国家教育部博士点基金(20060631012)
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
- 相关作者：翁亚光蔡燕刘子杰施琼张燕更多>>
- 相关机构：重庆医科大学西南大学重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 染色体数目异常滋养层细胞中CENP-I基因的的异常表达被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常与着丝粒特异性蛋白质CENP-I表达水平的相关性。方法:T-A克隆制备CENP-I、GAPDH定量PCR标准品;用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化CENP-I重组蛋白,免疫兔制备抗人CENP-I多克隆抗体;采用FQ-PCR和Western-blot检测23例染色体数目异常的滋养层细胞(实验组)和30例具有正常核型的滋养层细胞(对照组)中CENP-ImRNA和蛋白表达水平。结果:成功制备CENP-I、GAPDHFQ-PCR标准品,表达和纯化CENP-I重组蛋白,获得兔抗人CENP-I多克隆抗体;FQ-PCR和Western-blot结果显示CENP-I在实验组和对照组中均有表达,但实验组中CENP-I的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:CENP-I表达的降低可能是导致人胚胎滋养层细胞中染色体数目异常的原因之一。
- 蔡燕王箭袁泰先翁亚光施琼刘子杰刘斌王应雄
- 关键词：滋养层细胞染色体数目异常
- CENP-E基因下调增强宫颈癌细胞对紫杉醇敏感性
- 紫杉醇是一种强人的化疗制剂,可与纺锤体微管结合,抑制微管的组装,从而导致有丝分裂阻滞及细胞死亡。目前常用于乳腺癌,卵巢癌的治疗,但由于易产生药物耐受,其应用范围受到限制。故对紫杉醇耐药原因进行探讨、提高其敏感性是当今医疗...
- 李素彦
- 关键词：CENP-E紫杉醇
- 文献传递
- CENP-E基因表达下调可增强宫颈癌细胞对紫杉醇的敏感性被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨CENP-E(centromere protein E)基因在紫杉醇治疗肿瘤中的作用。方法:构建针对CENP-E基因的特异性短发夹RNA(short hair RNA,shRNA)载体,电转法导入人宫颈癌HeLa细胞,转染48h后,运用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)、Western印迹法及间接免疫荧光方法评价RNA干扰效果;CENP-E表达下调的HeLa细胞及对照组细胞用不同浓度(1、3、10、30、100、300、1000和3000nmol/L)的紫杉醇处理,MTT法检测细胞增殖情况,FCM法检测细胞凋亡情况。结果:shRNA-CENP-E可有效抑制CENP-E的mRNA、蛋白水平以及内源性表达。MTT结果显示,CENP-E表达下调的细胞在不同浓度紫杉醇作用下的增殖抑制率与对照组相比明显增加(P<0.05),并呈现剂量依赖性;FCM结果显示,下调CENP-E表达后细胞的凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:下调CENP-E的表达能增强宫颈癌细胞对紫杉醇的敏感性。
- 李素彦翁亚光蔡燕
- 关键词：宫颈肿瘤小分子干扰紫杉醇
- CENP-E蛋白动力结构域对细胞周期及染色体分离的影响
- 2009年
- 目的:克隆含CENP-E蛋白动力结构域的真核表达载体,并观察其对染色体分离的影响.方法:采用RT-PCR、分子克隆技术获得含CENP-E动力结构域的真核表达载体pEG-FP-CENPE1(1～336位氨基酸),pEGFP-CENPET1(包括1～336和2078～2492位氨基酸),通过流式细胞术、染色体核型分析观察CENP-E蛋白动力结构域对染色体分离的影响.结果:成功构建出pEGFP-CENPE1,pEGFP-CENPET1融合质粒并在HEK293细胞中正确表达;流式细胞术和染色体核型分析结果表明:转染含CENP-E蛋白动力结构域的载体的细胞在用破坏纺锤体微管药物处理后不能保持于细胞分裂中期,细胞提前进入分裂后期;非整倍体细胞数目增多.结论:过度表达含CENP-E动力结构域不能使受诺考达唑处理的细胞保持于分裂中期,染色体分离出现错误,非整倍体数目细胞增多.
