天津市科技支撑计划(12ZCZDNC00900)
- 作品数：10 被引量：59H指数：6
- 相关作者：徐晓丽邵蓬姚学良张勤包海岩更多>>
- 相关机构：天津市水产技术推广站天津师范大学天津市水生动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：天津市科技支撑计划天津市农业科技成果转化与推广项目天津市科技计划与项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 红尾皇冠鱼无乳链球菌病LAMP检测方法的建立与应用被引量：5
- 2014年
- 以cfb基因保守序列的6个区域设计4条特异性引物,利用链置换DNA聚合酶（Bst DNA polymerase）在恒温（65℃）下保温40 min,建立了无乳链球菌Streptococcus agalactiae的LAMP技术。建立的LAMP方法能够特异性地检测无乳链球菌,检测灵敏度为3.7×10^1～3.7×10^2cfu/mL,反应前加入显色剂钙黄绿素避免二次污染。现场应用中采用FTA卡采集红尾皇冠鱼Aequidens rivulatus病鱼肝脏组织病原菌,操作简便、快捷。研究表明,针对无乳链球菌cfb基因建立的LAMP检测方法具有较高的特异性及稳定性,尤其是具有快速、简便、成本低等优点,可用于无乳链球菌的野外现场快速检测。
- 姚学良徐晓丽李贺密包海岩任涵玮郑艳坤
- 关键词：无乳链球菌
- 半滑舌鳎体表溃疡病病原的分离鉴定被引量：13
- 2015年
- 为研究引起半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)体表溃疡病的病原,从发生体表溃疡的半滑舌鳎体表病灶、肝脏和肾脏上进行细菌分离,得到2株优势菌株051001和051002,采用腹腔注射进行回感实验,证实菌株051001和051002能够引起养殖半滑舌鳎发病死亡,该菌株为本次半滑舌鳎体表溃疡病的致病菌。经形态学观察和生理生化特性分析,初步判定菌株051001为鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri)、菌株051002为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi);基于16SrRNA基因构建的系统发育树显示,菌株051002与哈维氏弧菌聚为一支,菌株051001与鱼肠道弧菌聚为一个分支;基于hsp60的基因序列分析表明051002与哈维氏弧菌(AY332570、AF230931)聚为一个分支,置信度为92%。对16种药物的敏感实验证实,菌株051001对利福平、庆大霉素、氟苯尼考等敏感,菌株051002对诺氟沙星、头孢曲松钠、庆大霉素敏感。
- 徐晓丽邵蓬李贺密姚学良郑艳坤包海岩
- 关键词：半滑舌鳎体表溃疡病弧菌病原鉴定药敏实验
- 豹纹鳃棘鲈病原鳗利斯顿氏菌的分离鉴定及生物学特性研究被引量：7
- 2015年
- 从患病的豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)的肾脏中分离到1株优势菌33002,人工感染试验证实其对豹纹鳃棘鲈有较强的致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析及16SrRNA和gyrB基因序列系统发育树分析对菌株33002进行鉴定。结果显示,菌株33002为革兰氏阴性弧菌,生化特性与利斯顿氏菌属的鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)相近,基于gyrB基因序列的系统发育分析,菌株33002与鳗利斯顿氏菌聚为一支。对48种抗生素的药敏结果显示,菌株33002对红霉素、阿奇霉素等25种药物敏感,对恩诺沙星、杆菌肽等22种药物不敏感。
- 姚学良徐晓丽张振奎丁子元宋昀鹏崔宽宽
