G1期细胞比例明显上升(P<0.05),S期细胞比例明显下降(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论已成功沉默BGC-823细胞中GMⅡ基因的表达,从而抑制BGC-823细胞的增殖并促进其凋亡,GMⅡ可能成为防治胃癌的新靶点。
- 杨雅莹易永芬
- 关键词：RNA干扰高尔基体胃癌基因沉默细胞增殖
- 抑制GM130表达对胃癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响被引量：7
- 2015年
- 目的分析GM130在不同分化人胃癌细胞系的差异表达,利用小干扰RNA技术来沉默GM130基因,研究其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法体外培养3株不同分化程度胃癌细胞系(高分化MKN-28、中分化SGC-7901、低分化MKN-45),Western blot和RT-PCR筛选出高表达的GM130细胞株MKN-45、SGC-7901,设计并化学合成、转染、筛选出针对GM130的小干扰RNA片段。通过MTT、Transwell、Matrigel侵袭实验,观测下调GM130后对胃癌细胞株的生物学行为影响,Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的变化。结果 Western blot和RT-PCR检测结果显示,在MKN-45、SGC-7901细胞中GM130蛋白和mRNA水平呈现高表达水平。Western blot和qRT-PCR结果显示在低分化胃癌MKN-45细胞中,GM130-siRNA-519转染组GM130基因的表达水平显著抑制(P<0.05)。与对照组相比,抑制转染组细胞的增殖、迁移能力明显下降,穿膜细胞数明显减少,MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论抑制GM130基因的表达下调可显著降低胃癌细胞的增殖和体外侵袭转移能力。
- 冯阳阳陈婕牟玲苏琳茜易永芬
- 关键词：RNA干扰胃肿瘤增殖迁移
- 过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对胃癌细胞株BGC-823增殖的影响
- 2012年
- 目的探讨过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)对人胃癌细胞株BGC-823增殖活性的影响。方法构建真核表达载体EX-E2372-M03,通过脂质体Lipofectamine2000转染至人胃癌细胞株BGC-823,筛选稳定细胞株,用免疫荧光观察转染效率。用RT-PCR法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2 mRNA的表达,用Western blot法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2蛋白表达的变化,用MTT法及流式细胞仪检测过表达GMⅡ后对细胞增殖活性的影响。结果 GMⅡ真核表达质粒构建成功并成功转染,MTT结果示过表达GMⅡ后胃癌细胞增殖活性明显高于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比较,GMⅡ过表达组胃癌细胞G1期细胞明显减少,S期细胞比例明显增加。转染后胃癌细胞GMⅡmRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),且可明显上调胃癌细胞BGC-823中c-myc的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对bcl-2的调节作用不明显。结论过表达GMⅡ能促进胃癌细胞增殖,可能与上调c-myc的表达有关。
- 杨紫汐易永芬杨雅莹
- 关键词：C-MYCBCL-2胃癌增殖
- 沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨RNA干扰沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)基因表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移的影响。方法:为沉默GMⅡ基因,构建了4个分别针对不同靶位点的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)质粒表达载体,同时合成阴性对照质粒表达载体。应用LipofectAMINE2000将质粒转染入BGC-823细胞。分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后GMⅡmRNA和蛋白表达的变化,选出沉默效果最佳的质粒。应用Transwell侵袭实验和划痕损伤实验分别检测GMⅡ基因沉默对人胃癌细胞BGC-823侵袭和迁移能力的影响。结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-1303沉默GMⅡ基因的效果最好。转染pGPU6/GFP/Neo-1303组穿透小室基质的细胞数明显少于空白对照组和转染阴性对照组(P<0.05)。无血清培养液培养24h后,转染pGPU6/GFP/Neo-1303组细胞的迁移能力较空白对照组和转染阴性对照组明显降低(P<0.05)。结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌BGC-823细胞中GMⅡmRNA和蛋白的表达,从而抑制BGC-823细胞的侵袭和迁移能力。GMⅡ可能成为胃癌治疗的新靶点之一。
- 杨雅莹易永芬
- 关键词：胃肿瘤基因沉默肿瘤侵润
- SGC7901胃癌细胞株中高尔基体的分离及鉴定被引量：1
- 2010年
- 高尔基体作为主要的分泌细胞器,其功能复杂。从细胞内分离出纯度较高的高尔基体有利于对其功能的深入研究。通过胃癌细胞SGC7901的大量体外培养,差速离心结合蔗糖密度梯度离心法纯化分离出高尔基体后,电镜及中性红超活染色进行形态学鉴定,高尔基体标志酶半乳糖基转移酶Galse及硫胺素焦磷酸酶TPPase活性测定进行纯度分析,首次从胃癌细胞SGC7901内成功分离出纯度较高的高尔基体,为对高尔基体功能的深入研究奠定基础。
- 何婷婷易永芬李艳青肖钟
- 关键词：高尔基体胃癌细胞
