国家自然科学基金(30471458) 作品数:25 被引量:106 H指数:8 相关作者: 王春波 王跃军 李金莲 陈雪红 郭沈波 更多>> 相关机构: 青岛大学 中国水产科学研究院黄海水产研究所 滨州医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 山东省自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 化学工程 更多>>
Fas通路在扇贝多肽抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡中的作用 被引量:6 2008年 目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(Fas associated protein with death domain,FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线B(Ultraviolet B,UVB)诱导的人角质形成细胞株(immortalized human keratino,HaCaT)细胞凋亡的作用机制。方法实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.68mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69mmol·L-1PCF组、UVB+2.84mmol·L-1PCF组、UVB+1.42mmol·L-1PCF组。以正交实验设计确立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳和荧光染色(Ho-echst33258)分析PCF对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;琼脂糖凝胶电泳分析caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测Fas(CD95)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测FADD及caspase-8蛋白的表达。结果PCF能明显抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡;z-IETD-fmk对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有明显抑制作用;1.42~5.69mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的Fas,FADD的表达增加及caspase-8的活化。结论PCF可剂量依赖性抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas,FADD的表达及caspase-8的活化有关。 李丙华 王红兵 全香花 王跃军 王春波关键词:扇贝多肽 FAS HACAT细胞 凋亡 扇贝多肽对UVA损伤HaCaT细胞UCP2表达及线粒体功能的影响 2011年 目的探究紫外线A(ultraviolet A,UVA)损伤对HaCaT角质形成细胞线粒体解偶联蛋白2(uncoupling protein2,UCP2)表达的影响以及扇贝多肽(polypeptide from Chlamysfarreri,PCF)的调节作用,并研究PCF对UVA损伤HaCaT细胞线粒体功能的保护作用。方法复制8 J.cm-2 UVA辐射损伤HaCaT角质形成细胞模型,免疫印迹法检测UVA损伤后HaCaT细胞UCP2蛋白表达的变化及PCF的影响、PCF对UVA损伤HaCaT细胞凋亡蛋白酶激活因子(apoptot-ic protease-activating factor 1,Apaf-1)、细胞色素C(Cyto-chrome C,Cyt C)蛋白表达的影响;电子自旋共振(electronspin resonance,ESR)技术检测ROS的释放量;流式细胞术检测线粒体膜电位;紫外分光光度法测定PCF对UVA损伤HaCaT细胞线粒体呼吸链复合酶Ⅰ(NADH-辅酶Q还原酶)活性的影响。结果正常HaCaT细胞UCP2几乎不表达,UVA照射后表达升高,3 h达高峰,6 h开始逐渐下降;1.42~5.69 mmol.L-1剂量范围内的PCF对UCP2的表达有抑制作用;PCF可明显抑制UVA诱导的ROS产生、线粒体膜电位下降、Cyt C的释放及Apaf-1的表达,可有效抑制UVA损伤后HaCaT细胞呼吸链复合酶I活性的下降。结论 PCF对UVA引起的HaCaT细胞线粒体损伤具有保护作用。 王春波 孙霞 李金莲 韩彦弢 陈雪红 谢靖关键词:扇贝多肽 HACAT细胞 UVA 线粒体 UCP2 活性氧 扇贝多肽对UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞PI3K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响 被引量:2 2008年 目的研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)对紫外线B(UVB)辐射损伤小鼠胸腺淋巴细胞后PI3K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响。