- 关键词：鳗利斯顿氏菌生理生化特性RRNAGYRB
- 豹纹鳃棘鲈致病性哈维氏弧菌的分离鉴定与系统发育分析被引量：16
- 2014年
- 为探明养殖豹纹鳃棘鲈体表溃疡症的病因,从患病豹纹鳃棘鲈血液及内脏、体表溃疡处分离到2株优势菌,其中编号为1031的菌株经人工感染证实能够引起被感染鱼的死亡,为引起该豹纹鳃棘鲈溃疡病的病原菌。采用形态学、生理生化特性鉴定,结果表明菌株1031与弧菌属的基本特征相符,分别基于16SrDNA序列及热激蛋白60基因(hsp60)序列构建的系统发育树将菌株1031与哈维氏弧菌聚为一支,置信度均为97%,以1031为模板特异性扩增哈维氏弧菌toxR基因,也得到了预期382bp的核酸片段。综合以上结果,最终确定此次豹纹鳃棘鲈体表溃疡症的病原为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。药敏结果显示,该菌株仅对氟苯尼考、庆大霉素(120μg)、菌必治敏感,对诺氟沙星、恩诺沙星、阿奇霉素、强力霉素等均不敏感。
- 徐晓丽邵蓬李灏任涵玮张勤
- 关键词：哈维氏弧菌RDNAHSP60
- 半滑舌鳎腹水症病原的分离鉴定被引量：6
- 2015年
- 从患病半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)内脏及腹水中分离到优势菌株8301,回归感染试验证实菌株8301对半滑舌鳎具有致病性;采用形态学观察、生化特性分析、16S rDNA基因序列分析等方法对所分离菌株进行鉴定。结果表明,菌株8301为革兰氏阳性球菌,生化特性与海豚链球菌(Streptococcus iniae)较为接近,以16S rDNA基因为遗传标记构建系统发育树将菌株8301与海豚链球菌聚为一支,置信度为96%。结果判定引起此次半滑舌鳎腹水病的病原菌为海豚链球菌。对24种抗菌药物敏感性分析试验证实菌株8301对制霉菌素、利福平、青霉素、阿奇霉素等敏感,对罗红霉素、呋喃唑酮等具有抗性。
- 徐晓丽尤宏争宋昀鹏钟文慧李贺密
- 关键词：半滑舌鳎腹水症海豚链球菌RDNA
- 剑尾鱼烂鳃、烂尾病病菌的分离鉴定被引量：7
- 2014年
- 从有明显烂尾、烂鳃症状的剑尾鱼(Xiphophorus hellerii)体表病灶处、鳃及肝脏分离出优势菌株(1201F、1201H),分别采用肌肉注射和腹腔注射方式进行人工感染实验,证实菌株1201F和1201H均能够独立引起养殖剑尾鱼发病死亡,其对剑尾鱼的半数致死量分别为2.99×107cfu/尾、1.19×106cfu/尾。经形态学观察、生理生化特性分析以及16S rDNA基因测序确定菌株1201F为柱状黄杆菌(Flavobacterium cloumnare),菌株1201H为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。其中菌株1201F与柱状黄杆菌(AB078047)的亲缘关系最近,置信度为90%;菌株1201H与维氏气单胞菌的亲缘关系最近,与维氏气单胞菌(JQ795750)聚为一个分支,置信度高达93%。对24种药物的敏感实验证实菌株1201F和菌株1201H同时敏感的抗生素有阿奇霉素、诺氟沙星、恩诺沙星、左氟沙星、环丙沙星。
- 徐晓丽邵蓬崔宽宽丁子元蔡琰张勤
- 关键词：FLAVOBACTERIUMAEROMONASXIPHOPHORUS
- 美人鱼发光杆菌杀鱼亚种LAMP快速检测方法的建立与应用被引量：1
- 2021年
- 建立了美人鱼发光杆菌杀鱼亚种的环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)。针对IGS2基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,利用链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温65℃下保温40 min。采用钙黄绿素作为显色剂,FTA卡采集病样肝组织中病原菌核酸。结果显示:以IGS2基因建立的LAMP方法能够特异性检测美人鱼发光杆菌杀鱼亚种,检测灵敏度为2.6×102 cfu/mL。针对美人鱼发光杆菌杀鱼亚种IGS2基因建立的LAMP检测方法具有较好的特异性和稳定性,可用于美人鱼发光杆菌杀鱼亚种的野外现场快速检测。
