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国家自然科学基金(30770991)

作品数：11 被引量：36H指数：4
相关作者：施瑞华朱宏曾楷峰金海林郝波更多>>
相关机构：江苏省人民医院南京医科大学南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
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相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 11篇医药卫生

主题

  • 10篇细胞
  • 9篇食管
  • 7篇缺氧
  • 7篇缺氧诱导
  • 7篇缺氧诱导因子
  • 6篇缺氧诱导因子...
  • 5篇癌细胞
  • 4篇食管鳞状
  • 4篇食管鳞状细胞...
  • 4篇食管肿瘤
  • 4篇肿瘤
  • 4篇细胞癌
  • 4篇鳞状
  • 4篇鳞状细胞
  • 4篇鳞状细胞癌
  • 4篇RNA干扰
  • 3篇血管
  • 3篇血管生成
  • 3篇血管生成拟态
  • 3篇食管鳞癌

机构

  • 11篇江苏省人民医...
  • 2篇南京大学医学...
  • 2篇南京医科大学
  • 1篇扬州大学
  • 1篇连云港市第一...
  • 1篇铜陵市人民医...
  • 1篇南通大学第二...
  • 1篇上海交通大学...
  • 1篇安徽省铜陵市...
  • 1篇苏州大学附属...

作者

  • 11篇施瑞华
  • 8篇朱宏
  • 4篇金海林
  • 4篇曾楷峰
  • 4篇郝波
  • 3篇凌亭生
  • 3篇张伟锋
  • 3篇唐娜娜
  • 2篇丁宗励
  • 2篇王璐
  • 2篇王频
  • 2篇余海
  • 2篇束庆文
  • 2篇李杨
  • 1篇屠惠明
  • 1篇张红杰
  • 1篇冯亚东
  • 1篇王亚民
  • 1篇都波
  • 1篇张国新

传媒

  • 4篇中华消化杂志
  • 2篇中华肿瘤杂志
  • 2篇南京医科大学...
  • 1篇胃肠病学
  • 1篇中华内科杂志
  • 1篇中国现代药物...

