国家自然科学基金(31201053)
- 作品数：11 被引量：39H指数：4
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- 相关机构：中国医科大学中国人民解放军中国医科大学附属第四医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金沈阳市科学技术计划项目辽宁省医学高峰建设工程项目更多>>
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- 血清与尿液中RANKL检测在骨质疏松诊断中的意义被引量：1
- 2015年
- 目的探讨血清与尿液中核因子kappa B(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)检测在骨质疏松诊断中的意义。方法选取53例骨质疏松患者(实验组)和45例健康者(正常对照组)为研究对象。用ELISA方法测定血清与尿液中RANKL的表达水平并进行比较。结果实验组血清与尿液中RANKL的水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。血清与尿液中RANKL的ROC曲线下面积分别为0.898和0.734。联合检测血清与尿液RANKL和Ca2+水平对骨质疏松诊断的灵敏度为89.5%,特异度为86.1%。结论 RANKL可能与骨质疏松的发生、发展有关,血清与尿液中RANKL的检测可用于骨质疏松的辅助诊断。
- 孙赫非穆胜凯吴岩李晨光尹西盟王景续
- 关键词：NF-骨质疏松血清
- 骨肉瘤细胞中Polo样激酶3的表达和定位
- 2017年
- 目的:构建新型人源真核表达载体3*Flag-hPlk3并同时检测其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达及定位。方法:以GST-hPlk3作为模板,利用聚合酶链反应扩增人源Plk3目的基因c DNA全长,并将其克隆到含有3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序分析鉴定,并转染至U2OS骨肉瘤细胞系中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用荧光共聚焦激光扫描显微镜观察3*FlaghPlk3在U2OS细胞系中的定位,进一步利用免疫沉淀方法纯化人源Plk3蛋白。结果:hPlk3基因c DNA全长成功构建于含有3*Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测3*Flag-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为74k Da。3*Flag-hPlk3在骨肉瘤细胞系U2OS中主要定位于细胞质及核周,并成功纯化了hPlk3蛋白。结论:成功的构建了含有3*Flag标签的人源Plk3真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-hPlk3融合蛋白的表达,最终成功纯化hPlk3蛋白。3*Flag-hPlk3蛋白主要定位在细胞质和核周。
- 沈涛陈之光李妍巴根郭然杨蕾郭洲洋付勤
- 关键词：WESTERNBLOT免疫沉淀
- LOXL2促进乳腺癌MCF-7细胞侵袭研究被引量：4
- 2015年
- 目的:研究赖氨酰氧化酶样蛋白-2(lysyl oxidase like-2 protein,LOXL2)对乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移的影响。方法:利用脂质体法将构建好的Flag-LOXL2质粒转染到乳腺癌MCF-7细胞中,应用Western blot检测转染效率,Transwell侵袭实验检测乳腺癌MCF-7细胞的体外侵袭力,并进一步使用Western blot检测LOXL2蛋白对金属蛋白酶MMP2/MMP9表达的影响。结果:在乳腺癌MCF-7细胞中瞬时转染FlagLOXL2,LOXL2蛋白表达明显增加,并促进MCF-7细胞的侵袭能力,上调金属蛋白酶MMP2和MMP9蛋白的表达。结论:LOXL2促进MCF-7细胞的侵袭能力,并影响金属蛋白酶MMP2以及MMP9的表达。
- 曹宇勃于涛惠林萍李嵚
- 关键词：乳腺癌
- 3~* Flag-hPlk4真核表达载体的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达和定位
- 2017年
- 目的:构建3~* Flag-hPlk4真核表达载体,并证实重组表达载体在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pGEX-4T-2-hPlk4为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk4基因c DNA全长,并将其克隆至含有3~* Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,Western blot检测重组蛋白的表达。同时利用共聚焦激光显微镜观察3~* Flag-hPlk4表达载体在U2OS细胞中的定位,进一步利用免疫沉淀的方法纯化人源Plk4蛋白。结果:hPlk4基因c DNA全长成功构建到3~* Flag真核表达载体中,Western blot检测到含有3~* Flag的人源Plk4融合蛋白表达,进一步在U2OS骨肉瘤细胞中主要定位于细胞质和细胞核周,并成功纯化hPlk4蛋白。结论:成功构建了3~* Flag-hPlk4真核表达质粒,同时鉴定了融合蛋白的表达,并成功纯化人源Plk4蛋白。3~* Flag-hPlk4蛋白主要定位在细胞质和细胞核周。
- 沈涛李妍杨蕾郭洲洋巴根郭然陈之光付勤
- 关键词：WESTERNBLOT免疫沉淀骨肉瘤
- 蛋白激酶R样内质网激酶的磷酸化对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡的影响被引量：4
- 2015年
