国家自然科学基金(81300348)
- 作品数：12 被引量：32H指数：3
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- C-sis基因对大鼠暴发性肝衰竭的抑制作用
- 2017年
- 目的探讨C-sis基因对暴发性肝衰竭(FHF)的影响。方法将重组质粒pc DNA3.1/C-sis注射入鼠尾静脉导入大鼠肝脏,48 h后用内毒素(LPS)联合D-半乳糖胺(D-GalN)处理大鼠建立FHF模型;实验分组:正常对照组,FHF+林格氏液注射组,FHF+空载质粒组,FHF+C-sis质粒组;利用荧光定量PCR和Western blot检测C-sis的表达;计算实验大鼠的死亡率;利用TUNEL来检测细胞凋亡;检测实验大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量。结果荧光定量PCR和Western blot结果显示,与正常对照组和FHF+空载质粒组比较,FHF+C-sis质粒组的C-sis mRNA和蛋白表达量明显增加(P均<0.01)。在24 h观察期内,正常对照组大鼠均存活,在FHF+林格氏液注射组和FHF+空载质粒组24 h内分别有70.00%和80.00%的大鼠死亡;而FHF+C-sis质粒组在24 h的观察期内死亡率仅20.00%。TUNEL检测结果显示,与空白对照组相比,FHF+林格氏液注射组肝脏组织中细胞凋亡增多(P<0.01);与FHF+空载质粒组相比,FHF+Csis质粒组肝脏组织中细胞凋亡减少(P<0.01)。与正常对照组比较,FHF+林格氏液注射组的ALT(P<0.01)和AST(P<0.05)含量升高;与FHF+空载质粒组比较,FHF+C-sis质粒组的ALT(P<0.01)和AST(P<0.05)含量降低。结论 C-sis基因能抑制LPS联合D-GalN诱导的大鼠FHF。
- 丁浩杜芳腾
- 关键词：C-SIS暴发性肝衰竭
- 大鼠C-sis基因克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2016年
- 背景:原癌基因C-sis具有促进细胞增殖并抑制凋亡,进而促进组织修复的功能。假设C-sis可能在受损肝组织的修复和暴发性肝衰竭的治疗中发挥积极作用。目的:构建pc DNA3.1/C-sis真核表达载体,检测其在大鼠正常肝细胞株BRL细胞和在体大鼠肝脏细胞中的表达。方法:通过RT-PCR的方法克隆C-sis基因的选全长编码序列,构建pc DNA3.1/C-sis真核表达载体。鉴定无误后经脂质体介导转染到BRL细胞中,并通过将质粒注入尾静脉后导入大鼠肝脏。最后通过荧光定量PCR和Western Blot鉴定其在BRL细胞和在体大鼠肝脏细胞中的表达。结果与结论:(1)成功克隆了C-sis基因全长编码区;测序证明pcD NA3.1/C-sis重组真核表达载体构建成功;(2)将其转染至BRL细胞和在体大鼠肝脏,可使C-sis表达升高;(3)实验结果为后续研究C-sis基因对大鼠暴发性肝衰竭的影响提供了先决条件。
- 孙国芳丁浩
- 关键词：C-SIS真核表达载体酶切
- 重组质粒pEGFP-N2/XPD转染条件及Pifithrin-α孵育条件的探索
- 2013年
- 目的探讨重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染条件和Pifithrin-α（P53抑制剂）的孵育条件。方法利用脂质体将质粒pEGFP-N2/XPD在不同质粒浓度时转染细胞以及转染后分别孵育不同时间,然后进行RT-PCR和Western blot检测着色性干皮病基因D（XPD）的表达。将Pifithrin-α在不同浓度时孵育细胞以及分别孵育细胞不同时间,然后进行MTT检测。结果 XPD的表达在质粒浓度为0~4μg·孔-1范围内呈剂量依赖性升高（P〈0.01）,而质粒浓度达到4μg·孔-1以后XPD的表达不再随浓度的增加而继续升高;转染后细胞孵育时间为48h时XPD mRNA的表达为最高（P〈0.05）,转染后细胞孵育时间为72h时XPD蛋白的表达为最高（P〈0.01）。细胞增殖活力在Pifithrin-α浓度为0~20μmol·L-1范围内呈剂量依赖性升高（P〈0.05）,而Pifithrin-α浓度达到20μmol·L-1以后细胞增殖活力不再随浓度的增加而继续升高;细胞增殖活力在Pifithrin-α孵育时间为0~24h范围内呈时间依赖性升高（P〈0.01）,而Pifithrin-α孵育时间达到24h以后细胞增殖活力不再随孵育时间的增加而继续升高。结论在后续的研究中,将以浓度为4μg·孔-1的pEGFP-N2/XPD质粒转染HepG2.2.15细胞,转染后的第2天以浓度为20μmol·L-1的Pifithrin-α孵育细胞24h,转染后共孵育细胞48h。