年份

  • 2篇2015
  • 1篇2013
  • 2篇2012
  • 4篇2011
  • 2篇2010
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
小干扰RNA抑制缺氧诱导因子-1α表达对食管癌细胞糖酵解的影响
2013年
目的观察人食管鳞状细胞癌细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对糖酵解的影响并探讨其可能的作用机制。方法TEl3、Ecal09细胞常氧（O2体积分数为0．20）及缺氧（0z体积分数为0．01）培养，缺氧时间为6、12、24、48h，RNA干扰法稳定静默HIF-1α获得TE13/小干扰（si）HIF、Ecal09／siHIF细胞，培养方法和时间同TEl3、Ecal09。Western印迹法检测HIF-1α的表达变化；分光光度法检测培养上清液中乳酸浓度变化；实时定量PCR检测葡萄糖转运蛋白-1（GLUT-1）、乳酸脱氢酶A（LDHA）的mRNA表达变化；Western印迹法检测GLUT-1、LDHA蛋白表达变化。t或t’检验用于分析不同缺氧时间对HIF-1a蛋白表达的影响，组间差异比较采用单因素方差分析。结果TEl3、Ecal09细胞缺氧后HIF-1α表达增强，12h达高峰（t=6．11，8．31，P〈0．05）。常氧条件下，TEl3／siHIF和Ecal09／siHIF细胞乳酸分泌分别为（1．24±0．33）、（1．28±0．37）mmol／L，较TEl3和Ecal09细胞显著下降[（3．25±1．34）、（4．91±1．69）mmol／L，t=2．53、3．59，P均〈0．053；TEl3、Ecal09细胞缺氧后乳酸分泌增多[（6．48±1．73）、（8．02±1．95）mmol／L，t=2．715、2．050，P均〈0．053，TEl3／siHIF、Ecal09／siHIF细胞缺氧后乳酸分泌无明显增多（P〉0．05）。TEl3／siHIF和Ecal09／siHIF细胞中，GLUT-1、LDHA的mRNA表达均明显受抑（常氧：t=6．98、3．92、7．25、3．67，P均〈0．05），GLUT-1蛋白表达明显减弱（常氧：t=4．57、16．56，缺氧：t=6．19、6．09，P均〈0．05），LDHA蛋白表达稍减弱（P〉0．05）。结论抑制人食管鳞状细胞癌中HIF-1a可降低细胞的糖酵解水平，该途径可能涉及GLUT-1、LDHA的表达抑制；除HIF-1α以外，LDHA的蛋白表达可能同时存在其他调控因素。
唐娜娜朱宏何桂钧郝波施瑞华
关键词：缺氧诱导因子1,Α亚基糖酵解
血管内皮钙黏附素下调对食管鳞癌细胞血管生成拟态、增殖和凋亡的影响被引量：1
2012年
背景:血管内皮钙黏附素(VE-cad)作为血管生成拟态的重要调控分子在多种高侵袭性肿瘤中均存在表达,参与肿瘤的发生、发展过程。前期研究发现食管鳞癌细胞中亦存在VE-cad表达。目的:探讨微小RNA(miRNA)干扰技术下调VE-cad对食管鳞癌细胞血管生成拟态形成、细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:将已成功构建的VE-cad miRNA干扰质粒稳定转染Eca109、TE13细胞,同时设置阴性对照组(转染空质粒)和空白对照组(未转染)。荧光显微镜观察单克隆转染效率,三维培养观察细胞管腔样结构形成的能力,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测VE-cad、EphA2、LN5γ2 mRNA和蛋白表达,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡。结果:荧光显微镜显示Eca109、TE13细胞稳定转染效率均达90%以上。与阴性对照组和空白对照组相比,干扰组细胞管腔样结构数目明显减少(P<0.01),VE-cad、EphA2、LN5γ2 mRNA和蛋白表达明显受抑(P<0.01),细胞增殖能力明显下降(P<0.05),凋亡率明显增高(P<0.05)。结论:miRNA干扰技术能有效抑制食管鳞癌细胞Eca109、TE13的VE-cad表达。VE-cad通过下调EphA2和LN5γ2表达抑制血管生成拟态的体外形成,并影响细胞增殖和凋亡。VE-cad可能成为食管鳞癌分子靶向治疗的新靶点。
王璐施瑞华王频丁宗励朱宏凌亭生华杰冯亚东
关键词：食管肿瘤RNA干扰血管生成拟态细胞增殖
F框／WD-40域蛋白7在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义被引量：1
2015年
