广东省科技计划工业攻关项目(2003B31502)
- 作品数：13 被引量：45H指数：4
- 相关作者：何韶衡王海燕黄阗魏继福刘岳宁更多>>
- 相关机构：汕头大学汕头市中心医院四川大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8被引量：3
- 2005年
- 目的探讨蛋白酶激活受体1(PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果经过16h的培养,SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加,增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍,RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放,凝血酶在浓度1kU/L时就可引起IL-8释放量增加,10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰,为基础分泌量的7.5倍。水蛭素可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明,PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加,16h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。
- 王海燕何韶衡郑燕珊
- 关键词：蛋白酶激活受体上皮细胞白细胞介素-8
- 中华眼镜蛇毒金属蛋白酶诱导人肥大细胞释放组胺的作用被引量：9
- 2006年
- 目的:探索中华眼镜蛇毒金属蛋白酶(MT)对人肥大细胞释放组胺的诱导作用及其机制。方法:用肝素凝胶和Superdex75亲和力凝胶纯化MT。将手术切除的人肺、大肠和扁桃体组织在37℃用Ⅰ型胶原酶和Ⅰ型透明质酸酶消化,悬浮细胞均匀地加入含MT、刺激剂或缓冲液的试管中,进行激发实验并用荧光显色法测量上清液的组胺水平。结果:纯化后的MT在SDS-PAGE上呈1条带。MT能诱导人肺、大肠和扁桃体肥大细胞发生剂量依赖性组胺释放。浓度低至0.03 mg/L时,MT就能诱导大肠肥大细胞显著性的组胺释放,但对于肺和扁桃体的肥大细胞,MT的最低有效浓度分别为0.3 mg/L和30 mg/L。MT诱导大肠和肺肥大细胞组胺释放,12 min时达高峰,而扁桃体肥大细胞的组胺释放则在8 min时达高峰。人大肠、肺和扁桃体肥大细胞经代谢抑制剂和百日咳毒素预处理后,MT诱导其释放组胺的作用明显减弱。缺乏外源性钙、镁离子时,MT诱导肥大细胞释放组胺的能力也明显减弱。结论:MT可能通过G蛋白偶联受体途径激活人肥大细胞,从而参与毒蛇咬伤人体后所发生的病理生理过程。
- 莫雅贞何韶衡魏继福林梓霞傅意玲
- 关键词：肥大细胞中华眼镜蛇毒组胺
- 激光扫描共聚焦显微镜观察胰蛋白酶对肺上皮细胞游离钙离子的影响被引量：11
- 2005年
- 目的:研究PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO、胰蛋白酶及其抑制剂对H292肺上皮细胞[Ca2+]i的影响。方法:应用Fluo-3/AM荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测不同因素处理的H292肺上皮细胞[Ca2+]i。结果:胰蛋白酶、SLIGKVt、c-LIGRLO均能引发H292细胞[Ca2+]i的增加,平均荧光强度分别比加入药物前增加267%,60%和37%。胰蛋白酶抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)和α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加。结论:PAR-2可以介导H292肺上皮细胞[Ca2+]i的释放增加,胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca2+]i的增加。
- 王海燕何韶衡林珏龙
- 关键词：激光扫描共聚焦显微镜蛋白酶激活受体肺上皮细胞
- 人肺上皮细胞表达蛋白酶激活受体被引量：3
- 2005年
- 目的: 蛋白酶激活受体(protease-activated receptors, PARs) 广泛分布在多种组织细胞上,但4种PARs在肺上皮细胞的表达情况尚不清楚. 我们用A549细胞研究PARs在肺上皮细胞的表达. 方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪和免疫荧光细胞染色分析技术分析肺上皮细胞系A549细胞PARs的表达情况. 结果:4种PARs在肺上皮细胞上均有不同程度的表达. 结论:肺上皮细胞同时表达PAR 1～4 4种受体,这为进一步研究PARs在肺上皮细胞的功能奠定了基础.
