宁夏回族自治区自然科学基金(NZ0540)
- 作品数：20 被引量：66H指数：7
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- 细粒棘球绦虫(中国大陆株)诊断抗原P-29基因的表达、纯化及免疫原性初步分析被引量：6
- 2009年
- 目的对细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)诊断抗原P-29(diagnostic antigen P-29)重组质粒进行原核表达、纯化,并初步分析重组蛋白的免疫原性。方法从重组质粒EgP-29/pGEM-T中获取诊断抗原P-29基因,亚克隆于表达载体pET-28a构建基因工程菌株,并表达、纯化重组蛋白,经Western-blot、ELISA分析重组蛋白的免疫原性。结果成功构建原核重组表达载体EgP-29/pET-28a/BL21(DE3)plysS,并纯化出浓度较高的重组蛋白。ELISA检测显示,用表达、纯化的重组蛋白免疫小鼠,诱导产生了特异性抗体IgG,Western-blotting鉴定该抗体能识别重组抗原及天然抗原原头蚴。结论重组蛋白具有良好的免疫原性。
- 师志云李昭宇卜阳王娅娜李宗吉马锐赵巍
- 关键词：细粒棘球绦虫蛋白表达纯化免疫原性
- 细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因的克隆和序列分析被引量：7
- 2007年
- 目的获得细粒棘球蚴(E.granulosus)诊断抗原(diagnostic antigen)P-29基因并进行序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据GenBank公共数据库检索出细粒棘球蚴诊断抗原P-29基因的已知序列设计一对引物,通过RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因,将其重组到pGEM-T载体后进行序列测定和分析。结果成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因,测序表明该片段由717bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为100%,推导编码氨基酸序列同源性为100%。结论成功克隆细粒棘球蚴中国大陆株诊断抗原P-29基因序列,可做为包虫病重组抗原的候选基因。
- 师志云王娅娜马锐于晶晶于辛酉高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴克隆
- 细粒棘球蚴中国大陆株亲肌肉抗原重组蛋白的表达、纯化及免疫学鉴定被引量：9
- 2008年
- 目的对细粒棘球蚴中国大陆株亲肌肉基因(myophilin)的重组质粒进行原核表达、纯化,并初步鉴定重组蛋白的免疫学特性,为重组疫苗研制的后续工作提供依据。方法对已构建的基因工程菌株myophilin/pGEM-T/JM109进行酶切,获取目的基因。将目的基因亚克隆于表达载体pET28a构建基因工程菌株,筛选阳性表达菌株并进行诱导表达、经SDS-PAGE鉴定重组myophilin蛋白。以纯化的myophilin做抗原免疫小鼠,用Western blot、ELISA对该蛋白的免疫原性及免疫鼠血清抗体水平进行检测。结果成功构建含原核重组表达载体myophilin/PET28a/BL21,并纯化出浓度较高的重组蛋白;ELISA检测显示,用表达、纯化的重组蛋白免疫小鼠,诱导产生了一定水平的血清抗体;实验组血清与对照组血清抗体含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论纯化后的重组蛋白myophilin具有较强的免疫原性,有望作为包虫病候选疫苗进一步研究。
- 马锐师志云于晶晶王淑静王洁张焱高岭赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴基因克隆纯化
- 细粒棘球绦虫(中国大陆株)亲肌肉抗原重组蛋白的免疫保护性研究被引量：5
- 2010年