- 朱鹏翔李祺丁浩
- 关键词：着色性干皮病基因D质粒转染
- 176例梗阻性黄疸病因及诊治分析被引量：15
- 2016年
- 目的探讨梗阻性黄疸病因、诊断、治疗和转归。方法回顾性分析176例梗阻性黄疸的临床资料。176例中,恶性梗阻性黄疸108例[原发病中胰腺癌37例(34.26%)占首位],良性梗阻性黄疸68例;合并胆道感染20例。成功行经内镜逆行性胰胆管造影术(ERCP)85例、行经皮肝穿刺胆道引流术(PTCD)60例,由于ERCP未成功改行PTCD手术2例,行外科手术12例,予以药物保守治疗15例;自动出院32例,好转134例,死亡10例。结果恶性梗阻性黄疸总胆红素、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、CA-199均高于良性梗阻性黄疸;良性梗阻性黄疸患者的预后明显好于恶性梗阻性黄疸(P<0.05或P<0.01)。ERCP和PTCD的手术成功率比较差异无统计学意义(P>0.05),PTCD患者术后严重并发症的发生率高于ERCP(P<0.05);ERCP患者平均住院时间比PTCD组短,住院总费用比PTCD组少,但ERCP比PTCD手术费用高均(P<0.05)。结论梗阻性黄疸以恶性肿瘤为主,胰腺癌造成的胆道梗阻是最重要发病原因之一。恶性梗阻患者的肝损害水平较良性梗阻患者显著。外科手术和介入治疗已成为部分恶性梗阻的姑息性治疗手段。良性梗阻性黄疸比恶性梗阻性黄疸介入手术疗效、转归和预后要好。ERCP术住院费用、住院时间、并发症均低于PTCD术,而手术平均费用略高于PTCD术。
- 沈浩丁浩杜芳腾
- 关键词：梗阻性黄疸转归经皮肝穿刺胆道引流术
- 高压氧联合纳美芬治疗颅脑损伤的疗效被引量：2
- 2019年
- 目的研究高压氧联合纳美芬治疗颅脑损伤的疗效。方法选择393例颅脑损伤患者,按随机数字表法分成纳美芬组、高压氧组和高压氧+纳美芬组,每组各113例。3组患者均同时实施相应的常规治疗如抗生素、止血剂、脱水剂等。纳美芬组:在颅脑损伤后24h内开始给药,因病情需要紧急手术患者在手术后24h内接受常规治疗,并加用盐酸纳美芬注射液0.4mg静脉滴注,每天1次,连用2周。高压氧组:采用NG90型单人纯氧舱,所用压力值为0.20~0.25MPa,每天1次,每次维持时间80min,10d为1个疗程,共2个疗程,疗程之间间隔3d。高压氧+纳美芬组:联合使用高压氧和纳美芬治疗,方法同其他2组。比较3组的疗效(治疗后第7、14和21天依据格拉斯哥昏迷评分标准,治疗后6个月依据格拉斯哥预后评分标准)。结果治疗第7、14和21天和治疗后6个月高压氧+纳美芬组治疗总有效率均高于纳美芬组或高压氧组(均P<0.05)。结论相比单纯使用纳美芬或单纯使用高压氧治疗颅脑损伤,高压氧联合纳美芬治疗效果更为明显。
- 钟世亮丁浩吴水生
- 关键词：颅脑损伤纳美芬高压氧格拉斯哥评分
- 靶向Cyclin D1基因RNA干扰对肝癌细胞增殖和Mdm2等基因表达影响的研究被引量：10
- 2018年
- 目的探讨Cyclin D1表达下调对Mdm2等基因表达及人肝癌细胞增殖的影响。方法用脂质体将Cyclin D1-siRNA转染人肝癌细胞株Hep3B细胞。实验分为空白对照组、阴性对照siRNA组、Cyclin D1-siRNA组。采用RT-PCR和Western blot检测Cyclin D1、Mdm2、Mdm4、P53和P21表达,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞活力,TUNEL检测细胞凋亡。结果与空白对照组和阴性对照siRNA组相比,Cyclin D1-siRNA组P53和P21表达上调(P<0.05),Cyclin D1、Mdm2和Mdm4表达下调(P<0.01);3组细胞周期G1、S及G2期均无明显差异(P>0.05);Cyclin D1-siRNA组较其他两组细胞活力明显减弱(P<0.01),细胞凋亡明显增强(P<0.01)。结论 Cyclin D1表达下调能抑制Mdm2和Mdm4的表达,并能上调P53和P21的表达;Cyclin D1表达下调能抑制肝癌细胞的增殖并促进其凋亡。
- 张弘英胡树根胡利琳丁浩