目的检测F框／WD-40域蛋白7（FBXW7）在食管鳞状细胞癌（简称食管鳞癌）组织中的表达及临床意义，初步探讨其与患者临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学方法检测FBXW7蛋白在90例食管鳞癌和20例相应的癌旁正常组织及40例食管上皮内瘤变组织中的表达情况，采用Western blot法及半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测40例食管鳞癌组织和癌旁正常组织中FBXW7蛋白和mRNA表达水平，分析FBXW7表达与食管鳞癌患者临床病理特征及预后的关系。结果在食管鳞癌组织、癌旁正常组织、食管低级别上皮内瘤变组织和高级别上皮内瘤变组织中，FBXW7蛋白的阳性表达率分别为40．0％（36／90）、85．0％（17／20）、77．3％（17／22）和33．3％（6／18），差异有统计学意义（P〈0．001）。40例食管鳞癌组织和癌旁正常组织中，FBXW7蛋白表达水平分别为0．283±0．055和0．657±0．091，差异有统计学意义（P〈0．001）。40例食管鳞癌组织和癌旁正常组织中，FBXW7 mRNA相对表达水平分别为0．863±0．962和1．813±0．512，差异有统计学意义（P〈0．05）。单因素分析显示，FBXW7蛋白表达与肿瘤TNM分期、分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关（均P〈0．05）。Cox多因素分析显示，仅淋巴结转移为食管鳞癌患者的独立预后因素（P〈0．05）。90例患者中，FBXW7蛋白阳性表达和阴性表达患者的5年生存率分别为67．6％和39．3％，差异有统计学意义（P=0．01）。结论FBXW7mRNA及其蛋白在食管鳞癌组织和食管高级别上皮内瘤变组织中的表达显著减低，且其低表达与食管鳞癌患者的不良预后密切相关。作为一种肿瘤抑制基因，FBXW7可能对食管鳞癌的发生、发展和转移起重要作用，有可能成为反映食管鳞癌患者病情严重程度及判断其预后的重要分子生物学标志物。
余海凌亭生施瑞华束庆文李杨檀祝利
关键词：食管肿瘤逆转录聚合酶链反应
缺氧诱导因子-1α和己糖激酶-Ⅱ在食管鳞状细胞癌中的表达及对糖酵解的影响被引量：4
2012年
目的探讨人食管鳞状细胞癌中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和已糖激酶-Ⅱ（HK-Ⅱ）的表达变化及对糖酵解的影响。方法缺氧条件（1％氧浓度）下培养TE13及Eca109细胞，设置不同缺氧时间（分别为6、12、24、48h），并以常氧培养（20％氧浓度）为对照。Western印迹检测HIF-1α及HK-Ⅱ的蛋白表达变化；经RNA干扰技术特异性静默HIF-1α，利用实时定量PCR及Western印迹检测HIF-1α和HK-Ⅱ的表达变化；分光光度法检测常氧和缺氧条件下细胞培养液中细胞的乳酸浓度变化。结果①缺氧条件下，TE13及Eca109细胞中HIF-1α表达均随缺氧时间延长而逐渐升高（P〈O．05），在缺氧12h表达达到高峰，后表达又随时间延长而下降。TE13及Eca109细胞缺氧12h后HK-Ⅱ表达均较常氧培养明显增强（P〈0．05）。②实时定量PCR法检测显示，常氧条件下被干扰的TE13／shRNA和Eca109／shRNA细胞中HIF-1dRNA表达量较未干扰的TE13、Eca109细胞明显减弱（P〈O．05）。HK-ⅡRNA表达结果与HIF-1 RNA一致。③常氧及缺氧培养时，HK-Ⅱ蛋白在TE13／shRNA和Eca109／shRNA细胞的表达均较未干扰的TE13、Eca109细胞明显减弱，差异有统计学意义（P〈0．05）。④缺氧时TE13和Eca109细胞乳酸分泌量为14．707±3．594和15．062±3．901，较常氧时增多（6．070±1．839和6．891±1．592，P〈0．05）。TE13／shRNA、Eca109／shRNA乳酸分泌量较未静默TE13、Eca109细胞显著减少，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论食管鳞癌中HIF-1α及HK—Ⅱ在缺氧条件下表达明显增强，HK—Ⅱ表达及乳酸浓度与HIF-ICt表达密切相关，HIF-1α可能通过HK-Ⅱ影响细胞的糖酵解水平。
唐娜娜朱宏金海林张伟锋何桂钧郝波施瑞华
关键词：糖酵解缺氧诱导因子-1食管肿瘤
缺氧诱导因子-1α与EphA2在食管鳞状细胞癌中的表达及其相关性研究被引量：6
2010年
