天津市应用基础与前沿技术研究计划(07JCZDJC04900)
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
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- 整合素αvβ3小分子抑制剂先导物的发现及活性研究
- 目的整合素αvβ3在肿瘤转移、血管新生、炎症、内膜增生等过程中具有重要作用,是人们密切关心的一类药物研究靶点。本研究利用计算机虚拟筛选,寻找靶向整合素αvβ3新的小分子抑制剂,并对其活性进行研究。方法基于整合素αvβ3胞...
- 周圆纪庆张永慈杨铭熊冬生杨纯正
- 文献传递
- 阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响。方法采用抗E-tag亲和层析柱分离纯化抗CD3／抗P—gp微型双功能抗体，用阿糖胞苷刺激K562和K562／A02细胞，并用流式细胞术检测K562和K562／A02细胞B7—1、B7—2分子的表达，用CytoTox 96非放射性细胞毒试剂盒检测阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤K562／A02细胞的影响。结果经阿糖胞苷刺激的K562和K562／A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较未刺激的对照组明显升高。阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞在效靶比0．39：1～25：1范围内，激活T细胞对耐药白血病细胞的杀伤率为（16．44±1．20）％～（60．49±2．90）％，其杀伤率与效靶比和抗体浓度呈依赖关系（P〈0．05）。结论阿糖胞苷可明显提高抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的人T淋巴细胞对高表达P—gp抗原的耐药白血病细胞的杀伤效府。
- 杨铭范冬梅高瀛岱周圆纪庆邵晓枫王金宏许元富熊冬生杨纯正
- 关键词：阿糖胞苷T淋巴细胞B7分子
- Survivin小分子抑制剂的计算机虚拟筛选及初步活性研究
- 2013年
- 目的通过计算机虚拟筛选,寻找生存素(survivin)的小分子抑制剂,并对其活性进行初步研究。方法基于sur-vivin与其抑制性配体Smac/Diablo复合物的三维结构,用分子对接的方法对含有149,214个小分子的三维结构数据库进行筛选。通过初步活性测定确定活性较高的化合物,进一步研究其对凋亡,细胞周期及活性氧产生的影响。利用分子图像学方法分析化合物与survivin之间的作用模式。结果通过能量打分并根据结构多样性和类药性原则,最终选择了35个化合物进行初步活性测定,其中有9个化合物显示出明显的抑制活性,3个化合物的半数抑制浓度在30μmol.L-1以下。选择其中活性最高的化合物1-19进行进一步研究,结果显示小剂量的1-19能够促进细胞的早期凋亡,诱导细胞内活性氧产生,导致细胞发生S和G2/M期阻滞。分子图像学分析显示活性最高的1-19能够与survivin配体结合区的71位天门冬氨酸形成两个稳定的氢键。结论通过计算机辅助药物设计、药理活性测试以及分子图像学分析,初步确定了一个针对survivin的全新的先导化合物,为今后survivin小分子抑制剂的研究奠定了基础。
- 张孝云纪庆代晓华姜琳琳熊冬生周圆
- 关键词：生存素小分子抑制剂药物设计先导化合物
- 3,5-二氯苯基双胍抑制黑色素瘤肺转移的裸鼠体内药效学研究
- 2012年
- 目的确认整合素αvβ3新型抑制剂3,5-二氯苯基双胍对人黑色素瘤肺转移的抑制作用。方法应用前期建立的人黑色素瘤裸鼠肺转移模型,观察3,5-二氯苯基双胍的治疗效果。裸鼠尾静脉接种黑色素瘤细胞(第1天)后,于第5、9、13、17和21天给予该药物治疗。50 d实验结束,处死裸鼠并取完整的肺组织,Bouin氏液固定24 h后根据肺表面癌结节的大小和数量给予评分,以此评价肺转移的程度。结果 3,5-二氯苯基双胍6、12 mg/kg和24 mg/kg治疗组的转移分数分别为(55.25±13.60)、(35.13±17.36)和(12.83±11.44),与溶剂对照组(转移分数是82.50±17.72)相比具有明显差异(P<0.05)。阳性对照组的转移分数为(11.50±10.44)(P<0.05 vs溶剂对照组),阴性对照组和PBS对照组的转移分数分别为(88.50±17.21)、和(88.87±11.29)(P>0.05 vs溶剂对照组)。结论 3,5-二氯苯基双胍在裸鼠体内能够明显抑制黑色素瘤肺转移,并呈现一定的剂量依赖性。
- 张永慈纪庆杨铭范冬梅熊冬生杨纯正周圆
- 关键词：黑色素瘤整合素ΑVΒ3
- 人黑色素瘤细胞裸鼠肺转移模型的建立被引量：5
- 2009年
- 目的建立整合素αvβ3高表达的黑色素瘤细胞肺转移模型。方法通过将不同数目的M21细胞经尾静脉接种裸鼠,适时处死后计数肺表面癌结节。通过实时定量PCR和明胶酶谱的方法比较肺转移灶细胞与亲代M21细胞差异。结果M21细胞1×106、2×106、5×106尾静脉接种裸鼠,均能形成肺转移灶,癌结节数目均值分别为:84±8、70±6、88±12,三组之间没有明显差异,阴性对照组未形成转移灶。M21肺转移灶细胞与亲代细胞相比,增殖增快,MMP-2活性增高,整合素αv和β3mRNA表达水平明显增高。结论M21细胞1×106经尾静脉接种裸鼠50d内即可100%成瘤。M21肺转移灶细胞具有更快的增殖能力,整合素αvβ3和MMP-2表达水平明显增高。本实验建立了稳定的肺转移模型,为黑色素瘤和整合素αvβ3的研究提供重要的动物模型。
- 张永慈周圆杨铭范冬梅熊冬生杨纯正
