国家自然科学基金(30371059)
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
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- 相关机构：吉林大学吉林工商学院解放军军需大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 常见食物中毒菌毒素的研究进展被引量：7
- 2006年
- 食物中毒是食品卫生中经常遇到的问题,而细菌(毒素)性食物中毒又是最常见的形式之一,其中O157∶H7大肠杆菌的Vero毒素、金黄色葡萄球菌肠毒素和肉毒梭菌神经毒素是经常引起食物中毒的细菌毒素.对这3种食物中毒菌毒素的产生、中毒情况、毒素类型、基因特性、致病机理、检测方法、应用研究及发展趋势进行了综述.
- 孟宪梅柳增善
- 关键词：食物中毒细菌毒素金黄色葡萄球菌肠毒素肉毒毒素
- A型肉毒毒素重链C片段基因的克隆及序列分析
- 2005年
- 成功克隆了A型肉毒毒素重链C片段部分基因.以肉毒梭菌(62A)基因组DNA为模板,以此基因特异性引物为介导,采用TouchdownPCR方法,从肉毒梭菌基因组中扩增出目的基因片段后,将其克隆入T载体,进行酶切鉴定和序列分析.结果表明,此基因片段与Genbank中的BoNTa基因(收录号:M30196)核苷酸序列的同源性为100%,说明目的基因得到了成功地克隆,为后续研究奠定了基础.
- 于师宇孟宪梅潘风光任洪林柳增善
- 关键词：A型肉毒毒素重链肉毒梭菌同源性
- 副溶血弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表达被引量：4
- 2009年
- 李研东卢士英任洪林周玉柳增善
- 关键词：副溶血弧菌原核表达外膜蛋白食源性疾病革兰阴性
- 金黄色葡萄球菌融合肠毒素的构建及高效表达被引量：2
- 2008年
- 以食物中毒性金黄色葡萄球菌毒素为研究对象,利用PCR方法分别扩增出金黄色葡萄球菌肠毒素SEB1、SEB2、SED1、SED2、SEE基因片段。将克隆得到的5个毒素基因片段采用柔性的Linker序列(Gly4Ser)3进行串联(SEB1-SEB2-SED1-SED2-SEE),通过重叠延伸PCR法扩增出了融合毒素T,目的基因全长1 835 bp,测序结果同源性达99%。将融合基因克隆到pET-28a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌后成功表达了融合蛋白,蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的29.6%。
- 张俊辉周玉任洪林付佳柳增善
- 关键词：金黄色葡萄球菌
- 食物中毒菌多联融合毒素F5基因的构建及结构分析被引量：1
- 2007年
- 目的:构建食物中毒菌多联融合毒素基因并分析其是否保持了原来毒素基因的抗原特性。方法:采用一定的linker序列(G-P-G-P-G)将克隆的3种食物中毒菌5个毒素基因片段进行串联,构建重组融合毒素Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB(命名为F5)基因,应用DNAstar,对F5融合蛋白抗原特性等进行预测分析。结果:构建的融合毒素F5保留了5种毒素的抗原特性,基因全长序列2 937 bp,编码成熟蛋白979个氨基酸,测序结果与设计序列(GeneBank)100%同源。结论:成功构建了食物中毒菌多联融合毒素F5基因,为下一步研究融合毒素F5的表达及利用融合毒素检测食物中毒菌毒素建立广谱免疫学检测新方法奠定了基础。
- 孟宪梅于师宇任洪林卢士英潘风光柳增善
- 食物中毒菌多联融合毒素Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB的表达及免疫学特性研究被引量：1
- 2007年
- 目的构建食物中毒菌多联融合毒素基因及重组表达载体,制备抗5种毒素的血清抗体。方法采用一定的linker序列(G-P-G-P-G)将克隆的3种食物中毒菌的5个毒素基因片段进行串联,并定向克隆到表达载体pET-22b(+)的NcoI和XhoI位点之间,构建五联融合毒素基因及重组表达载体,表达产物经切胶回收初步纯化后免疫獭兔,制备抗血清,利用ELISA和琼脂扩散试验检测抗体和5种毒素反应的特异性和敏感性。结果构建了重组融合毒素(命名为F5)Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB基因和重组表达载体F5-22b,且在表达宿主菌E.coliBL21中得到有效表达(9.90%),基因序列全长2937bp,编码成熟蛋白979个氨基酸,融合蛋白分子量112.369ku,测序结果与设计序列(GenBank)100%同源。表达产物经初步纯化后免疫獭兔获得抗五种毒素的血清抗体,且具有较高的特异性和敏感性。结论成功构建了融合毒素基因,获得了抗五种毒素的血清抗体,本实验结果为下一步建立食品广谱、快速免疫学检测新方法奠定了基础。
- 孟宪梅于师宇李兆辉任洪林卢士英任立松柳增善
- 关键词：免疫学特性
- 拟态弧菌OmpK基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2009年
- 克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus)OmpK(outer membrane protein K)基因并进行相关序列的分析。根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801bp片段并测序,序列已提交至GenBank(GenBank登录号为FJ462707)。拟态弧菌OmpK序列比对结果显示,溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、河弧菌OmpK基因序列的同源性均大于78%。该基因编码1个含267个氨基酸残基的蛋白质,预测分子质量为29.6 ku。利用基因工程方法将该基因片段定向克隆至表达载体中,并在大肠杆菌中获得高效表达,表达后的OmpK蛋白分子质量约为28 ku。
- 李研东李菲卢士英任洪林周玉朱元银宫彬彬柳增善
- 关键词：拟态弧菌克隆
- 金黄色葡萄球菌融合肠毒素的纯化和免疫特性分析
- 2009年
- 本研究将金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)肠毒素(B,D,E)融合表达蛋白的包涵体经过初步纯化,免疫吉戎獭兔制备血清抗体,经ELISA和琼脂扩散试验检测表明,表达的SA融合肠毒素以不同的抗体效价证明保留了天然毒素各自的抗原性,与多种非目标菌和毒素不反应,具有较好的特异性。由此说明表达产物可诱导机体产生广谱反应特性的抗体。本试验为融合肠毒素的进一步应用,以及建立食物中毒菌广谱、快速的检测方法奠定了基础。
- 张俊辉周玉潘风光任洪林孟宪梅柳增善
- 关键词：金黄色葡萄球菌免疫特性
- 扩展青霉碱性脂肪酶的克隆、表达及表达产物的活性分析被引量：4
- 2008年
- 以扩展青霉为出发菌株,用Biospin RNA Simply P试剂盒提取其总RNA,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出扩展青霉碱性脂肪酶结构基因.构建真核重组表达质粒pEL-pIC9,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,利用MD-MM平板及PCR方法筛选和鉴定出重组子,进行甲醇诱导表达.重组子发酵液经SDS-PAGE分析显示获得了分子量约28 ku的1条特异条带,用橄榄油检验板法和NaOH滴定法测其活性,酶活可达225 U/mL.结果表明,扩展青霉碱性脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中能高效表达为有脂肪酶活性的高活力酶.
- 陈丹卢士英柳增善
- 关键词：扩展青霉碱性脂肪酶毕赤酵母
