中国科学院西部之光基金(2011DF02)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：陕西省微生物研究所西安市动物疫病预防控制中心更多>>
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- 金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)Z结构域串联体的克隆、表达和筛选被引量：2
- 2012年
- 筛选一种高效重组金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)用于制备抗体纯化亲和介质。首先通过基因操作获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因,将目的基因分别克隆至pET-22b表达载体并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得不同串联个数的Z结构域基因工程菌,经诱导表达和Ni2+亲和层析纯化得到Z结构域单体和二-五串体蛋白。纯化后的目的蛋白偶联至琼脂糖凝胶作为亲和层析介质,对人免疫球蛋白G(IgG)进行分离纯化。分析比较Z结构域串联体蛋白产量及其偶联的亲和介质对抗体吸附载量的差异。结果表明,构建的Z结构域单体、二串体、三串体、四串体和五串体基因工程菌能有效表达目的蛋白,制备的凝胶亲和介质可特异性吸附人IgG。增加Z结构域串联数,重组蛋白产量和单位摩尔数多聚体蛋白吸附载量获得提高,其中,重组四串体蛋白产量大(160 mg/10 g湿菌体),对抗体的吸附载量高(34.4 mg人IgG/mL胶),更适合作为配基用于亲和层析介质的制备。
- 万一訾静张琨张志敏张月娟王琰王军
- 耐有机溶剂脂肪酶基因lipI的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达被引量：1
- 2013年
- 为了实现耐有机溶剂脂肪酶基因的真核表达,参照GenBank公布的脂肪酶基因序列设计简并引物,通过PCR扩增出G.geotrichumSXL-107的全长1 692bp、编码563个氨基酸的脂肪酶基因lipI,基因登录号为JX074060。利用Signal P 3.0软件对lipI基因序列进行分析,将去除自身信号肽的成熟lipI基因克隆到诱导型表达载体pPIC9K上,构建胞外重组表达载体pPIC9K li-pI,转化毕赤酵母KM71,发酵培养72h,发酵上清液中脂肪酶活力达到70U/mL,与野生型脂肪酶产生菌Galactomyces geotrichum SXL 107相比,脂肪酶活力提高7倍。获得的重组脂肪酶的最适温度40℃、pH值为6.5,在10%的甲醇溶液中作用48h后仍然保持60%以上的酶活力。
- 王琰张志敏王军张琨訾静万一王燕张继生高建新
- 关键词：脂肪酶基因毕赤酵母
- 甲醇耐受性脂肪酶产生菌Galactomyses geotrichum SXL-107发酵条件的优化被引量：2
- 2013年
- 对甲醇耐受性脂肪酶产生菌Galactomyses geotrichum SXL-107产酶条件进行了优化.通过单因素试验确定碳源、氮源和诱导剂,响应面法确定发酵培养条件,250 mL摇瓶培养和10 L发酵罐发酵试验进行验证.SXL-107菌株优化后的发酵培养基成分为黄豆粉25.56 g.L-1、橄榄油16.74 g.L-1、蔗糖4.78 g.L-1、蛋白胨10.00g.L-1,(NH4)2SO45.00 g.L-1,KH2PO41.50 g.L-1和Mg2SO41.00 g.L-1,培养温度30℃,起始培养基pH6.0,诱导剂橄榄油于发酵培养的第0,6,12 h分3批添加,在250 mL摇瓶发酵水平上,脂肪酶活性达到317.21U.mL-1,较初始发酵条件时脂肪酶活性提高了3.05倍;在10 L发酵罐放大试验中,脂肪酶活性在发酵培养38h时达到最大值332.03 U.mL-1.
- 张志敏王琰王斌张月娟訾静张琨王军万一
- 关键词：脂肪酶GEOTRICHUM发酵优化
