新鲜香菜叶经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的多酚氧化酶。该酶比活力达到5 622.95 U/mg,酶活回收率为3.90%,纯化倍数为126.08;全酶分子质量为111.10 k D,亚基分子质量为55.60 k D;最适温度为37℃,最适p H值为6.5;在25~45℃及p H 6.0~7.0范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其Km值为4.04×10-2 mol/L;甲醇、乙醇、异丙醇、氯仿及柠檬酸、抗坏血酸、Ca2+、Hg2+、Ba2+对其有抑制作用,Co2+、Pb2+对其具有一定的激活作用。
将新鲜牛肾匀浆后,经由缓冲液提取,正丁醇除脂,硫酸铵分级沉淀,CM-Sepharose阳离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析后得到电泳纯的牛肾溶菌酶。结果表明:该酶比活力为15 145.63 U/mg,回收率为29.13%,纯化倍数为231.05;分子质量约12.66 k D,为单亚基酶。最适反应温度为65℃,在65℃以下较稳定;最适p H 9.0,p H值在3.0~9.0范围内稳定性较好;测得最适条件下牛肾溶菌酶对溶壁微球菌的Km值为0.399μg/m L;甲醇、乙醇、异丙醇和硫氰化钾(KSCN)对该酶有激活作用;十二烷基硫酸钠、Pb2+、Ag+对该酶有明显抑制作用。
新鲜鸭肝经匀浆、磷酸盐缓冲液抽提,乙醇和硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的乳酸脱氢酶。该酶经纯化后酶比活力达到668.82 U/mg,酶活回收率为25.79%,纯化倍数为185.78。该酶的全分子质量约为170.93 k D,亚基分子质量为44.72 k D;最适反应温度为45℃,最适pH值为7.4,在25~45℃及p H 5~10的范围内稳定性较好;在45℃、pH 7.4条件下,测得该酶对底物还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotid,NADH)的Km值为3.407μmol/L,对丙酮酸钠的Km值为8.431μmol/L;草酸、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、Cu2+、Ag+对该酶的抑制作用最强,Co2+、K+对该酶有双重作用,低浓度时有激活作用,而高浓度时具有抑制酶活性的作用。