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不同生境中芽孢杆菌的分离鉴定及药敏性检测被引量：9: 2007年; 为了给农业生产(发酵饲料、堆肥、污水处理)及微生态调节剂的制备提供前期理论依据和优良的微生物资源,本研究以土壤、饲料和肥料为材料,分离筛选出22株优良的芽孢杆菌菌株,按《伯杰氏细菌学鉴定手册》和芽孢杆菌特有的生理生化指标对其进行了初步鉴定,结果显示,其中的T-1为多粘类芽孢杆菌(Bacillu spaenibacillus polymyxa);T-2为桥石短芽孢杆菌(Bacillus choshinensis);T-6为软骨酸类芽孢杆菌(Bacillus paenibacilluschondroitinus);T-8为解淀粉类芽孢杆菌(Bacillus paenibacillus amyloyticus);S-4为饲料类芽孢杆菌(Bacilluspaenibacillus pabuli);S-6为哥本类芽孢杆菌(Bacillus paenibacillus kobensis)。其余的16株芽孢杆菌还有待于进一步鉴定。在此基础上,采用纸片琼脂扩散法测定了已鉴定出的6株芽孢杆菌对常用的12大类35种抗生素的药敏性。结果显示,分离自土壤、饲料及堆肥中的芽孢杆菌均对喹诺酮类、氨基糖甙类、大环内酯类和糖肽类抗菌素表现出敏感性,大部分对多肽类抗菌素表现出耐受性,其他抗菌素则在不同芽孢杆菌菌株间表现出差异性。; 于雅琼陈红艳李平兰周伟; 关键词：芽孢杆菌

传统干酪中一株产Ⅱa类细菌素乳酸菌的分离与鉴定被引量：26: 2007年; 从内蒙古传统干酪中分离到一株产抑菌活性物质的乳酸菌M-2,其对单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌等食品中常见致病菌和腐败菌都有抑制作用。排除有机酸、H_2O_2等的干扰后,仍有抑菌活性:进一步硫酸铵沉淀、透析及浓缩处理后,其抑菌活性显著增强;用蛋白酶K处理后,其抑菌活性消失,因此确定该抑菌活性物质为蛋白类物质,进而确定乳酸菌M-2为细菌素产生菌。通过生理生化实验和16SrRNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定。PCR扩增得到1675bp的16SrRNA序列,并将其通过BLAST软件在NCBI网站中进行同源性比,同时,通过Bioedit 7．0和Treedrawing软件绘制系统发育树。结果显示,M-2的16S rRNA序列和数据库中的屎肠球菌SF菌株的序列的同源性为99．87%。在细菌系统发育分类学上,M-2菌株归属屎肠球菌(Enterococcus faecium)。这与生理生化实验初步鉴定结果一致。根据细菌素的分类原则,将该细菌素归类为Ⅱa类细菌素。; 刘国荣周康李平兰张金兰周伟; 关键词：乳酸菌屎肠球菌

细菌素异源表达的研究进展被引量：4: 2010年; 细菌素有望成为抗生素替代品和新型绿色生物兽药,但细菌素野生菌种产量低,细菌素分离纯化困难,为了提高细菌素产量,许多研究者进行了细菌素异源表达研究,作者就细菌素异源表达进行了综述。; 余占桥杨芳张日俊; 关键词：细菌素异源表达

乳酸菌素基因PlnE和PlnF在大肠杆菌中的异源表达被引量：4: 2010年; 为获得高产量纯品植物乳杆菌素PlnE和PlnF,研究其开发生物兽药的可能,试验通过人工合成植物乳杆菌素基因PlnE和PlnF,构建表达载体pGEX-4T-E和pGEX-4T-F,经IPTG诱导表达条件优化后,进行亲和层析纯化融合表达蛋白,并使用SDS-PAGE进行鉴定。试验结果表明,pGEX-4T-E和pGEX-4T-F构建成功,纯化后获得2种产量高达30%的纯品融合蛋白,SDS-PAGE鉴定两融合蛋白表达正确。说明PlnE和PlnF基因片段编码的多肽能在原核细胞中正确表达,为进一步研究该细菌素的生物活性奠定了基础。; 杨芳余占桥张日俊; 关键词：植物乳酸杆菌细菌素原核表达融合蛋白

慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定被引量：10: 2009年; 目的:筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞的寡核苷酸适体.方法:体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库,以正常人血液中提取的中性粒细胞为反筛细胞,利用指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选出与CMLK562细胞特异结合的适体.将筛选得到的适体回收纯化后连接pGEM-T质粒载体,经蓝白筛选后,随机挑选24个克隆子进行序列测定.采用荧光标记引物法检测ssDNA文库与K562细胞的亲和力,并用Clustal 2.05和DNA sis V2.5软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测.结果:经过13轮循环筛选,CML K562细胞适体的A值从0.12上升到1.25,至第13轮A值无明显增高.一级结构分析无同源序列,但可分为6个家族,其中5个家族各自具有保守序列,家族6无保守序列.二级结构分析表明,适体形成的茎环、凸环结构可能是与K562细胞特异性结合的结构基础.结论:利用SELEX技术成功筛选出高亲和性的CML K562细胞适体.; 刘玲玲韩跃武祝凯华李真真韩亚萍路艳王春霞; 关键词：白血病髓样 K562细胞 SELEX 适体

