国家自然科学基金(31260444)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：刘小宁朱燕马纪李芬赵文博更多>>
- 相关机构：新疆大学中国农业大学新疆农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家公益性行业科研专项新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 新疆一支蒿提取物诱导棉铃虫解毒酶P450 CYP6B6的表达规律被引量：1
- 2013年
- 旨在利用实时荧光定量PCR和Western blot分别研究新疆一枝蒿提取物黄酮及萜类对棉铃虫P450 CYP6B6在mRNA水平和蛋白水平上表达的影响。实时荧光定量PCR结果表明,P450 CYP6B6在mRNA水平的表达量受到诱导。时间效应为P450 CYP6B6在处理的12 h时能够被黄酮和萜类提取物显著诱导表达,并且在24 h时表达受到抑制;浓度效应为处理24 h时,黄酮和萜类提取物浓度分别为20 mg/100 g和1 mg/100 g时显著诱导P450 CYP6B6的表达,并且在40 mg/100 g和2 mg/100 g时抑制P450 CYP6B6的表达;Western blot检测结果表明,萜类和黄酮在时间和浓度效应上都能显著诱导P450 CYP6B6蛋白表达,并且蛋白水平在时间与浓度效应中的表达趋势与mRNA水平相似。
- 何海刘宁朱燕刘小宁
- 关键词：棉铃虫P450
- 棉铃虫(Helicoverpa armigera)FK506结合蛋白基因的克隆、表达与纯化被引量：2
- 2014年
- 为了深入了解FK506结合蛋白基因的作用和探索调控棉铃虫CYP6B6的表达机制,基于单酵母杂杂交结果采用RT-PCR的方法从棉铃虫的中肠cDNA中扩增得到了FK506结合蛋白基因,将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET32a中,在大肠杆菌BL21中用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导表达,通过镍柱离子亲和层析纯化目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果,并用Western blotting进行验证。结果表明,克隆得到的目的基因大小为327 bp,编码108个氨基酸残基,预测蛋白质分子量和等电点分别是11.78 kD和7.87。氨基酸序列分析表明该序列具有完整的开放阅读框,且没有信号肽。重组质粒pET32a-FKBP在大肠杆菌BL21中获得表达,主要以可溶性形式存在,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,Western blotting检测发现纯化的目的蛋白大小正确且纯度高。
- 刘小宁李芬赵文博朱燕赵洁
- 关键词：棉铃虫
- 基于文献计量学的昆虫细胞色素P450研究发展态势分析被引量：4
- 2014年
- 利用文献计量法和关键词词频法,对1999年至2012年间,国内外在昆虫细胞色素P450研究领域的研究成果进行梳理和研究,结果显示:昆虫细胞色素P450文献数量在此期间呈现出明显的增长趋势,说明昆虫细胞色素P450日益得到学者的广泛关注。关键词词频法说明对模式昆虫果蝇P450的研究依然是热点,而卫生害虫、农业害虫以及经济昆虫P450的研究已逐渐成为新的研究热点;而研究方向上正向昆虫P450调控表达的理论研究及其实践应用拓展。
- 刘小宁刘宁李芬马爱芳马纪高希武
- 关键词：昆虫细胞色素P450
- 活体电穿孔法辅助核酸免疫制备小鼠抗棉铃虫精氨酸激酶的抗体被引量：3
- 2014年
- 目的利用活体电穿孔法将携带有棉铃虫精氨酸激酶(HarmAK)基因的表达质粒导入昆明小白鼠制备抗体。方法在构建重组质粒pcDNA3-HarmAK并测序验证序列的正确性后,利用活体电穿孔辅助核酸免疫的方法将重组质粒pcDNA3-HarmAK导入到小鼠体内,免疫5次后,用ELISA检测确定抗体的效价,并对抗体的特异性进行Western blot法检测。结果小鼠抗HarmAK血清的效价达到1∶40 000,Western blot法检测的结果显示此抗血清能与融合蛋白His-HarmAK和棉铃虫总蛋白中的AK蛋白特异性结合。结论采用活体电穿孔辅助核酸免疫的方法制备了高滴度和特异性的小鼠抗HarmAK的抗体。
- 赵洁赵文博朱燕张富春马纪黄丽娜刘小宁
- 关键词：棉铃虫精氨酸激酶抗体
- 核酸免疫制备鼠抗棉铃虫FK506结合蛋白的多克隆抗体被引量：1
- 2014年
- 利用电注射基因导入法制备小鼠抗棉铃虫FK506结合蛋白(FKBP12)的多克隆抗体,并通过Western blot验证抗体与抗原的特异性结合。构建重组质粒pc DNA3-FKBP12并测序验证序列的正确性,利用基因导入法将重组质粒pc DNA3-FKBP12注射到小鼠体内,免疫4次后用ELISA检测法确定抗体的效价,并对抗体的特异性结合进行Western blot以及免疫组化检测。结果表明,小鼠抗FK506结合蛋白血清的效价达到1∶25 600,Western blot结果显示此抗血清能与融合蛋白His-FKBP12结合,免疫组化结果表明在棉铃虫3龄幼虫不同组织中FKBP12均有表达。说明电注射基因导入法制备的小鼠抗FK506结合蛋白的抗体在滴度和特异性结合方面都达到预期要求。
- 朱燕张富春马纪黄丽娜刘小宁
- 关键词：棉铃虫多克隆抗体