方法UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞,用比色法测定胸腺淋巴细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;western-blot检测Akt的活性,预先加入或不加入PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002检测细胞凋亡信号调节激酶Ⅰ(apoptosis signal regulating kinase-1,ASK1)、JNK的活性、线粒体膜电位(ΔψМ)和DNA ladder。结果PCF能激活AKT的活性,抑制UVB对小鼠胸腺淋巴细胞ASK1凋亡通路的活化。结论PCF通过降低细胞内活性氧的含量,提高AKT的活性,引起ASK1的降解,导致ASK1-JNK诱导的细胞凋亡抑制。 陈海英 周颖斌 王春波 于文功 兰晓明关键词:紫外线B 胸腺淋巴细胞 扇贝多肽对UVB损伤HaCaT细胞的抗氧化作用 被引量:10 2005年 目的研究扇贝多肽(PCF)对UVB损伤HaCaT细胞的抗氧化作用。方法HaCaT细胞与PCF孵育1h后,接受UVB辐射,继续孵育18h后,采用酶化学法测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、过氧化氢酶(CAT)活性、以及测定其总抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)水平。结果PCF能提高HaCaT细胞内抗氧化酶SOD,GSHPx,CAT活性,增强细胞总抗氧化能力并减少脂质过氧化产物MDA的产生。结论PCF能增加细胞内抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化反应,具有抗氧化作用。 黄绵庆 阎春玲 窦梅 战松梅 王美芝 王跃军 王春波关键词:扇贝多肽 UVB 抗氧化 扇贝多肽对UVB损伤HaCaT细胞ERKs/MAPKs通路的影响 被引量:8 2006年 目的探讨扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐射损伤HaCaT细胞的作用及对细胞外调节激酶-丝裂原活化蛋白激酶(ERKs/MAPKs)通路的影响。方法建立UVB(20 mJ/cm2)对体外培养的HaCaT细胞辐射损伤的病理模型,实验分为对照组、模型组、UVB+5.69 mmol/L PCF组、UVB+2.84 mmol/L PCF组、UVB+1.42 mmol/L PCF组和UVB+5.69 mmol/L维生素C组。琼脂糖凝胶电泳观察各组不加入或分别加入Caspase-3抑制剂(DEVD-FMK)、ERKs通路抑制剂(PD98059)后的细胞凋亡情况;Western blot检测ERKs、MEKs磷酸化与非磷酸化的活性。结果PCF能剂量依赖性地减少UVB所致的HaCaT细胞DNA片段的出现;预先应用ERKs通路抑制剂可使DNA片段增加;预先应用Caspase-3抑制剂使DNA片段减少;PCF还能提高磷酸化ERKs、MEKs的活性,但不影响总的ERKs、MEKs的含量。结论PCF能抑制UVB辐射诱导的细胞凋亡,对UVB辐射损伤的细胞具有保护作用。其作用通过调节ERKs/MAPKs的信号通路和Caspase级联反应实现。 于爽 郭沈波 严州萍 姜国湖 王跃军 王春波关键词:扇贝多肽 紫外线 HACAT细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及扇贝多肽在UVA诱导HaCaT细胞凋亡中的作用 被引量:11 2007年 目的研究UVA对HaCaT细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumour necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)表达的影响;复制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型,探究TRAIL在UVA诱导的HaCaT细胞凋亡中的作用及扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)对UVA诱导的TRAIL凋亡通路的影响。方法实验设计分为5组:对照组、UVA模型组、UVA+5.69mmol·L^-1PCF组、UVA+2.84mmol·L^-1PCF组、UVA+1.42mmol·L^-1PCF组。Real-Time PCR检测TRAIL mRNA表达;蛋白质印迹法检测TRAIL蛋白表达及caspase-8活性;琼脂糖凝胶电泳分析TRAIL中和性抗体对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡的影响。结果8J·cm^-2UVA照射HaCaT细胞后TRAIL mRNA及蛋白表达增加,与对照组相比差异有显著性(P〈0.01);TRAIL中和性抗体对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42~5.69mmol·L^-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的HaCaT细胞TRAIL mRNA及蛋白表达(P〈0.05,P〈0.01);PCF对UVA引起的HaCaT细胞caspase-8的活化有抑制作用,且呈量效关系。