目的检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白与EphA2蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达定位并探讨二者表达的相关性。方法采用细胞免疫荧光法检测HIF1a与EphA2在食管鳞状细胞癌细胞株Eca109中的表达与定位；采用免疫组化法检测HIF-1α与EphA2在41例食管鳞状细胞癌和25例正常食管组织中的表达；常氧和缺氧条件下，Western印迹法检测食管鳞状细胞癌细胞株Eca109和TE13经RNA干扰（RNAi）技术特异性沉默HIF-10后EphA2表达的变化。结果①细胞免疫荧光结果显示HIF-1α和EphA2均在Eca109细胞胞质表达。②免疫组化结果显示HIF-la在食管鳞状细胞癌和正常食管组织中的阳性表达率分别为70．73％（29／41）和0％（0／25），两者比较差异有统计学意义（P〈O．05）。EphA2在食管鳞状细胞癌和正常食管组织中的阳性表达率分别为78．04％（32／41）和28％（7／25），两者比较差异有统计学意义（P％0．05）。相关性检验提示HIF-1d和EphA2在食管鳞状细胞癌中表达呈正相关性（r-0．5654，x2=13．11，P〈0．05）。③Western印迹结果显示在食管鳞状细胞癌细胞株Ecal09和TEl3中，EphA2表达随HIF-1α的沉默而受抑制。结论HIF-1α与EphA2在食管鳞状细胞癌组织中呈高表达，且二者表达呈正相关；EphA2表达受HIF-1α的调控，可能为HIF-1α的靶基因。
金海林施瑞华朱宏张伟锋曾楷峰都波
关键词：食管肿瘤缺氧诱导因子-1EPHA2RNA干扰
缺氧对食管癌细胞缺氧诱导因子-1α及己糖激酶表达的影响被引量：2
2011年
目的探讨不同缺氧程度对食管癌细胞株TE1中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及糖酵解关键酶表达的影响。方法 TE1细胞分别在正常氧分压和缺氧条件下培养,缺氧时间设定为6、12、24及48h,使用Western blot方法检测缺氧培养不同时间后细胞中HIF-1α及糖酵解关键酶己糖激酶II(Hexokinase-II,HK-II)的蛋白水平表达变化。结果常氧及缺氧条件下TE1细胞中HIF-1α及HK-II均有表达,缺氧后表达均较常氧培养时明显增强,且随缺氧时间不同而呈先增多后减少的动态变化。结论低氧能够增加食管癌细胞中HIF-1α及HK-II表达而促进糖酵解进程,联合抑制HIF-1α和糖酵解酶可能成为治疗食管癌的潜在的靶点。
唐娜娜唐娜娜施瑞华
关键词：缺氧诱导因子-1Α糖酵解食管癌
F框/WD40域蛋白7和c-myc蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及意义被引量：2
2015年
泛素蛋白酶体途径成员的异常表达或突变可导致包括恶性肿瘤在内的多种疾病的发生[1].作为泛素蛋白酶体途径的重要识别因子之一,F框/WD40域蛋白7（F-box and WD-40 domain protein 7,FBXW7）作用的许多底物都是癌基因,如c-mye、细胞周期素E、c-jun和Notch等都是通过FBXW7介导的泛素蛋白酶体途径进行降解的[2-5].近年研究发现,FBXW7在多种肿瘤中的表达均有不同程度的缺失.
余海凌亭生施瑞华李杨束庆文檀祝利
关键词：C-MYC蛋白食管鳞状细胞癌泛素蛋白酶体细胞周期素EC-MYENOTCH
HIF-1α沉默对食管鳞癌血管生成拟态相关基因影响的体内研究被引量：2
2011年
目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默对人食管鳞癌细胞体内血管生成拟态相关基因表达的影响。方法:将食管鳞癌Eca109细胞株分为空白对照组(未转染组)、阴性对照组(转染空质粒组)和实验组(稳定转染重组质粒pGCsi-shHIF-1α组),接种裸鼠,观测裸鼠皮下移植瘤生长情况;HE染色观察各组肿瘤的异型性及坏死情况;免疫组化和Western blot法检测HIF-1α与上皮细胞激酶(EPHA2)、血管上皮钙黏附素(VE-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在肿瘤组织中的蛋白表达;RT-PCR检测移植瘤组织中HIF-1α与EPHA2、VE-cadherin、MMP-2的mRNA表达。结果:实验组出瘤时间延迟,生长速度减慢,移植瘤体积及重量明显减少(P<0.05);HE染色示肿瘤异型性减少,坏死显著增多;免疫组化及Western blot发现实验组HIF-1α蛋白表达完全沉默,EPHA2、VE-cadherin表达明显减少(P<0.05);RT-PCR提示实验组中HIF-1α及EPHA2、VE-cadherin、MMP2的mRNA含量均有不同程度减少,其中EPHA2、VE-cadherin减少明显(P<0.05)。结论:HIF-1α沉默能显著抑制食管鳞癌裸鼠移植瘤的生长,并能有效抑制移植瘤血管生成拟态相关基因EPHA2和VE-cadherin的表达,HIF-1α有可能通过以上2个位点参与食管鳞癌血管生成拟态的调控。
