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2，3，7，8-四氯二苯并二噁英对人芳香烃受体和转化生长因子α mRNA表达的影响被引量：2: 2008年; 目的研究2，3，7，8-四氯二苯并二噁英（TCDD）染毒对表皮细胞芳香烃受体（AhR）和转化生长因子（TGF-α）表达的影响。方法利用半定量逆转录PCR技术（RT-PCR）对24hTCDD染毒组进行AhR和TGF-α基因表达的测定，并分析两者之间的相互关系。结果以β-aetin为内参照，测定细胞中AhR和TGF-α mRNA表达的相对含量。结果显示随着TCDD浓度的增高，细胞中AhR mRNA的相对表达量呈现下降的趋势，r=-0．548，各染毒组与对照组相比差异有统计学意义（F=4．124，P=0．021），两两比较7×10^-10mol／L组（0．0620±0．0085）和7×10^-9mol／L组（0．0518±0．0194）与对照组（0．1138±0．0227）之间的差别有统计学意义（t=-3．48，P〈0．05；t=-4．17，P〈0．01），且其相对表达量分别为对照组的55％和45％。TGF-α mRNA的相对表达量随浓度的增加则呈现上升的趋势，相关系数r=0．695（P〈0．01），各组之间差异有统计学意义（F=15．789，P=0．000），在7×10^-10mol／L组（0．1474±0．0390）和7×10^-9mol／L组（0．2133±0．0364）相对表达量与对照组（0．0561±0．0100）的差别具有统计学意义（t=4．49，P〈0．01；t=7．74，P〈0．01），且其相对表达量是对照组的2．6倍和3．8倍。同时对AhR与TGF-α mRNA相对表达水平进行相关分析，两者呈负相关，r=-0．561（P〈0．05）。结论TCDD对细胞增殖过程中可影响基因表达，AhR表现为下调，TGF-α表现为上调，且两基因表达量之间存在负相关关系。; 汤乃军董丽刘静马世伟赵力军白志鹏张万起Pieter Jan Coenraads张春梅; 关键词：细胞系受体转化生长因子Α 聚合酶链反应

基于克隆表达的芳香烃受体系统的二噁[口英]生物检测方法研究: 2009年; 目的研究人工克隆表达的芳香烃受体核转位蛋白（ARNT）与天然芳香烃受体（AhR）特异性结合及其对制备的多克隆抗体识别的情况，通过两者结合与二噁[口英]（TCDD）的剂量反应关系，探索TCDD生物检测方法。方法（1）以小鼠肝组织总RNA为模板，通过RT—PCR扩增目的基因AhR—PAS[periodicity （Per）／Aryl hydrocarbon nuclear translocator（ARNT）／single—minded（Sim）]端、AhR羧基末端（AhR—C端）、ARNT—PAS端，构建含有目的基因的pGEX-5XI重组表达质粒，并采用大肠杆菌原核系统进行克隆表达。（2）用上述克隆表达的AhR片段蛋白（AhR—PAS、AhR—C）作为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体。（3）从C57BL／6J纯系小鼠肝组织中提取具有结合活性的天然AhR复合物，将天然AhR复合物与结合在谷胱甘肽硫转移酶（GST）上面的融合蛋白GST—ARNT—PAS，分别在0．25、0．50、1．00、2．00pmol TCDD存在的条件下进行结合，通过亲和吸附和免疫印迹观察所形成的蛋白复合物的量。结果（1）成功构建含有目的基因AhR—PAS、AhR—C和ARNT—PAS的重组质粒，并通过大肠杆菌原核系统表达出具有结合活性的目的蛋白；（2）免疫家兔制得的多克隆抗体AhR—PAS、AhR-C的检测下限分别为5、1ng；（3）测得该法制备的小鼠肝脏匀浆中总蛋白质的浓度为60．5mg／ml；在TCDD存在的条件下，克隆得到的融合蛋白GST—ARNT—PAS能够与天然AhR复合物特异性地结合，并测得检测下限为0．25pmol，约80pg TCDD。结论成功地建立了基于克隆表达的芳香烃受体系统的TCDD生物检测方法，且检测下限达到pg级别。; 王卓赵娜沈钧王影汤乃军吴蕴棠张万起宓怀风; 关键词：受体芳香烃