结论UVA可增强HaCaT细胞TRAIL表达;TRAIL参与了UVA诱导的HaCaT细胞凋亡;PCF对UVA诱导的HaCaT细胞TRAIL表达有抑制作用,也可减弱UVA诱导的caspase-8活化,以其抗氧化活性抑制TRAIL凋亡通路而发挥抗凋亡作用。 王贞丽 李金莲 王春波关键词:扇贝多肽 HACAT 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 CASPASE-8 凋亡 扇贝多肽经由aSMase-JNK通路抑制UVA诱导HaCaT细胞凋亡 被引量:5 2008年 建立紫外线A(UVA)辐射损伤HaCaT细胞的病理模型,从酸性鞘磷脂酶-JNK信号通路的角度研究扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制UVA诱导HaCaT细胞凋亡的分子机制.采用Hoechst 33258染色结合琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡;用RT—PCR法和细胞免疫荧光染色检测胞内酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,aSMase)的表达;蛋白印迹法检测细胞内JNK及磷酸化JNK的蛋白水平.结果表明,PCF可明显地抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡;aSMase抑制剂Desipramine和JNK抑制剂SP600125均可阻断UVA引起的细胞凋亡;PCF的浓度在1.42~5.68mmol/L范围内可依赖性地抑制UVA辐射后细胞内aSMase的表达量以及JNK蛋白的磷酸化;预先加入Desipramine则抑制UVA引起的JNK蛋白的磷酸化.表明PCF通过阻断aSMase—JNK通路来抑制UVA诱导HaCaT细胞凋亡. 邢雁霞 苏爱 杜卫 王春波关键词:扇贝多肽 酸性鞘磷脂酶 紫外线A 凋亡 HACAT细胞 扇贝多肽对紫外线A诱导HaCaT细胞Fas、c-fos表达的影响 被引量:1 2010年 目的观察扇贝多肽(PCF)对紫外线A(UVA)照射后HaCaT角质形成细胞Fas、c-fos表达的影响,以探讨PCF保护UVA致HaCaT细胞损伤的分子机制。方法体外培养的HaCaT角质形成细胞分为5组:对照组、UVA模型组、5.69mmol/LPCF组、2.84mmol/LPCF组、1.42mmol/LPCF组。蛋白质印迹法检测Fas、c-fos蛋白表达;RT-PCR检测FasmRNA表达;荧光定量PCR检测c-fosmRNA表达。结果 UVA照射后模型组Fas、c-fos表达均显著增加(P<0.01),1.42~5.69mmol/L剂量范围内的PCF可抑制UVA引起的HaCaT细胞Fas、c-fosmRNA及蛋白表达(P<0.05),且有剂量依赖性。结论 PCF可通过抑制Fas、c-fos表达而抑制UVA诱导的HaCaT细胞损伤。 李金莲 李娜 董晓青 王春波关键词:扇贝多肽 紫外线A FAS 护肤用品 扇贝多肽保护单次UVA氧化损伤HaCaT细胞 被引量:10 2006年 目的探讨扇贝多肽对单次长波紫外线辐射HaCaT角质形成细胞氧化损伤的保护作用机制。方法从栉孔扇贝中提取扇贝多肽(PCF,Mr=879)。UVA辐射强度为5J·cm-2。酶生化法测定胞质SOD,GSH-px活性,ROS、MDA水平;透射电镜观察细胞超微结构的改变;原位杂交技术检测细胞内p21mRNA的变化。结果在5J·cm-2UVA辐射下,在给定浓度范围内PCF能剂量依赖性降低胞质ROS、MDA水平;提高SOD,GSH-px活力;电镜下可见PCF可保护细胞超微结构;p21mRNA原位杂交发现PCF可明显抑制其表达。结论扇贝多肽对单次UVA诱导的人HaCaT细胞氧化损伤有保护作用。其机制与清除氧自由基、提高抗氧化酶活性、抑制p21mRNA表达及细胞凋亡有关。 窦梅 初晓 张杰 陈雪红 王跃军 邵伯芹 王春波关键词:扇贝多肽 长波紫外线 角质形成细胞 扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3 被引量:17 2007年 目的从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(poly-peptidefromChlamysfarreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68mmol.L-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69mmol.L-1PCF组、UVA+2.84mmol.L-1PCF组、UVA+1.42mmol.L-1PCF组。以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK及磷酸化p38MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.425.69mmol.L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化。结论PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK通路和caspase-3活性有关。 李金莲 严州萍 陈雪红 王跃军 孙谧 石宇玺 王春波关键词:扇贝多肽 半胱天冬酶-3 凋亡 HACAT细胞