- 姚学良蔡琰徐晓丽钟文慧包海岩
- 关键词：LAMP
- 哈维氏弧菌胶体金免疫层析试纸条的制备被引量：2
- 2015年
- 用18~20nm胶体金标记抗哈维氏弧菌Vibrio harveyi抗体并制备金标垫,分别将羊抗兔Ig G和纯化后的抗哈维氏弧菌抗体包被于NC膜上作为质控线和检测线,组装制作了哈维氏弧菌胶体金免疫层析试纸条,优化了该试纸条的制作条件,测试了其性能。结果表明：所制备的哈维氏弧菌免疫层析试纸条具有较好的特异性,与费尼斯弧菌Vibrio furnissii、维氏气单胞菌Aeromonas veronii、美人鱼发光杆菌Photobacterium damselae、类志贺邻单胞菌Plesiomonas Shigelloides、鱼肠道弧菌Vibrio ichthyoenteri、鳗利斯顿氏菌Listonella anguillarum、迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda、海豚链球菌Streptococcus iniae、嗜水气单胞菌Aeromonas Hydrophila等9种常见水产病原菌无明显交叉反应,检测灵敏度为3×10^5CFU/m L,5~10min即可得出检测结果,具有快速、简便、特异性强和适应基层推广应用等优点,可用于养殖鱼类病原哈维氏弧菌的现场检测。
- 刘亦娟徐晓丽孙金生
- 关键词：哈维氏弧菌胶体金免疫层析试纸条
- 红尾皇冠鱼(Aequidens rivulatus)病原无乳链球菌的分离、鉴定与特性分析被引量：7
- 2015年
- 为查明天津地区养殖红尾皇冠鱼(Aequidens rivulatus)大量死亡的原因,取患病红尾皇冠鱼进行细菌分离,从病鱼肾脏中分离到优势菌株071901,人工感染试验证实其对红尾皇冠鱼有较强的致病性;采用形态学观察、生理生化特性、16S r RNA基因序列系统发育树分析及cfb(GBS-specific gene cfb,CAMP factor)基因检测对菌株071901进行鉴定。结果显示,菌株071901为革兰氏阳性球菌,生化特性与链球菌属的无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)相近,基于16S r RNA基因序列的系统发育分析将菌株071901与无乳链球菌聚为一支,以071901为模板特异性扩增无乳链球菌的cfb基因,也得到了预期的900 bp的核酸片段,进一步证实菌株071901为无乳链球菌。对30种抗生素的药敏结果显示,菌株071901对红霉素、阿奇霉素等19种药物敏感,对多粘霉素、罗红霉素、呋喃唑酮等11种药物耐药。
- 姚学良徐晓丽李贺密钟文慧臧莉李灏杨超敬
- 关键词：无乳链球菌生物学特性RRNACFB
- 丝足鲈致病性诺卡氏菌的鉴定及系统发育分析被引量：8
- 2013年
- 为查明养殖的丝足鲈内脏结节病的病因,由患病丝足鲈内脏分离到菌株1214,并对该菌进行了鉴定及致病性验证。结果显示所分离菌株1214革兰氏染色呈阳性,长短不一,为丝状分支状杆菌;回归感染试验证实菌株1214为引起此次丝足鲈结节病的病原菌;生理生化鉴定结果表明菌株1214与诺卡氏菌属细菌的基本特征相符;对该菌株的16SrDNA序列分析显示其与鱼诺卡氏菌JCM 3360的16SrDNA序列同源性最高,达到99.9%。综合以上结果最终确定此次丝足鲈结节病的病原为鱼诺卡菌。药敏试验结果显示,该菌株对红霉素、氟苯尼考、链霉素、强力霉素、阿奇霉素等抗生素敏感,但对磺胺类和青霉素有耐药性。
- 徐晓丽李贺密邵蓬崔宽宽蔡琰张勤
- 关键词：诺卡氏菌热带观赏鱼药敏试验
