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拟南芥钙调素结合蛋白基因启动子的克隆及表达被引量：2: 2012年; 采用PCR技术从拟南芥中克隆了SCBP60g基因的启动子,并与GUS报告基因融合构建重组表达载体,转化野生型拟南芥,对获得的转基因株系进行GUS组织染色,从基因调控水平上探讨其在功能方面的差异。结果显示:SCBP60g基因的启动子能指导GUS报告基因在拟南芥的根、茎、叶和花中表达,并且在这些部位的维管束表达较强。这种表达方式与LCBP60g基因的启动子指导的GUS基因组织化学染色有差异,表明这个启动子的表达调控具有一定的特异性。; 万东莉李瑞丽邹博高阳万永青王瑞刚李国婧; 关键词：拟南芥启动子钙调素结合蛋白 GUS报告基因

沙冬青CBF/DREB1转录因子cDNA的克隆及序列分析被引量：15: 2009年; CBF/DREB1(C-repeat binding factor/dehydration resistance element binding protein 1)是一类抗逆相关的转录因子,它们的表达可以激活下游一系列抗逆应答基因的表达,从而提高植株的抗逆性。沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)主要生长在中国西北荒漠和半荒漠地带,是典型的旱生资源植物,具有突出的抗寒、抗旱、耐盐碱特性。本文以沙冬青为实验材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆了沙冬青CBF/DREB1基因cDNA序列,并对其进行了序列分析。结果表明:沙冬青CBF/DREB1转录因子基因序列全长为991bp,包括624bp的开放阅读框(ORF),起始密码子ATG,终止密码子TAA,114bp的5'UTR和253bp的3'UTR,以及加尾信号AATAAA及poly(A)11。生物信息学预测其演绎的氨基酸序列具有AP2结构域,且AP2结构域的两端拥有CBF家族特有的PKK/RPAGRxKFxETRHP和DSAWR两段短多肽序列,属于CBF家族。沙冬青CBF/DREB1转录因子的克隆为进一步研究植物抗逆和获得抗性基因提供了新的候选基因,也为进一步从分子水平上验证其功能,深入理解植物适应干旱、低温和高盐机制奠定基础。; 杨杞白肖飞高阳伊莉佳丛靖宇王瑞刚李国婧; 关键词：沙冬青 RACE

拟南芥SCBP60g蛋白的亚细胞定位及其功能研究: 2013年; 为了研究SCBP60g的功能,研究利用Gateway克隆技术构建了GFP报告基因与拟南芥SCBP60g基因融合表达载体和基因功能互补表达载体并获得了转基因植物,通过激光共聚焦显微镜观察了SCBP60g蛋白的亚细胞定位情况,利用活体细菌生长量检测实验研究了SCBP60g蛋白在抗病中的功能;同时构建了SCBP60g过表达载体并检测了转基因植物对ABA的响应情况。结果显示,SCBP60g定位于细胞核;SCBP60g基因不能恢复CBP60g基因突变体对丁香假单胞菌的敏感性;过量表达SCBP60g基因不影响拟南芥对ABA的敏感性。表明SCBP60g没有参与拟南芥的抗病防御反应以及对ABA的响应。; 万永青李瑞丽邹博万东莉王瑞刚李国婧; 关键词：拟南芥钙调素结合蛋白亚细胞定位抗病性

拟南芥钙调素结合蛋白参与胁迫响应的研究(英文): 2012年; 采用实时荧光定量RT-PCR和Northern blotting技术检测了野生型拟南芥中CBP60g基因对丁香假单胞菌和非生物胁迫的响应,并对丁香假单胞菌接种后,野生型拟南芥、cbp60g-1突变体和CBP60g过表达转基因植物中抗逆相关基因的表达变化进行检测。结果显示:(1)在野生型拟南芥中CBP60g基因的表达能被丁香假单胞菌、高盐、冷和机械损伤所诱导。(2)经丁香假单胞菌诱导后病程相关基因PR5和AIG1的表达在过表达转基因植物中明显高于野生型。(3)受干旱和ABA诱导的AtMYB2基因的表达在过表达转基因植物中也高于野生型。研究表明,CBP60g同时参与了拟南芥对生物和非生物胁迫响应。; 万东莉丛靖宇李瑞丽邹博王瑞刚李国婧; 关键词：拟南芥钙调素结合蛋白胁迫

拟南芥类受体蛋白激酶基因CRK45对外源钙离子的响应: 2012年; 以拟南芥野生型和类受体蛋白激酶基因CRK45的T-DNA插入突变体crk45为材料,采用差异基因表达筛选技术检测ABA处理后野生型和crk45中基因表达的差异。结果显示:(1)crk45突变体中有1个基因的表达比野生型高约4倍。(2)NCBI数据库检索表明,该基因编码的蛋白具有EF手型结构,蛋白序列全长为130个氨基酸,是典型的Ca2+结合蛋白,故命名为CRK45抑制的钙离子结合蛋白(CICBP)。(3)Northern blotting分析结果显示,ABA处理后crk45突变体中CICBP的表达明显升高,证明CICBP基因的确受ABA诱导,且其表达受CRK45的抑制。(4)外源75mmol/L的Ca2+处理后,crk45突变体的萌发率(30.8%)显著高于野生型(17.16%),说明在Ca2+介导下CRK45的功能是抑制种子萌发。(5)qRT-PCR检测显示,野生型中CRK45的表达受Ca2+诱导明显升高,而crk45突变体中的表达一直保持很低,说明crk45突变体是一个基因敲除突变体;Ca2+处理后crk45突变体中CICBP基因表达上调,而野生型中CICBP的表达反而降低,说明Ca2+处理下CRK45抑制CICBP基因的表达。研究表明,ABA或Ca2+处理后,CRK45通过负调控CICBP基因的表达,从而抑制拟南芥种子萌发。; 张秀娟杨冠宇石蕊韩晓敏王瑞刚李国婧; 关键词：拟南芥钙离子

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-08-0871)