天津市科技计划(08ZCGYSF01800)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：曾昭伟李会强王学谦杨静李向东更多>>
- 相关机构：天津医科大学天津医院天津渤海职业技术学院更多>>
- 发文基金：天津市科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 妊娠相关血浆蛋白A酶联免疫诊断方法学研究被引量：2
- 2013年
- 目的建立供临床检测妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)的酶联免疫诊断方法。方法用足月孕妇血清通过分子筛以及离子交换层析纯化后制备抗体,进而制备生物素标记的PAPP-A以及酶标记抗体。按照常规的酶联免疫吸附试验(ELISA)操作步骤检测标本,观察本方法的敏感性、特异性、回收率、稳定性等指标。测定30份早孕患者血清与美国DRG公司试剂盒做对比。结果分子筛与离子交换层析纯化效果良好。标准曲线范围为1～50μg/mL。敏感性为0.35μg/mL,回收率均>100%,特异性、稳定性试验结果显示效果良好。本试验方法与美国DRG公司试剂盒检测结果高度相关,回归方程为:Y=2.286 1+1.026 9X(r=0.982,P<0.01)。结论PAPP-A抗体标记生物素后,利用生物素与亲和素的高度亲和力进行ELISA,该方法在PAPP-A的临床检测中有较大的实际意义。
- 靳宝英曾昭伟李会强
- 关键词：妊娠相关血浆蛋白A酶联免疫吸附试验生物素
- 妊娠相关血浆蛋白A重组抗原表位分析及抗体制备被引量：1
- 2013年
- 目的探讨妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)的抗原表位及抗PAPP-A抗体制备方法。方法把PAPP-A的CDS序列翻译成氨基酸序列,利用互联网分析蛋白的疏水性和信号肽区段,利用DNAstar软件分析二级结构、表面可及性、亲水性、抗原指数以及柔韧性,综合分析抗原表位。通过分子生物学技术制备重组PAPP-A,进而免疫新西兰家兔制备抗PAPP-A抗体。结果 PAPP-A抗原性较强,抗原优势表位位于23～94、1 110～1 131氨基酸区段;PAPP-A重组蛋白以及抗PAPP-A抗体制备成功。结论本研究方法建立了PAPP-A的高灵敏免疫检测体系,能进一步提高PAPP-A的临床应用价值。
- 曾昭伟王学谦常艳敏蔡迪娅
- 关键词：妊娠相关血浆蛋白A抗原表位抗体
- 妊娠相关蛋白A在急性冠状动脉综合征诊断中的应用分析
- 2011年
- 目的:探讨妊娠相关蛋白A(PAPP-A)在冠状动脉综合征(ACS)诊断中的临床价值。方法:收集2010年5月—2010年7月收治的ACS患者(ACS组)117例和稳定型心绞痛患者(SAP组)68例,正常组84例为健康体检者。采用酶联免疫检测(ELISA)分析其PAPP-A水平。跟踪ACS、SAP患者治疗3周后血清PAPP-A水平变化。结果:PAPP-A在ACS患者血清中水平最高,与SAP患者和正常组比较差异有统计学意义(均P<0.001),而SAP患者和正常组差异无统计学意义(P=0.641)。与治疗前比较,治疗3周后ACS患者PAPP-A变化差异有统计学意义(t=23.105,P<0.01),而SAP患者差异无统计学意义(t=1.031,P>0.05)。结论:PAPP-A和斑块不稳定性有关,其水平检测有助于预测急性冠脉事件发生、危险程度以及康复情况。
- 曾昭伟李会强吴金丹谈志龙张连祥王学谦
- 关键词：妊娠相关血浆蛋白A急性冠状动脉综合征酶联免疫吸附测定
- 妊娠相关蛋白A的纯化及鉴定研究被引量：2
- 2011年
- 目的:对比G200凝胶过滤、反向亲和层析、DEAE离子交换等不同的方法纯化孕妇血清中的妊娠相关蛋白A(PAPP-A),为下一步的临床应用研究奠定基础。方法:把正常男性血清过G200凝胶过滤纯化后免疫家兔得到兔抗人抗体,连接溴化氰活化G25凝胶制备反向免疫层析柱。收集足月孕妇血清,离心后依次应用G200凝胶过滤、反向亲和层析及离子交换层析柱纯化。用ELISA检测试剂盒检测各个洗脱峰的PAPP-A活性,SDS-PAGE检测纯化蛋白的纯度。结果:稀释兔抗人血清抗体至浓度为1∶16,双向扩散有明显沉淀线,可以用于制备抗体,蛋白A亲和层析洗脱pH3.0洗脱峰,G200凝胶过滤第一个洗脱峰,反向亲和层析的0.1 mol/LPBS洗脱峰,离子交换层析的0.45 mol/L NaCl洗脱峰中PAPP-A活性均较高。SDS-PAGE结果显示,孕妇血清用G200凝胶过滤处理后杂蛋白条带较多,反向亲和层析或者DEAE分别处理后同样存在杂蛋白条带,三种纯化方法结合应用杂蛋白条带明显减少,Western blot鉴定显示三种方法结合应用后纯化蛋白样品条带单一。结论:本研究用三种层析方式相结合的方法得到纯度较高的PAPP-A抗原,鉴定显示可以到达制备单克隆抗体(mAb)的要求,为mAb的制备以及酶联免疫试剂盒的建立奠定了基础,使PAPP-A在临床应用方面前景广阔。
- 曾昭伟杨静王学谦李会强李向东
- 关键词：妊娠相关蛋白A分子筛离子交换
