安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2009A168)
- 作品数：10 被引量：29H指数：4
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- 基因组改组选育磷脂酶A1生产菌
- 2013年
- 以蜡样芽胞杆菌W22为出发菌株,通过紫外诱变和等离子体诱变得到若干株酶活力提高的突变株。以紫外诱变突变菌株W22-a、W22-g和等离子诱变菌株W22-5为基因组改组的亲本,考察了原生质体的制备、灭活条件。原生质体的最佳制备条件是:溶菌酶浓度0.5mg/ml,酶解时间90min,反应温度25℃,预处理甘氨酸浓度为20mg/ml。选择紫外灭活160秒、热灭活16分钟的剂量来完成亲本原生质体的灭活。从众多融合子中筛得一株突变株WR2-2,发酵酶活为17.78U/ml,相对于出发菌株W22(9.22U/ml)提高酶活达92.8%。
- 王洲薛正莲马琦亚苏燕南赵世光
- 关键词：磷脂酶A1紫外诱变基因组改组
- 磷脂酶A_1及其在植物油脱胶中的研究进展被引量：10
- 2009年
- PLA1(Phosphatidylcholine 1-acyl-hydrolase,EC3.1.1.32)是专一水解天然磷脂Sn-1位酰基的酶,可以得到Sn-2酰基溶血磷脂。主要介绍了磷脂酶A1脱胶原理、酶源分布,并对酶运用于脱胶方面的研究进展作一综述。
- 薛正莲司武阳张珂
- 关键词：磷脂酶A1脱胶植物油
- 三种磷脂酶A1活力测定方法的比较被引量：5
- 2012年
- 三种常用的磷脂酶A1活力测定的方法分别为碱滴定法、双层平板法和分光光度法。通过对磷脂酶A1标准品和实验室产磷脂酶A1菌株的活力进行测定,比较这三种方法在时间、准确性和精确性方面的差异。结果得出分光光度法具有耗时短、底物用量少、结果稳定、精确性好的优点。
- 赵梦梦薛正莲黄祖耀苏燕南马琦亚
- 关键词：磷脂酶A1分光光度法棕榈酸
- 一种电击转化枯草芽孢杆菌方法的优化被引量：4
- 2014年
- 提出了一种电击转化枯草芽孢杆菌的方法。该方法通过调节细胞培养和电击转化过程中培养基和溶液成分来调节细胞渗透压,提高细胞在高电场强度电击后的存活率而达到提高转化效率的目的。优化前的转化率为5.0×105cfu/μg,经优化后转化效率可达8×106cfu/μg,比优化前提高了15倍。
- 张爽薛正莲陈环苏燕南王洲
- 关键词：枯草芽孢杆菌电击转化转化率
- 粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1基因大肠杆菌优化表达被引量：4
- 2013年
- 以粘质沙雷氏菌PL-06基因组为模板扩增得到磷脂酶A1基因plaA和含有辅助蛋白的磷脂酶A1基因plaB。plaA和plaB基因与pET-28a(+)连接后转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,得到基因工程菌AP28和BP28。AP28最佳的诱导表达条件为诱导初始OD600值0.5,IPTG浓度为0.2mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为4h,优化后磷脂酶A1蛋白表达水平从32%上升至46%,包涵体复性的磷脂酶A1酶活从10.8U/ml上升到12U/ml,相对于BP28工程菌,目的蛋白的表达对宿主细胞毒性小,而且得到的蛋白容易纯化。因此通过优化磷脂酶A1基因plaA的诱导条件,使磷脂酶A1以大量的包涵体形式表达,从而得到较高活性的磷脂酶A1并避免其对宿主细胞的毒性是可行的,而且可以得到大量纯化的磷脂酶A1蛋白,方便下一步的研究。
- 苏燕南薛正莲陈涛马琦亚
- 关键词：粘质沙雷氏菌磷脂酶A1包涵体复性
- 灰色链霉菌磷脂酶A1油脂脱胶性能研究
- 2013年
- 将灰色链霉菌(Streptomyces griseus)Dx208-FH12菌株所产磷脂酶A1进行菜籽油脱胶的性能研究。通过Plackett-Burman(PB)实验设计筛选出对脱胶影响较大的4个因素为反应时间、反应温度、pH和加酶量,再进行Box-Behnken中心组合实验及响应面分析。对于初始含磷量为254.30 mg/kg的菜籽油,得到一个能较好预测菌株Dx208-FH12所产磷脂酶A1脱胶效果的模型回归方程,并确定最优反应条件为:反应时间3.0 h,反应温度52℃,pH 5.0,加酶量1.8 mL(50 g菜籽油)。在最优条件下,脱胶油含磷量最低可降至18.57 mg/kg。
