国家高技术研究发展计划(2012AA022201)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 相关作者：吴敬君李梅邢新会张翀李晔更多>>
- 相关机构：浙江工业大学北京电子科技职业学院清华大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市属高等学校人才强教计划资助项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 手性医药化学品生物催化合成进展与实践被引量：4
- 2013年
- 手性生物催化是利用生物催化剂对手性分子构型的识别能力进行选择性催化的新型物质加工过程,具有催化效率高、选择性强和反应条件温和等优势。近十年来,生物催化技术快速崛起,树立了多个大品种原料药过程替代的成功范例,成为手性医药化学品绿色制造不可或缺的重要工具。笔者分析了生物催化商业和学术发展的新动向,并结合笔者在手性药物生物催化合成的产业化开发实践,指出了今后的发展方向。
- 郑裕国沈寅初
- 关键词：手性药物生物催化酶工程
- 肝素黄杆菌硫酸软骨素酶AC的高效重组表达体系构建及其酶学性质研究被引量：4
- 2013年
- 为实现硫酸软骨素酶AC(chondroitinase AC,ChonAC)在大肠杆菌中高效表达,通过PCR方法从肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)中扩增得到ChonAC基因cslA,采用融合蛋白技术构建麦芽糖结合蛋白(maltose-bindingprotein,MBP)与ChonAC的融合表达载体(MBP-ChonAC),并在低温(15℃)条件下实现MBP-ChonAC的可溶活性表达,通过MBPTrap HP可实现一步纯化,使纯度可达95%以上,酶比活力可达94.1IU/mg融合蛋白(即相当于143.8IU/mgChonAC蛋白当量)。对MBP-ChonAC的酶学研究发现,其最佳催化pH值为7.5～8.0,最佳Ca2+浓度为20mmol/L,最适NaCl浓度为50mmol/L,最佳作用温度为20～35℃。MBP-ChonAC具有较好的热稳定性,在30℃时其半衰期可达8.3h。同时对其以硫酸软骨素A为底物的动力学常数测定发现,MBP-ChonAC相比ChonAC其Km稍有增大而催化常数kcat稍有降低,但是差别不大,表明MBP的融合没有对ChonAC的催化能力造成影响。通过宿主优化、诱导浓度优化及培养基优化进一步提高了MBP-ChonAC的表达量,其摇瓶培养酶活力就可达10800.5IU/L。
- 吴敬君李晔张翀李梅邢新会
- 关键词：酶学性质麦芽糖结合蛋白