2，3，7，8-四氯二苯并二噁英对体外表皮细胞增殖的影响: 2008年; 目的研究2，3，7，8-四氯二苯并二噁英（TCDD）对人角质形成细胞（HACAT）增殖的影响。方法选用5个不同染毒浓度（7×10^-12～7×10^-8 mol／L），对生长至60％～70％汇合的HACAT细胞进行体外染毒，并在培养的不同时间点（6、12、24、48h）进行检测，分别通过形态学、克隆形成实验和噻唑蓝（MTT）比色法观察TCDD对细胞增殖的影响。结果TCDD对细胞形态的影响并不明显；对克隆形成率有明显的促进作用，但剂量-效应关系不明显；MTT检测结果显示，TCDD对HACAT细胞的生长增殖有促进作用，且与时间、浓度存在一定的依赖关系，染毒6、12、24h，细胞增殖率随浓度的增加而增加，相关系数分别为0．561，0．687，0．720，差异有统计学意义（P〈0．01）；但48h组，细胞的增殖率不再增加，相反对细胞的生长表现为抑制作用。结论TCDD对细胞形态无明显影响，但在一定染毒时间范围内（6～24h），对体外HACAT细胞的生长增殖有促进作用，且与时间、浓度存在正相关。; 董丽汤乃军赵力军刘静马世伟高挺之; 关键词：细胞增殖

硒对实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺Fas／FasL表达的影响被引量：7: 2008年; 目的研究适碘条件下不同硒摄入水平对实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）大鼠甲状腺细胞凋亡蛋白Fas／FasL表达的影响。方法将32只雌性Lewis大鼠按数字表法随机分成4组，分别设为对照组（C组），模型组（M组），补硒＋模型组（se^＋＋M组），低硒＋模型组（Se^- ＋M组），在适碘条件下（含10．90mg／kg）对各组先施加不同水平的硒（Se^＋＋M组2mg／kg，C与M组0．20mg／kg，Se^- ＋M组0．02mg／kg）干预2周后，再采用猪甲状腺球蛋白免疫大鼠建立EAT模型，取甲状腺组织制成石蜡切片，采用免疫组织化学检测、比较Fas／FasL表达情况的差异。结果EAT大鼠甲状腺Fas及FasL较对照均出现表达增加，其中Fas的表达有随补硒水平的升高而下降的趋势，Se^＋＋M组吸光度值（0．036±0．004）与M组（0．059±0．006）相比，Fas表达明显受到抑制（q=11．591，P=0．000），与Se^- ＋M组（0．050±0．005）相比，Se^＋＋M组Fas呈较低表达水平（q=7．055，P=0．000）；但补硒对FasL的表达无明显影响。结论补硒能减少Fas在甲状腺细胞中的表达，对自身免疫性甲状腺疫病的发展具有抑制作用。; 谭龙孙伟桑仲娜张万起; 关键词：甲状腺炎自身免疫性硒

二噁引起皮肤损害的分子机制研究进展: 2008年; 张春梅汤乃军; 关键词：二噁[口英]氯痤疮分子机制

丝裂原激活蛋白激酶信号通路在氯痤疮形成中的作用: 2008年; 目的研究丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号转导通路在氯痤疮形成中的作用，以探讨氯痤疮的发病机制。方法取患有氯痤疮的男性工人患处皮肤组织活检标本作为生物标本，采用免疫组织化学分析方法，检测氯痤疮患者皮损处和对照人群相应部位皮肤组织中磷酸化表皮生长因子受体（phosphorylated epidermal growth factor receptor，p-EGFR）和磷酸化MAPK（p-MAPK）蛋白表达水平。结果氯痤疮组全部患者中p-EGFR和p-MAPK均呈阳性表达，p-EGFR主要分布在细胞膜和细胞质，尤以细胞膜附近最明显；p-MAPK的阳性信号主要呈核浆型。对照组中全为阴性。结论氯痤疮患者皮肤组织中EGFR和MAPK发生磷酸化被激活，提示MAPK信号转导途径可能是氯痤疮的重要分子机制。; 张春梅汤乃军董丽赵力军马世伟魏文国张万起张芃韩伟; 关键词：有丝分裂素激活蛋白激酶类信号传递

芳香烃受体核转位蛋白的结构及相关功能被引量：3: 2007年; 芳香烃受体核转位蛋白(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT)是碱性螺旋-环-螺旋转录因子超家族中新发现的PAS亚家族的成员之一。它是体内许多bHLH-PAS蛋白共同的专性配偶体,可以与芳香烃受体、低氧诱导因子、果蝇SIM蛋白等形成异二聚体并介导许多信号转导过程,从而使个体对环境污染物(如二恶英)、低氧状态等外界因素的改变产生相应的生物学效应,本文就ARNT的基本结构及其在体内的主要生理功能等方面作一综述。; 王卓张万起; 关键词：转录因子芳香烃受体

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国家自然科学基金(30471440)

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