毕赤酵母优化表达外源蛋白策略被引量：15: 2010年; 毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是一种异源蛋白表达的理想系统,但目前并非所有的外源蛋白都能在毕赤酵母中成功高效表达,不同的蛋白表现为不同表达水平、生物活性及稳定性。从遗传因素和表达条件综述了外源蛋白在毕赤酵母中的优化表达策略。; 余占桥马青山赵龙妹张日俊; 关键词：毕赤酵母外源蛋白

乌梅酸枣仁提取物对鸡人工感染传染性法氏囊病的疗效试验被引量：5: 2010年; 本试验旨在验证乌梅酸枣仁提取物对鸡传染性法氏囊病的预防和治疗效果。以鸡传染性法氏囊LX毒株感染未接种法氏囊疫苗的雏鸡,建立动物模型;以自拟乌梅酸枣仁提取物分高、中、低3个剂量组口服,以黄芪多糖为对照,评价其预防和治疗鸡传染性法氏囊病的疗效。结果表明:①人工感染鸡传染性法氏囊病毒后,预防试验中测试药物中剂量组、黄芪多糖组的相对增重率分别为81.85%和48.24%;成活率分别为87.5%和100%。统计分析结果表明,测试药物中剂量组的相对增重率显著高于黄芪多糖组(P<0.05),两组成活率差异不显著(P>0.05);中剂量组、黄芪多糖组的法氏囊指数分别为0.187和0.123,脾脏指数分别为0.361和0.286。中剂量组的免疫器官指数均明显高于黄芪多糖组,差异显著(P<0.05)。②治疗试验中,测试药物中剂量组、黄芪多糖组的相对增重率分别为29.55%和46.1%,成活率分别为100%和80%。中剂量组、黄芪多糖组的法氏囊指数分别为0.22和0.25,脾脏指数分别为0.34和0.36。经过统计学分析,上述两试验组的各项指标差异均不显著(P>0.05)。由此可知,乌梅酸枣仁提取物以200mg/kg体重口服,连续5d能有效提高人工感染传染性法氏囊病鸡的成活率,且预防和治疗保护率均超过80%;测试药物通过提高鸡法氏囊、脾脏指数而发挥增强机体免疫功能抵抗病毒侵害的功效。; 李树梅张发明李应超欧长波陈慧陈曦何诚; 关键词：传染性法氏囊病疗效

生物兽药新产品研究与创制: 2010年; 本课题针对目前我国畜禽疫病频繁发生、药物残留和食品安全、病原微生物多重耐药性等重大问题开展了大量和富有创造性的研究，经过近2年的实施全面完成了合同规定的任务和指标，取得了显著的成效。; 关键词：生物兽药多重耐药性病原微生物畜禽疫病药物残留

胆盐水解酶的分离纯化与部分特性研究被引量：12: 2007年; 为了给胆盐水解酶结构分析及降低血液胆固醇的机理研究提供理论基础,采用硫酸铵分级沉淀、透析、阴离子交换树脂层析等方法对分离自我国传统开菲尔粒中的1株干酪乳杆菌KTx(lactobillus casei KTx)产生的胆盐水解酶进行了纯化,并对其部分特性进行了研究。结果表明:在70%的硫酸铵条件下酶蛋白能最大程度地沉淀。采用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂层析,流速1.0mL/min,用0.1mol/L NaCl-50mmol/L磷酸缓冲液(pH6.5)洗脱,比活力可达到115(AU/mg),是原粗酶液的17倍。纯化后的样品经SDS-PAGE电泳,初步确定了胆盐水解酶的分子质量约30kDa。该酶的最适反应温度35℃,最适pH6.0,最适反应底物浓度6mmol/L,酶促反应动力学常数4.57mmol/L。抑制剂对此酶的抑制作用强弱顺序依次为:尿素>SDS>EDTA。Al3+对此酶的激活能力最强,其次是Fe3+,Zn2+对酶活无激活作用。; 王玉文王延祥李平兰刘慧张燕; 关键词：胆盐水解酶纯化

Ⅱa类细菌素的结构、生物合成与活性被引量：14: 2007年; 乳酸菌产生的细菌素中Ⅱa类细菌素是很大的一类,这类细菌素数量众多且抑菌活性广,尤其是它们都对单核细胞增生李斯特氏菌有较强的抑菌活性,而且它们的理化性质也比较稳定,因而它们是最有希望作为食品添加剂应用的细菌素。对目前研究比较清楚的一些Ⅱa类细菌素的分子构成、基因组织、生物合成、作用方式进行了概述,并对未来Ⅱa类细菌素在食品中的应用途径做出了展望。; 吕燕妮李平兰周伟刘国荣郭兴华; 关键词：李斯特氏菌生物合成

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国家高技术研究发展计划(2006AA10A208)

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