- 关键词：黑色素瘤肺转移整合素ΑVΒ3
- 阿糖胞苷增强白血病细胞B7分子表达及促进双功能抗体对靶细胞的杀伤被引量：2
- 2009年
- 目的:研究阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对白血病细胞共刺激分子B7表达的影响,以及联合双功能抗体anti-CD3/anti-Pgp介导T细胞对耐药白血病细胞的杀伤作用。方法:应用流式细胞术检测白血病细胞株K562和多药耐药白血病细胞株K562/A02细胞经Ara-C刺激不同时间后B7-1、B7-2分子的表达,RT-PCR方法检测B7-1mRNA、B7-2mRNA的表达,MTT法检测经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞对T淋巴细胞增殖的影响。CytoTox96非放射性细胞毒性分析检测Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp微型双功能抗体对人外周血淋巴细胞杀伤K562和K562/A02靶细胞的影响。结果:经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较对照组明显升高;MTT结果显示,经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞能促进T淋巴细胞增殖;Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体在0.39:1～25:1效靶比范围内,随着效靶比的升高,介导T淋巴细胞对K562和K562/A02细胞的杀伤率随之提高,对高表达Pgp的耐药K562/A02细胞尤为明显。结论:Ara-C可上调白血病细胞B7分子的表达,从而增强anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用。
- 杨铭范冬梅高瀛岱赵英新周圆许元富纪庆王金宏熊冬生杨纯正
- 关键词：阿糖胞苷白血病细胞B7-1B7-2
- 阿糖胞苷刺激Jurkat细胞B7和细胞因子mRNA表达
- 2009年
- 目的探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用。方法阿糖胞苷(Ara-C)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测刺激前、后B7-1、B7-2的表达,RT-PCR检测刺激前、后B7-1、B7-2基因的表达,检测T细胞表面因子IL-3和IFN-γ的表达以及这两种细胞因子在Ara-C刺激Jurkat细胞后12,24,48,72,96,120,144 h时间动态变化。结果经Ara-C刺激Jurkat细胞后,均能使B7-1、B7-2表达上调,并且可诱导T细胞分泌细胞因子IL-3和IFN-γ,而未经Ara-C刺激的Jurkat细胞,无B7-1、B7-2的表达,均未诱导细胞因子的分泌。IL-3在T细胞活化12 h即可检测到,在48 h表达量最高,IFN-γ在T细胞活化24 h即可检测到,在72 h表达量最高。结论Ara-C可有效地刺激Jurkat细胞B7的表达,有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞。B7在T细胞活化中起着重要作用。
- 杨铭赵英新范冬梅周圆廖晓龙杨纯正
- 关键词：B7基因T细胞细胞因子
- B7在血液病细胞系中的表达及对T淋巴细胞的免疫反应被引量：2
- 2009年
- 目的探讨B7共刺激分子在人类恶性血液病细胞系中的表达以及激活T淋巴细胞的免疫反应。方法用流式细胞术检测HL-60、NB4、Jurkat、U937、Raji、Daudi、K562等细胞HLA抗原和B7分子表达,同时检测经Ara-C刺激前后B7分子的表达,用RT-PCR方法检测经Ara-C刺激前后激活T淋巴细胞分泌细胞因子IFN-γ mRNA。结果HL-60、NB4、Jurkat、U937、Raji、Daudi、K562等恶性血液病细胞株均表达或高表达HLA抗原和B7-2分子,低表达或不表达B7-1分子,经Ara-C刺激后细胞株B7分子的表达明显增强,并能有效地激活T淋巴细胞表达高水平的IFN-γ mRNA。结论大多数人类恶性血液病细胞株均不表达或低表达B7分子,但是B7-1可能在肿瘤免疫中起重要作用。
- 熊秀娟杨铭范冬梅赵英新纪庆王金宏邵晓枫许元富熊冬生周圆杨纯正
- 关键词：B7分子HLAT淋巴细胞
- 钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺对人乳腺癌细胞MCF-7生长的影响及相关作用机制被引量：2
- 2009年
- 目的探讨钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)对人乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响及其作用机制。方法采用不同浓度EBB作用于MCF-7,MTT法检测其对MCF-7细胞的作用,流式细胞仪检测细胞周期,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞骨架、线粒体、内质网等亚细胞结构。结果EBB对MCF-7细胞的IC50为(13.0±3.7)μmol/L,并可使S期细胞显著增加(P<0.05)。EBB作用可导致MCF-7细胞出现微管解聚、微丝重排、线粒体破裂和内质网肿胀,且随剂量增加效应增强。结论EBB可将MCF-7细胞阻滞于S期,抑制其增殖,其机制可能与细胞骨架、线粒体和内质网的结构和功能改变有关。
- 代晓华刘荣周圆杨铭范冬梅熊冬生齐静杨纯正朱惠芳