- 刘子杰翁亚光李素彦施琼蔡燕刘斌张燕闫琛
- 关键词：CENP-E结构域细胞周期
- 用FRET方法研究与Mps1蛋白有相互作用的CENP-E蛋白结构域被引量：5
- 2009年
- 目的:探索与Mps1蛋白有相互作用的CENP-E蛋白结构域。方法:将重组质粒pEGFP-CENPE2(674～1085位氨基酸)、pEGFP-CENPE3(1200～2134位氨基酸)转染人胚肾293(HEK293)细胞,采用受体漂白荧光共振能量转移方法(FRET方法),检测EGFP-CENPE2、EGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率(Ef),进一步用免疫共沉淀方法验证FRET的实验结果。结果:重组质粒转染HEK293细胞后经激光共聚焦显微镜观察重组质粒表达的融合蛋白与Mps1都存在着共定位;FRET检测结果显示EGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率为[(12.63±0.48)%,n=30],pEGFP-CENPE2和Mps1间的能量转移率为[(3.07±0.21)%,n=30],与对照组[(2.96±0.27)%,n=30]比较pEGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率差异存在显著性(p<0.05),免疫共沉淀实验结果显示EGFP-CENPE3与Mps1蛋白间存在相互作用。结论:FRET技术和免疫共沉淀实验证明了EGFP-CENPE3与Mps1间存在着相互作用。
- 刘子杰翁亚光李素彦施琼蔡燕刘斌张燕阎琛
- 关键词：CENP-E蛋白质相互作用荧光共振能量转移
- CENP-E变异体在不同肿瘤细胞株及癌组织中的表达差异被引量：2
- 2010年
- 目的研究CENP-E变异体(CENP-EⅠ)在不同肿瘤细胞株及癌组织和相应的癌旁组织中的表达情况。方法应用巢式RT-PCR检测14个细胞株和17份癌组织及相应癌旁组织标本中CENP-EⅠmRNA(缺失第38个外显子)的表达情况,并比较变异体和野生型CENP-E(CENP-EWT) mRNA的表达差异;应用巢式PCR检测上述标本中CENP-E在DNA水平上的变异;并通过细胞增殖试验、细胞周期检测和染色体核型鉴定,分析CENP-EⅠ与细胞恶性程度的相关性。结果 RT-PCR结果显示,实验样本中CENP-E mRNA均有CENP-EWT和CENP-EⅠ两种形式同时存在于一种组织或细胞中,且在正常细胞株和癌旁组织中CENP-EWT表达量较高,在肿瘤细胞株和癌组织中CENP-EⅠ表达量较高,且差异有统计学意义(P<0.05);样本中CENP-E在DNA水平上不存在第38个外显子缺失,且细胞间CENP-E表达量的差异无统计学意义(P>0.05);CENP-EⅠ与细胞的恶性程度有一定的相关性。结论同一细胞内存在2种或2种以上形式的CENP-E mRNA,CENP-E变异体可能与肿瘤的发生有关。
- 闫琛凌康刘子杰翁亚光
- 关键词：CENP-E变异体肿瘤
- 自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷基因的表达及意义被引量：1
- 2008年
- 目的 探讨自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷（hsMAD）2基因的表达，以及hsMAD2基因表达降低与染色体数目异常的相关性。方法 采集2006年3月至2007年3月重庆医科大学附属第一、第二医院妇产科自然流产患者的胚胎组织标本33份，其中流产1次者23份，流产2次及以上者10份；同时采集人工流产患者的胚胎组织标本35份。采用FQ-PCR和蛋白印迹法检测自然流产和人工流产胚胎组织中hsMAD2基因的mRNA和蛋白表达水平；原代培养人工流产胚胎组织并经染色体分析筛选出5例具有正常核型的胚胎细胞，构建hsMAD2基因的短发夹RNA（shRNA）表达载体，转染筛选出来的胚胎细胞以抑制其内源性hsMAD2基因的表达，将细胞分为实验1组（转染重组干扰质粒pshRNA-hsMAD2-1）、实验2组（转染pshRNA-hsMAD2-2）、实验3组（转染pshRNA-hsMAD2-3）、对照1组（未做任何处理）、对照2组（转染pTZU6＋1干扰质粒空载体）、无关对照组（转染pshRNA-N1）。用蛋白印迹法和定量PCR技术评价shRNA的干扰效果，四甲基偶氮唑蓝比色法测定胚胎细胞增殖抑制率，流式细胞技术检测胚胎细胞周期的分布，并计算染色体数目的变化。结果 （1）自然流产1次者、自然流产2次及以上者、人工流产者的胚胎组织中hsMAD2基因mRNA的表达量分别为0．00879±0．00035、0．00901±0．