- 关键词：细胞周期蛋白D1RNA干扰HEP3B细胞细胞增殖MDM2
- 着色性干皮病基因D和p53对HBV复制的影响
- 2014年
- 目的:探讨人着色性干皮病基因D(XPD)和p53对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法:使用脂质体转染法把重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2转染进入人肝癌细胞株HepG2.2.15细胞,转染后的第2天用20μmol/L pifithrin-α(p53抑制剂)孵育细胞24 h。实验共分为空白对照组、pEGFP-N2组、pEGFPN2/XPD组、pEGFP-N2/XPD+pifithrin-α组和pifithrin-α组。使用RT-PCR法检测XPD、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)及乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)mRNA表达的变化;使用ELISA法检测培养上清液中HBsAg和HBeAg含量的变化;用荧光定量PCR法检测培养上清液中HBV-DNA含量的变化;用bDNA法检测细胞内核心颗粒中HBV-DNA含量的变化。结果:RT-PCR结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染可使得XPD mRNA表达增高,XPD表达增高能使得HBsAg、HBeAg和HBx mRNA表达明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用(均P<0.01)。ELISA结果显示,XPD表达增高能使得培养上清液中HBsAg和HBeAg含量明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用(均P<0.01)。荧光定量PCR结果显示,XPD表达增高能使得培养上清液中HBV-DNA含量明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用(均P<0.01)。bDNA结果显示,XPD表达增高使得细胞内核心颗粒中HBV-DNA含量明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用(均P<0.01)。结论:XPD能通过p53通路抑制HBV复制,所以XPD和p53可能成为乙型肝炎抗病毒治疗的作用靶点。
- 丁浩张吉翔
- 关键词：着色性干皮病基因DP53HEPG2.2.15细胞
- Cyclin D1 siRNA转染人肝癌细胞的增殖、凋亡变化及其机制被引量：3
- 2017年
- 目的观察Cyclin D1 siRNA转染的人肝癌细胞增殖、凋亡变化,并探讨其机制。方法培养人肝癌细胞株Hep3B,将细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。阴性对照组和实验组分别通过脂质体转染NC siRNA和Cyclin D1 siRNA,转染48 h后收获细胞。采用MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞仪观察凋亡细胞并计算细胞凋亡率;免疫组化法检测各组细胞中的Caspase-3蛋白;采用RT-PCR法检测各组细胞中的乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)、着色性干皮病基因蛋白D(XPD)、Bcl-2、Bax mRNA;Western blotting法检测各组细胞中的HBx、XPD、Bcl-2、Bax蛋白。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力减弱、凋亡率升高、Caspase-3相对表达量增高(P均<0.01)。与空白对照组和阴性对照组相比,实验组HBx、Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调,XPD、Bax mRNA及蛋白表达上调(P均<0.01)。结论 Cyclin D1 siRNA转染的人肝癌细胞增殖受到抑制、凋亡增多,其机制可能与HBx、Bcl-2表达下调及XPD、Bax表达上调有关。
- 张弘英胡利琳元文峰丁浩
- 关键词：细胞周期蛋白D1肝细胞癌细胞增殖
