安徽省自然科学基金(01043707)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- 人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定
- 2004年
- 目的 克隆人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2 (hPPARγ2 )基因及构建其真核表达重组体 ,为进一步研究该基因打下基础。方法 采用RT PCR方法从中国人网膜脂肪垫总RNA中扩增出hPPARγ2cDNA全长基因 ,将全长hPPARγ2cDRA定向插入真核表达载体pcDNA3 1(+)中 ,筛选出阳性克隆。通过限制性内切酶酶切和核苷酸序列测定进行鉴定。结果 克隆出全长hPPARγ2cDNA序列与GeneBanK序列相同 ,真核表达质粒经限制性内切酶酶切后获得的片段大小与理论值一致。结论 成功地克隆了hPPARγ2cDNA ,并构建了真核表达重组体。
- 代芳王佑民王长江佘其美周剑时照明胡红琳
- 关键词：真核细胞
- 人PPARγ_2真核表达载体构建及稳定表达细胞株的建立
- 2007年
- 目的构建人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(human peroxisome proliferator activa-ted receptorγ2,hPPARγ2)真核表达载体并建立稳定表达hPPARγ2的细胞株。方法用RT-PCR扩增hPPARγ2的全长cDNA并构建出pcDNA3.1(+)/PPARγ2真核表达载体,经核苷酸序列分析证实。真核表达载体pcDNA3.1(+)/hPPARγ2转染到HESF细胞,G418筛选,获得稳定表达hPPARγ2的细胞株,检测其在HESF细胞中的表达。结果核苷酸序列测定证实获得hPPARγ2真核表达载体,RT-PCR、间接免疫荧光染色和Western-blot结果显示转染hPPARγ2的细胞株稳定表达hPPARγ2。结论构建了hPPARγ2真核表达载体,并获得稳定表达hPPARγ2的细胞株,为进一步研究hPPARγ2的功能奠定基础。
- 代芳王长江左祥生王佑民胡红琳汪学龙沈际佳曹永红
- 关键词：转染成纤维细胞
- 肿瘤坏死因子α和吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运子4表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:观察肿瘤坏死因子α和噻唑烷二酮类药物吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞中葡萄糖转运子4(glucose transporter4,GLUT4)mRNA和蛋白表达的影响,并了解其是否有时间依赖性。方法:实验于2005-09/2006-05在安徽医科大学病原微生物分子生物学教研室进行。对3T3-L1细胞进行培养并诱导分化为成熟的3T3-L1脂肪细胞后随机分为对照组、肿瘤坏死因子α组和吡格列酮组3组。肿瘤坏死因子α组和吡格列酮组分别加含20μg/L肿瘤坏死因子α或10-4mol/L吡格列酮培养基培养,提取干预后1,3,6d细胞总RNA和总蛋白做RT-PCR和Western-blot,测定GLUT4mRNA和蛋白的表达,以未加任何药物干预组做对照。结果:①GLUT4mRNA表达:对照组细胞为0.506±0.049;肿瘤坏死因子α组干预后1,3,6d表达低于对照组(0.465±0.039,0.410±0.010,0.320±0.019,F=17.8,P=0.001),并随干预时间呈递减关系;吡格列酮组干预后1,3,6d表达高于对照组(0.544±0.064,0.616±0.065,0.664±0.070,F=4.87,P=0.043),且与干预时间呈正比。②GLUT4蛋白的相对含量:对照组细胞为0.624±0.093;肿瘤坏死因子α组干预后1,3,6d低于对照组(0.549±0.112,0.460±0.111,0.286±0.117,F=7.39,P=0.011),且随干预时间递减;而吡格列酮组GLUT4干预后1,3,6d高于对照组(0.693±0.098,0.750±0.106,0.866±0.074,F=4.0,P=0.048),随干预时间呈递增关系。结论:①肿瘤坏死因子α可降低3T3-L1脂肪细胞中GLUT4mRNA和蛋白表达量,吡格列酮的作用与肿瘤坏死因子α相反,两者作用均呈时间依赖性。②在3T3-L1脂肪细胞中,吡格列酮可能通过增加GLUT4的表达来提高胰岛素敏感性,并可能部分拮抗肿瘤坏死因子α诱导的胰岛素抵抗。
- 曹永红王长江代芳林刚叶小龙左祥生
- 关键词：3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子Α吡格列酮GLUT4胰岛素抵抗
- 吡格列酮对3T3-L1细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响
- 2007年
- 目的研究噻唑烷二酮类药物吡格列酮对3T3-L1细胞中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA和蛋白表达的影响。方法将3T3-L1细胞随机分为3组对照组3T3-L1细胞进行正常的诱导分化,实验1组在3T3-L1细胞诱导时加入吡格列酮(0.1mmol/L),实验2组在诱导分化后成熟的3T3-L1脂肪细胞中加入吡格列酮(0.1mmol/L)。提取细胞总RNA和总蛋白做RT-PCR和Western-blot测定GLUT4mRNA和蛋白的表达情况。结果与对照组比较实验组GLUT4mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论吡格列酮促进3T3-L1脂肪细胞GLUT4mRNA和蛋白表达。
- 曹永红王长江贾敬华代芳陈明卫林刚叶小龙
- 关键词：噻唑烷二酮类3T3-L1脂肪细胞吡格列酮