- 目的探讨细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)亲肌肉抗原重组蛋白的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。方法ICR小鼠随机分为蛋白免疫组和佐剂对照组,每隔2w皮下免疫1次,在第3次免疫后2周,用Eg原头蚴进行攻击感染,感染后20w剖杀小鼠,检获棘球蚴包囊,计算免疫保护力,并用ELISA法测定血清中IgG及其亚型和IgE水平。结果与佐剂对照组比较,蛋白免疫组小鼠的免疫保护力为94.46%;与免疫前比较,免疫后和攻击感染后蛋白免疫组小鼠血清IgG、IgG1、IgG3和IgE水平均明显升高(P<0.05),IgG2b降低(P<0.05)。结论细粒棘球绦虫亲肌肉抗原重组蛋白能诱导小鼠产生一定的保护性免疫,是潜在的疫苗候选抗原分子。
- 马锐师志云李昭宇王娅娜李宗吉赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴EG免疫保护
- 细粒棘球蚴重组HSP70基因的表达、纯化及免疫学鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70)基因的重组质粒并原核表达、纯化及对其免疫特性进行鉴定。方法从重组质粒HSP70/pGEM-T中酶切HSP70目的片段,亚克隆入表达载体pET-28a,转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)plysS进行融合表达,经His-band树脂纯化试剂盒小量纯化,SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物。结果成功构建Eg.HSP70/pET-28a/E.coli BL21基因工程菌株,诱导表达重组蛋白和纯化分离得到14kDaEg.HSP70均能被细粒棘球蚴天然抗原免疫的兔多克隆抗血清识别。结论初步证实该重组蛋白具有较好的抗原性。
- 于晶晶于辛酉王娅娜师志云马锐卜阳罗永云赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴纯化
- 细粒棘球绦虫重组Egmyophilin蛋白诱导免疫小鼠脾细胞增殖及细胞因子水平的变化被引量：2
- 2012年
- 目的探讨细粒棘球蚴绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)亲肌肉抗原重组疫苗(Egmyophilin)诱导ICR小鼠产生免疫保护机制。方法将亲肌肉抗原重组疫苗皮下注射免疫ICR小鼠,同时设空质粒组及PBS对照组。末次免疫后8w,用棘球绦虫原头节腹腔注射进行攻击感染,感染后20w剖杀小鼠,取脾,脾细胞悬液加入EgAg、ConA(刀豆蛋白A)或脂多糖(LPS)刺激培养后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖情况;Annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)双染色法检测脾细胞的凋亡发生率;常规ELISA法检测脾细胞培养上清液中IL-2、IL-10、IFN-γ和TNF-α水平。结果与空质粒组及PBS对照组相比,脾细胞凋亡发生率明显降低,脾T淋巴细胞增殖水平显著升高,脾细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ和TNF-α水平显著增高,IL-10水平明显降低。结论棘球蚴绦虫亲肌肉抗原重组疫苗可诱导免疫鼠脾T淋巴细胞增殖,以诱导Th1型免疫应答为主,对抗Eg原头蚴攻击感染。
- 马锐师志云王娅娜李宗吉孙俊峰赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴细胞因子
- 细粒棘球蚴重组铁蛋白（中国株）疫苗诱导抗攻击感染保护力的观察
- 2010年
- 目的 探讨细粒棘球蚴重组铁蛋白疫苗对原头蚴攻击感染的保护性效果.方法 ICR小鼠随机分为3组（每组12只）：A组（实验组）、B组（佐剂＋PBS组）、C组（空白对照组）,A组、B组共免疫3次,每次间隔2周,C组不做任何处理;免疫接种后8周3组均以1100只原头蚴攻击感染,每次免疫前及攻击感染前断尾取血,留取血清;攻击感染后7个月,剖杀小鼠,查检腹腔内包囊数进行统计学分析.结果 实验组与佐剂对照组、空白对照组比较,其结果均具有统计学意义（P＜0.05）,经计算保护力分别为：73%,85%;佐剂组与空白对照组比较,其结果亦具有统计学意义（P＜0.05）,经计算保护力为：42%.结论 细粒棘球蚴重组铁蛋白可诱导小鼠产生部分免疫保护力,可作为＂鸡尾酒＂疫苗的组成部分进一步研究.
