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血管紧张素Ⅱ对骨髓基质干细胞源性成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响被引量：1: 2012年; 目的探讨血管紧张素Ⅱ对人骨髓基质干细胞（BMSCs）源性成骨细胞血管内皮生长因子（VEGF）基因表达及蛋白分泌的影响。方法分离、培养人BMSCs，并向成骨细胞方向诱导，用碱性磷酸酶（ALP）染色鉴定成骨细胞。取诱导14d的人BMSCs，分成5组（n=3），分别用0、50、100、150、200nmol／L血管紧张素Ⅱ处理细胞，以确定最佳作用浓度。取诱导21d的人BMSCs，分成5组（n=6），分别用最佳作用浓度血管紧张素Ⅱ处理细胞0、6、12、24、48h，采用实时定量逆转录．聚合酶链反应（RT．PCR）检测不同时间组VEGFmRNA的表达，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测不同时间组VEGF蛋白的表达。结果人BMSCs经诱导后ALP染色大部分呈阳性反应。0、50、100、150、200nmol／L血管紧张素Ⅱ处理的BMSCsVEGFmRNA表达平均分别为1．000．4-0．000、2．304±0．315、4．336±0．400、5．573±0．608、5．492±0．460，其中0、50nmol／L浓度组分别与100、150、200nmol／L浓度组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。选取150nmol／L为血管紧张素Ⅱ的最佳作用浓度。0、6、12、24、48h组细胞VEGFmRNA表达平均分别为1．000±0．000、1．984±0．160、4．372±0．378、5．573±0．586、4．994±0．445，其中0、6h组分别与12、24、48h组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。0、6、12、24、48h组细胞VEGF蛋白分泌量逐渐增加，且呈时间依赖性。结论用血管紧张素Ⅱ处理人BMSCs源性成骨细胞能够使VEGFmRNA表达量和蛋白分泌量快速增加。; 苏万汉陈滨方锦涛赵培冉; 关键词：间质干细胞血管内皮生长因子A

弓形虫GRA7基因的克隆表达及免疫分析: 2013年; 本文构建了刚地弓形虫RH株致密颗粒蛋白7（GRA7）基因原核表达重组质粒，进行蛋白表达并分析重组蛋白的免疫反应性。设计合成引物，从弓形虫RH株基因组DNA中特异扩增出GRA7基因片段并进行序列分析。目的片段用EcoRI和BamHI双酶切后分别构建重组质粒pET32a-GRA7和pET28a-GRA7，而后转人大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达，Westernblotting分析表达蛋白。结果显示，从弓形虫RH株中成功扩增出大小约710bp的GRA7基因片段，构建的重组质粒经双酶切和PCR鉴定及测序，目的基因片段与预期相符。重组质粒pET32a-GRA7经IPTG诱导后，可高效表达重组蛋白，Westernblotting分析显示重组GRA7蛋白能被弓形虫慢性感染血清识别，而重组质粒pET28a-GRA7未能诱导表达出目的蛋白。原核表达的重组GRA7抗原具有特异的免疫反应性，为弓形虫的诊断应用和疫苗研究奠定了基础。; 黄诗莹邱洁蕾谭栩颖杨灿洪郭斌陈滨吴焜陈晓光; 关键词：刚地弓形虫基因克隆原核表达免疫反应性

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国家教育部博士点基金(20094433120016)

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