- 薛正莲赵梦梦赵世光王洲黄祖耀
- 关键词：灰色链霉菌磷脂酶A1响应面
- 产磷脂酶A1菌株的筛选及其发酵条件的优化被引量：3
- 2012年
- 目的筛选产磷脂酶A1(Phospholipase A1,PLA1,EC 3.1.1.32)的菌株,并优化其发酵条件。方法从富油土壤中筛选产PLA1的菌株,并对PLA1活力高的菌株进行分子生物学鉴定及发酵条件的优化。结果筛选出的5个菌株中Dx208菌株PLA1活力最高,摇瓶发酵酶活力达4.52 U/ml。根据该菌株的形态特征分析和16S rDNA基因序列,初步鉴定其为链霉菌属(Streptomyces)的灰色链霉菌(Streptomyces griseus)。该菌株的最佳发酵条件为:初始pH 7.0,培养温度30℃,发酵时间5 d,摇床转速200 r/min,发酵液中PLA1活力可达7.15 U/ml,为优化前的1.58倍。结论已筛选出1株高产PLA1的菌株,并优化了其发酵条件,为PLA1的生产及应用奠定了基础。
- 赵梦梦薛正莲苏燕南赵世光陈涛
- 关键词：磷脂酶A1灰色链霉菌发酵
- 磷脂酶A1高产菌株的筛选及其等离子体诱变被引量：2
- 2013年
- 目的从富油土壤中筛选磷脂酶A1高产菌株,优化其发酵条件,并经等离子诱变提高其产酶能力。方法用筛选培养基和发酵培养基分别对富油土壤中磷脂酶A1产生菌进行初筛和复筛,经气相色谱鉴定产酶类型;对获得的高产菌株进行形态、生理生化特征和分子生物学鉴定;优化该菌株的发酵时间,温度,pH值及摇床转速;从该菌株出发进行等离子体诱变,绘制致死率曲线,进行平板初筛及摇瓶复筛,并检测获得菌株的遗传稳定性。结果经初筛和复筛,获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,经气相色谱鉴定其产酶为磷脂酶A1;该菌株在普通琼脂培养基上呈圆形,质地软,表面光滑、扁平,乳白色,晕圈明显,为芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌;最佳发酵条件为:发酵时间12 h,初始pH 8.0,温度32℃,摇床转速200 r/min,优化后酶活为9.12 U/ml,较优化前(6.74 U/ml)提高了35.3%;等离子体诱变后,经平板及摇瓶筛选,获得的菌株W22-5酶活最高,为12.80 U/ml,较诱变前(9.12 U/ml)提高了89.91%,且具有良好的遗传稳定性。结论成功获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,优化了该菌的发酵条件,且经等离子诱变进一步提高了菌株的产酶能力,为磷脂酶A1的生产和应用奠定了基础。
- 马琦亚薛正莲苏燕南王洲赵世光
- 关键词：磷脂酶A1等离子体诱变
- 磷脂酶A1产生菌灰色链霉菌Dx208的诱变筛选
- 2012年
- 以本实验室分离鉴定的产磷脂酶A1菌株Streptomyces griseus Dx208为出发菌株,对其进行紫外线和亚硝基胍的单一及复合诱变。最终得到一株遗传稳定性较好、活力较高的菌株Dx208-FH12,发酵磷脂酶A1活力达11.68 U/mL,是出发菌株Dx208酶活(7.15 U/mL)的1.63倍。
- 薛正莲赵梦梦钱森和王洲
- 关键词：磷脂酶A1灰色链霉菌诱变选育亚硝基胍
- 分光光度计法测定磷脂酶A1酶活条件优化被引量：3
- 2013年
- 优化了分光光度计法测定Lecitase Ultra的磷脂酶A1活力的相关参数。根据单因素实验结果选择底物浓度、酶稀释倍数、pH值3个因素进行正交实验,经分析得到酶活测定的最佳条件为:酶稀释倍数为1 250倍,缓冲体系pH值为6.5,离子强度为50 mM,底物浓度为6%,终止酶反应方式为加入0.4M TCA溶液。优化后酶活最高值为4 876.9 U/mL,较原工艺提高了18.42%。
- 苏燕南薛正莲马琦亚王洲赵世光
- 关键词：磷脂酶A1LECITASEULTRA分光光度计法正交实验