00033、0．00941±0．00026，3者分别比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；hsMAD2蛋白的表达量分别为0．2791±0．0311、0．0431±0．0020、0．5790±0．0331，3者分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达，转染有效干扰质粒后，实验1组胚胎细胞的增殖抑制率为54％，分别与对照1组（4％）、对照2组（3％）比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；G2／M期细胞比例实验1组�
- 蔡燕王箭袁泰先施琼翁亚光王应雄蒋洪彦刘子杰
- 关键词：胚胎钙结合蛋白质类细胞周期蛋白质类小分子干扰
- 2型糖尿病合并高血压患者血清脂联素和内脏脂肪素水平的变化被引量：8
- 2011年
- 目的:了解2型糖尿病合并高血压患者血清脂联素和内脏脂肪素的变化,探讨脂联素和内脏脂肪素与2型糖尿病合并高血压的相关性.方法:选取高血压患者40例,2型糖尿病患者38例,2型糖尿病合并高血压患者40例,健康对照者40例作为研究对象,测定其血清脂联素和内脏脂肪素水平,同时测定血压、血糖、血脂和体质量指数等指标,并分析以上指标与脂联素和内脏脂肪素的关系.结果:单纯2型糖尿病组和单纯高血压组内脏脂肪素水平明显高于正常对照组,分别为(18.26±1.22)ng/mL,(17.31±1.26)ng/mL和(13.32±1.31)ng/mL(p<0.05);2型糖尿病合并高血压组(24.99±1.36)ng/mL又明显高于单纯2型糖尿病组和单纯高血压组.2型糖尿病组和高血压组脂联素水平明显低于正常对照组,分别为(8.75±1.29)μg/mL,(9.71±1.28)μg/mL和(12.67±1.48)μg/mL(p<0.05);2型糖尿病合并高血压组(5.73±1.23)μg/mL又明显低于单纯2型糖尿病组和单纯高血压组.2型糖尿病组和高血压组的脂联素和内脏脂肪素水平差异不具有统计学意义(p>0.05).相关分析显示2型糖尿病合并高血压患者空腹血清内脏脂肪素与腰臀比、甘油三酯和体质量指数呈正相关(r=0.431,0.371,0.501,p<0.05),与高密度脂蛋白呈负相关(r=-0.610,p<0.05);血清脂联素与腰臀比、体质量指数、收缩压和甘油三酯呈负相关(r=-0.6 1 2,-0.3 9 3,-0.4 5 5,-0.3 9 1,p<0.0 5).多元逐步回归分析显示,腰臀比是内脏脂肪素水平的独立相关因素(t=2.0 9 0,p<0.0 5);腰臀比、高密度脂蛋白是脂联素水平独立相关因素(t=-2.7 4 1,3.9 6 8,p<0.0 5).结论:2型糖尿病组和高血压组血清内脏脂肪素水平升高,而脂联素水平降低.2型糖尿病合并高血压组血清内脏脂肪素水平更高,脂联素水平更低.该结论提示脂联素和内脏脂肪素的表达可能与高血压和2型糖尿病的发生发展有密切的关系.
- 刘晓宇翁亚光张燕罗敏
- 关键词：脂联素内脏脂肪素高血压糖尿病2型糖尿病合并高血压
- BubR1在乳腺癌细胞发生紫杉醇耐药中的作用
- 2011年
- 目的探讨有丝分裂期检查点蛋白BubR1在乳腺癌细胞发生紫杉醇耐药中的作用。方法设计并合成针对BubR1基因的特异性干扰RNA(siRNA)片段,连接入穿梭质粒后,包装成腺病毒(Ad-BubR1-siRNA),感染MCF-7细胞,采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot法评价BubR1干扰对MCF-7细胞BubR1基因和蛋白表达的影响。分别通过cck8试验、染色体计数分析、细胞集落生成试验、Hochest染色和细胞划痕试验评价干扰BubR1后,MCF-7细胞在紫杉醇作用下增殖、染色体稳定性、凋亡及迁移能力等生物学功能。结果重组腺病毒的滴度为1010 pfu/ml,其能有效抑制BubR1基因在mRNA和蛋白水平的表达。干扰BubR1表达后,MCF-7细胞在紫杉醇作用下表现为增殖和迁移能力增强,染色体不稳定性增加,集落生成能力增强,凋亡能力下降。结论下调BubR1基因可能导致乳腺癌细胞MCF-7对紫杉醇的耐药性增强。
- 王稣佳胡敏章帆施琼罗进勇周兰张彦翁亚光
- 关键词：乳腺肿瘤BUBR1紫杉醇
- 分子与细胞遗传学专题文献分布及变化趋势的计量学分析
- 2009年
- 通过统计分子与细胞遗传学中"染色体分离的分子机制"专题的文献,了解该专题目前研究的热点及发展趋势,并对文献分布及其变化趋势进行计量学分析,使科研用户通过文献的数量关系与变化规律,预测科研的成熟度与发展趋势。
- 王靖翁淳光肖廷超
- 关键词：个性化服务文献计量学