王璐王频丁宗励曾楷峰金海林朱宏施瑞华
关键词：血管生成拟态缺氧诱导因子-1Α食管鳞癌移植瘤
RNA干扰缺氧诱导因子1α对食管鳞癌和胃腺癌细胞生物学行为的影响被引量：8
2011年
目的探讨缺氧诱导因子1α（HIF－1α）对人食管癌及胃癌细胞体外增殖、迁移及血管生成拟态的影响。方法将HIF－lα－shRNA重组质粒pGCsi－shHIF－1α稳定转染人食管鳞癌细胞Eca－109和胃腺癌细胞SGC－7901，采用Western blot方法检测常氧及缺氧情况下各组转染细胞HIF－1α的抑制效果，采川平板克隆形成实验和四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测转染细胞的增殖活性，采用Transwell小室检测转染细胞的迁移能力，采用三维培养方法观察Eca－109和SGC－7901细胞能否形成血管网状结构及转染细胞株的管腔形成能力。结果常氧及缺氧情况下，各转染组细胞HIF－lα蛋白表达最均为0，与未转染组（Eca－109组分别为0．74±0．05和1．11±0．06，SGC-7901组分别为0．60±0．05和0．96±0．07）比较，表达均被显著抑制（均P〈0．01）。与空载体组和未转染组相比，转染组细胞的增殖活性显著降低（均P〈0．05），体外迁移能力显著降低（均P〈0．01）。Eca－109细胞株各组中，常氧情况下，Eca－109组和Eca－109／shRNA组形成管状结构数目分别为（30．8±3．9）个和（3．7±2．8）个，差异有统计学意义（P〈0．01）；缺氧情况下，分别为（34．3±3．4）个和（3．9±2．7）个，差异有统计学意义（P〈0．01）。缺氧情况下，Eca－109组形成管状结构数目较常氧时明显增加（P〈0．05）。SGC-7901细胞株各组中，常氧情况下，SGC-7901组和SGC-7901／shRNA组形成管状结构数目分别为（26．2±3．4）个和（4．9±3．5）个，差异有统计学意义（P〈0．01）；缺氧情况下，分别为（30．1±4．1）个和（5．3±3．6）个，差异有统计学意义（P〈0．01）。缺氧情况下，SGC-7901组形成管状结构数目较常氧时明显增加（P〈0．05）。结论Eca－109细胞和SGC-7901细胞均能形成血管生成拟态管状结构。RNA下扰沉默HIF－1能有效抑制Eca－109细
曾楷峰金海林张伟锋肖斌朱宏郝波施瑞华
关键词：血管生成拟态缺氧诱导因子1ΑRNA干扰
江苏汉族人群白细胞介素-23受体基因多态性与炎症性肠病及其表型的关系被引量：7
2011年
目的探讨江苏汉族人群中IL一23受体基因多态性与炎症性肠病及其表型的关系。方法选取178例炎症性肠病患者[溃疡性结肠炎（UC）135例，克罗恩病（CD）43例]和134例健康对照，检测IL-23受体基因的6个单核苷酸多态性位点（rs11805303、rs1343151、rs11465804、rs11209032、m17375018、rs11465788）的基因多态性，分析其与UC、CD各临床表型的关联性。结果rs11805303的T等位基因频率在UC中为60．4％，高于对照组（50．4％），P=0．020。UC的基因一表型分析显示，rs17375018位点的基因多态性与结肠炎活动性指数（UCDAI）即UC的严重程度相关，携带等位基因G的患者倾向于发生轻度UC。CD的基因一表型分析显示，rs17375018位点的A等位基因频率在诊断年龄≤25岁的CD患者中明显高于诊断年龄〉25岁的患者（41．7％比22．0％，P=0．050，OR=2．532，95％C／0．988～6．494）；rs11805303位点的基因型与CD的诊断年龄、病变范围有关联性（P值分别为0．039和0．044）；rs17375018位点的A等位基因携带者发生肠外表现的几率较等位基因G携带者低（23．1％比46．7％，P=0．040，OR=2．917，95％CI 1．027～8．283）。结论在江苏汉族人群中，rs11805303是UC的易感基因位点，同时rs11805303、rs17375018位点的基因多态性与UC、CD的临床表型有关联性。
赵晓丹沈方程张红杰沈秀云王亚民杨晓钟屠惠明邰雅宏施瑞华
关键词：多态性单核苷酸炎性肠疾病
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