- 卜阳李昭宇罗永云于晶晶于辛酉师志云马锐赵巍
- 关键词：免疫疗法细粒棘球蚴保护力
- 细粒棘球蚴重组抗原P-29结构与功能的生物信息学分析被引量：1
- 2011年
- 目的应用生物信息学分析软件预测细粒棘球蚴重组抗原P-29氨基酸序列的结构与功能。方法应用NCBI、Expasy等在线生物信息学网站及DNAstar、Rasmol等软件包分析P-29与其他物种的同源序列,进行多序列同源比对;预测二级结构、三级结构;预测主要抗原表位等。结果细粒棘球绦虫重组抗原P-29与其他物种的同源性比对结果表明与多房棘球绦虫同源性最高为97%,依次为日本血吸虫73.9%,冈比亚按蚊70.5%,埃及伊蚊66.2%;预测该蛋白分子质量约为27 ku,PI为5.69,具有1个跨膜区,位于212-215,8个抗原表位,其结构域位于5-238位。结论生物信息学预测结果提示该可能是免疫诊断、药物作用及疫苗潜在的靶分子。
- 丁淑琴师志云朱佳佳赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴生物信息学
- 细粒棘球蚴铁蛋白基因的克隆重组高效表达及免疫学初步研究被引量：12
- 2006年
- 目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus Eg)铁蛋白(ferritin)基因的原核表达重组质粒并表达、纯化该重组蛋白,初步研究其免疫反应。方法将细粒棘球蚴铁蛋白基因亚克隆于表达载体pGEX-6p-1,转化重组体到大肠杆菌Bl21中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达;用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行初步鉴定,用切胶纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,通过Western-blot对该蛋白的免疫学特性进行初步研究。结果重组铁蛋白与GST以融合表达的形式在细菌中高效表达,表达产物为不可溶性的包涵体,蛋白分子量约为42 kD。融合蛋白Egferritin/GST能被细粒棘球蚴免疫的家兔血清和特异性小鼠抗血清所识别,同时特异性小鼠抗血清可识别天然抗原囊液、原头蚴可溶性蛋白中约19 kD的蛋白条带。结论成功地表达细粒棘球蚴重组铁蛋白,并且该蛋白有一定的免疫原性及抗原性。
- 王娅娜丁淑琴王健张焱王洁王淑静赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴铁蛋白基因克隆免疫原性
- 细粒棘球蚴Eg10基因的克隆、表达及免疫特性研究被引量：7
- 2010年
- 目的克隆、表达细粒棘球蚴分离株Eg10基因,并研究其重组蛋白的免疫特性。方法将细粒棘球蚴Eg10基因亚克隆于表达载体pET28a,转化重组质粒至大肠埃希菌BL21进行融合表达,His-bind树脂纯化系统纯化重组融合蛋白,以之作为抗原免疫小鼠。48只ICR小鼠随机均分为4组,A、B组为对照组,分别注射不含抗原的磷酸盐缓冲液(PBS)和福氏佐剂+PBS,每鼠皮下注射100μl。C、D组为免疫组,注射用福氏佐剂乳化的重组抗原Eg10,抗原量分别为0.1mg/μl和0.5mg/μl,每鼠皮下注射100μl。各组小鼠每隔2周免疫1次,共免疫3次。于免疫前和免疫后2、4、6、8和10周采血以获得抗血清。通过蛋白质印迹(Westernblotting)分析和ELISA检测重组抗原的免疫学特性。结果成功构建含目的片段Eg10的基因工程菌株。Westernblotting分析结果表明,免疫血清能识别重组抗原Eg10。ELISA检测结果显示,用重组蛋白免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。统计学分析表明,免疫后C、D组抗体水平逐渐升高,至第8周抗体滴度达最高值,分别为(1.143±0.253)和(1.254±0.070);A、B组抗体一直维持在较低水平。第2、4、6、8和10周,A、B与C、D组间抗体水平差异有统计学意义(均P<0.05),C、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功表达细粒棘球蚴重组蛋白Eg10,该蛋白有一定的免疫原性。
- 杜娟张炜王娅娜王洁王淑静张焱高鹏李居怡赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴免疫特性