- 王海燕何韶衡付意玲方泽曼
- 关键词：蛋白酶激活受体肺上皮细胞流式细胞术
- 蛋白酶激活受体2激动剂诱导肺上皮细胞分泌IL-8
- 2005年
- 目的探讨蛋白酶激活受体(PAR)—2激动剂对人上皮细胞白细胞介素—8(IL-8)分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR-2激动剂,反PAR-2激动剂进行刺激。刺激时间为2h、8h和16h。用ELISA方法检测上清液中IL-8的分泌水平。结果经过16h的培养,PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性IL-8的释放增加,tc-LIGRLO引起的最大IL-8释放量达基础分泌量的6倍。反PAR-2激动剂对IL-8释放的影响较小。时间相关曲线表明,PAR-2激动剂的作用从2h开始,16h达高峰。结论PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞IL-8的促分泌剂。其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用。
- 王海燕何韶衡付意玲
- 关键词：蛋白酶激活受体上皮细胞系白细胞介素-8
- 蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1被引量：2
- 2005年
- 目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h。用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平。结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍。凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用。时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。
- 王海燕何韶衡郑燕珊
- 关键词：蛋白酶激活受体上皮细胞系
- 抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的制备抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(hSL-PI)单克隆抗体(mAb)。方法以hSLPI为免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗hSLPI mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得4株可稳定分泌抗hSLPI mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM。Western blot分析表明,此株mAb所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为12000。免疫组化染色表明,mAb与肺和结肠组织的上皮细胞、疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织的疑似肥大细胞的反应性均呈阳性。流式细胞术分析显示,4株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞中的SLPI均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质内。结论成功地制备抗hSLPI mAb,为变态反应性疾病和炎症性疾病的研究工作提供了有用的试剂。
- 陈玉珍何韶衡周艳春黄阗刘岳宁陈霖霏
- 关键词：单克隆抗体
- 烙铁头蛇毒TM-N49诱导人肥大细胞释放组胺的作用
- 2006年
- 目的探索烙铁头蛇毒TM-N49对人肥大细胞释放组胺的诱导作用及其机制。方法用SP-SephadexC-25,肝素凝胶,Superdex75分子筛及HPLC纯化TM-N49。将手术切除的人肺、大肠和扁桃体组织在37℃条件下用Ⅰ型胶原酶和Ⅰ型透明质酸酶消化,经悬浮后的细胞均匀地加入含TM-N49、刺激剂或缓冲液的试管中,进行激发实验并用荧光显色法测量上清液的组胺水平。结果纯化后的TM-N49在SDS-PAGE上呈一条带。TM-N49能诱导人肺、大肠和扁桃体肥大细胞发生剂量依赖性组胺释放。浓度为0.3μg/ml时,TM-N49就能诱导大肠肥大细胞显著性的组胺释放,但对于人肺肥大细胞来说,诱导它释放相同量组胺所需最低TM-N49浓度为3μg/ml,而对于扁桃体肥大细胞,TM-N49浓度为30μg/ml时才能诱导它显著性的组胺释放。TM-N49诱导大肠和肺肥大细胞组胺的释放10min和8min时达高峰,而扁桃体肥大细胞的组胺释放则在16min时达高峰。人大肠、肺和扁桃体肥大细胞经代谢抑制剂和百日咳毒素预先处理后,浓度低于30μg/ml的TM-N49诱导其释放组胺的作用明显减弱,但当其浓度达到30μg/ml时,上述处理对TM-N49诱导人肥大细胞释放组胺的作用无影响。缺乏外源性钙、镁离子时,TM-N49诱导肥大细胞释放组胺的能力也明显减弱。结论TM-N49可能通过G蛋白偶联受体途径激活人肥大细胞或通过细胞毒等途径作用于肥大细胞,从而参与毒蛇咬伤人体后所发生的病理生理过程。
- 莫雅贞何韶衡魏继福林梓霞傅意玲
- 关键词：肥大细胞组胺
- 白眉蝮蛇蛇毒中L-氨基酸氧化酶的分离及其诱导急性肺损伤的作用被引量：7
- 2006年
- 目的:从白眉蝮蛇蛇毒分离纯化L-氨基酸氧化酶,并研究其对肺组织的影响.方法:通过Heparin-Sepharose FF及Q-Sepharose HP从白眉蝮蛇蛇毒中分离纯化得到一个L-氨基酸氧化酶,命名为ABU-LAO.给Balb/c小鼠静脉注射50,5,0.5μg药物或生理盐水100μL,每组6只,6 h或24 h后取材,肺组织常规切片,HE染色.高倍镜视野下计算平均红细胞数(RBCs)、平均肺泡内多形核白细胞数(IAPLs)、平均肺泡隔多形核白细胞数(ASPLs);用图像分析仪测平均肺泡面积(MACA).结果:纯化ABU-LAO并在SDS-PAGE上测定其表观M r约为60000.与生理盐水组相比RBCs,IAPLs,ASPLs,MACA在注射ABU-LAO后有显著改变(P<0.0125).结论:通过两步层析法分离纯化得到ABU-LAO,它能诱导小鼠发生严重的急性肺损伤.
- 魏晓龙魏继福黄阗陈秋玉刘岳宁何韶衡
- 关键词：L-氨基酸氧化酶白眉蝮蛇急性病小鼠近交BALBC
- 蛋白酶活化受体-1单克隆抗体的制备与鉴定
- 2007年
- 目的制备蛋白酶活化受体-1(PAR-1)单克隆抗体(mAb)。方法以PAR-1特异性片段为免疫原(13肽)免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR-1 mAb。采用捕获酶联免疫吸附试验(capture ELISA)鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Dot blot、免疫组化染色法、流式细胞仪分析、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得2株可稳定分泌抗PAR-1 mAb的杂交瘤细胞,其亚型分别为IgMI、gG2b。免疫组化染色表明,mAb与人扁桃体、结肠组织中的淋巴细胞、包皮组织中的成纤维细胞、肺组织中的巨噬细胞反应呈阳性。流式细胞仪分析显示,2株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞胞浆内及细胞膜上的PAR-1均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物在A549细胞胞浆内及细胞膜上均可见。结论成功地制备出抗PAR-1 mAb,为进一步研究炎症性疾病提供有用的试剂。
- 马文静何韶衡周艳春陈玉珍黄阗方泽漫陈霖霏
- 关键词：蛋白酶活化受体-1单克隆抗体酶联免疫吸附试验