- 人剪切修复基因D介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用被引量：1
- 2018年
- 目的 探讨人剪切修复基因D（XPD）是否介导氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）促进人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡。 方法 以ox-LDL建立HUVEC凋亡模型。用脂质体将XPD-siRNA转染HUVEC,给予ox-LDL处理。实验分6组：空白对照组；阴性对照siRNA组；XPD-siRNA组；ox-LDL组；ox-LDL ＋阴性对照siRNA组；ox-LDL＋XPD-siRNA组。MTT测定细胞活力；流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期；用RT-PCR和Western blot检测XPD、Bax和Bcl-2的表达。 结果 建立HUVEC凋亡模型ox-LDL的最佳浓度为100 mg/L。与阴性对照siRNA组相比,XPD-siRNA组的细胞凋亡率明显下降（P〈0.05）,存活率明显增加（P〈0.01）,G0/G1期细胞减少（P〈0.05）、S期细胞增加（P〈0.05）,XPD、Bax表达降低（P均〈0.05）,Bcl-2表达增高（P〈0.05）；与空白对照组相比,ox-LDL组细胞凋亡率明显增加（P〈0.01）,细胞存活率下降（P〈0.05）,G0/G1期细胞增加（P〈0.05）、S期细胞明显减少（P〈0.01）,XPD、Bax表达升高（P均〈0.05）,Bcl-2表达降低（P〈0.05）；与ox-LDL＋阴性对照siRNA组相比,ox-LDL＋XPD-siRNA组细胞凋亡率下降（P〈0.05）,细胞存活率明显增加（P〈0.01）,G0/G1期细胞减少（P〈0.05）、S期细胞增加（P〈0.05）,XPD、Bax表达降低（P均〈0.05）,Bcl-2表达增高（P〈0.05）。 结论 XPD能介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用。
- 俞菊梅胡利琳丁颖元文峰李菊香孙国芳
- 关键词：RNA干扰人脐静脉内皮细胞氧化型低密度脂蛋白
- 重组质粒pcDNA3.1/C-sis对大鼠FHF的影响
- 2017年
- 目的探讨重组质粒pcDNA3.1/C-sis导入大鼠对暴发性肝功能衰竭(FHF)的影响。方法利用流体力学的方法将重组质粒pcDNA3.1/C-sis导入大鼠肝脏,48h后用内毒素(LPS)+D-半乳糖胺(D-GalN)诱导大鼠FHF;利用荧光定量PCR及蛋白质印迹法(Western blotting)检测C-sis表达;利用苏木精-伊红(HE)染色及测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性检测凋亡;利用Western Blotting检测Bcl-2和Bax的表达变化;计算大鼠24h观察期内的死亡率。结果 FHF+C-sis质粒组的C-sis mRNA和蛋白表达水平较正常对照组和FHF+空载质粒组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组和FHF+空载质粒组肝脏细胞凋亡增多;与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组肝脏细胞凋亡减少。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组大鼠肝脏组织中Caspase-3的表达增多(P<0.01);与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组大鼠肝脏组织中Caspase-3的表达减少(P<0.05)。与正常对照组相比,FHF+林格液注射组大鼠肝脏组织中Bcl-2表达明显减少(P<0.01),Bax表达明显增多(P<0.01);而与FHF+空载质粒组相比,FHF+C-sis质粒组大鼠肝脏组织中Bcl-2表达增多(P<0.05),Bax表达减少(P<0.05)。在24h观察期内,正常对照组大鼠均存活,FHF+林格液注射组及FHF+空载质粒组大鼠死亡率分别为70.0%和80.0%;而FHF+C-sis质粒组大鼠仅20.0%死亡。结论 C-sis基因可减弱LPS+D-GalN诱导的大鼠FHF。
- 蔡鹏程元文峰丁浩
- 关键词：重组质粒肝功能衰竭急性