- 目的研究蛋白激酶R样内质网激酶（proteinkinaseR—likeERkinase，PERK）的磷酸化及其下游的C／EBP同源蛋白（C／EBPhomologousprotein，CHOP）的表达在缺氧缺血性脑损伤（hypoxic—ischemicbraindamage，HIBD）中的作用和机制。方法60只新生7日龄SD大鼠分为假手术组和HIBD组，每组各30只，每组又按照手术0h，6h和24h分为3个亚组，每组10只。采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况，并用Westernblot方法测定脑组织中磷酸化的PERK及CHOP表达水平。结果（1）HIBD6h出现典型的凋亡细胞峰，细胞凋亡率为（2．17±0．19）％。HIBD24h凋亡峰更为明显，细胞凋亡率达到（13．42±0．83）％，与假手术组（0．57±0．06）％相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）假手术组与HIBD0h大鼠脑组织中磷酸化的PERK和CHOP表达水平较低，在HIBD6h后二者表达开始上升，24h上升更加明显，而假手术组各个时间点二者表达差异无统计学意义（P〉0．05）。与假手术组比较，HIBD组各时间点二者的表达均明显上升，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）缺氧缺血后各时间点磷酸化的PERK的表达和CHOP的表达呈正相关（r=0．997，P〈0．05）。结论脑缺氧缺血后，随着凋亡的出现，磷酸化的PERK和CHOP表达水平升高，提示PERK—CHOP通路的活化可能参与了新生大鼠HIBD神经细胞凋亡的发生。
- 顾卉纪莲黄天楚梅妍袁正伟
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤新生大鼠C/EBP同源蛋白凋亡
- GST-β-catenin融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达被引量：2
- 2015年
- 目的构建GST-β-catenin融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.col)中诱导表达。方法从COS-7细胞中提取m RNA,反转录为c DNA。用PCR方法扩增出β-catenin基因全长,通过Bam HI和Sal I酶切位点将其定向插入p GEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒p GEX-4T-2-β-catenin,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-β-catenin,并用Western blot方法证实了GST-β-catenin融合蛋白的表达。结论成功构建了GST-β-catenin原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化β-catenin及研究其结构与功能提供了前提基础。
- 梁峰沈涛姚强贾长青
- 关键词：Β-CATENIN原核表达融合蛋白
- 4种血清标记物在类风湿关节炎诊断中的应用被引量：21
- 2013年
- 目的系统评估类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸多肽抗体(抗CCP)、抗角蛋白抗体(AKA)和葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)联合检测在类风湿关节炎(RA)诊断中的应用价值和意义。方法分别检测278例RA病人和510例对照者血清中的RF、抗CCP、AKA和GPI等的水平,免疫比浊法检测RF,ELISA法检测抗CCP,间接免疫荧光染色法检测AKA,ELISA法检测GPI,分析4种血清标记物不同组合在RA诊断中的应用价值和意义。结果在单项、两项及多项检测中,敏感度以RF、RF+抗CCP、RF+抗CCP+GPI最高;特异度以抗CCP、抗CCP+AKA、RF+抗CCP+AKA+GPI最高;阳性预测值以抗CCP、抗CCP+GPI、RF+抗CCP+AKA+GPI最高;阴性预测值以GPI、RF+抗CCP、RF+抗CCP+GPI最高;阳性似然比以抗CCP、抗CCP+GPI、RF+抗CCP+AKA+GPI最高;阴性似然比以GPI、RF+抗CCP、RF+抗CCP+GPI最低。结论在RA诊断中,单项、两项及多项检测以抗CCP、RF+抗CCP、RF+抗CCP+GPI最理想,抗CCP是检测核心,联合检测可显著提高RA的诊断。
- 张新刚蒋莉张晓莉郭韵沈涛王晓非
- 关键词：类风湿因子瓜氨酸角蛋白葡萄糖-6-磷酸异构酶
- 3~* Flag-hSesn1重组质粒的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达
- 2017年
- 目的:构建3~*Flag-hSesn1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以GSThSesn1为模板,利用聚合酶链反应扩增hSesn1基因c DNA全长,并将其克隆至3~*Flag标签的真核表达载体中。将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到MG-63骨肉瘤细胞中,提取总蛋白进行Western blot检测。进一步利用共聚焦激光显微镜观察3~*Flag-hS esn1在MG-63细胞中的定位,使用免疫沉淀的方法纯化人源Sesn1蛋白。结果:hS esn1基因的cD NA全长成功构建到3~*Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测到了含有Flag标签的人源Sesn1融合蛋白表达,且在MG-63骨肉瘤细胞中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化人源Sesn1蛋白。结论:成功构建了3~*Flag-hS esn1真核表达质粒,同时鉴定了其融合蛋白的表达,并纯化人源Sesn1蛋白。3~*Flag-hS esn1蛋白主要定位在细胞质,部分定位于细胞核周。
- 沈涛郭然李妍巴根杨蕾郭洲洋陈之光付勤
- 关键词：WESTERNBLOT免疫沉淀
- hSesn3基因真核表达载体的构建及在骨肉瘤细胞中的蛋白表达和定位
- 2017年
- 目的:通过构建人Sesn3真核表达载体同时证实融合蛋白在细胞中的表达及定位。方法:提取Hela工具细胞的mRNA,反转录至c DNA。进一步通过PCR来扩增人Sesn3基因的c DNA全长片段,并将其亚克隆于p EGFP-C1真核表达载体中,进而将构建的重组质粒进行酶切及测序鉴定,转染到MG-63骨肉瘤细胞中,获取细胞总蛋白,通过Western blot方法检测表达。进一步利用激光共聚焦扫描显微镜方法观察MG-63细胞内p EGFP-h Sesn3的定位,最后利用免疫沉淀方法纯化人源h Sesn3蛋白。结果:h Sesn3基因c DNA全长片段克隆于真核表达载体p EGFP-C1中,酶切鉴定片段为1 410 bp,并成功测序。Western blot检测到了GFP-h Sesn3融合蛋白表达,分子量约为79 k Da。在MG-63细胞中p EGFP-h Sesn3主要定位于细胞质,进一步成功纯化了h Sesn3蛋白。结论:成功构建了h Sesn3基因c DNA全长的真核表达载体,在MG-63细胞中p EGFP-h Sesn3蛋白主要定位于细胞质,最终成功纯化了h Sesn3蛋白。
- 沈涛郭洲洋李妍巴根陈之光郭然杨蕾付勤
- 关键词：WESTERNBLOT绿色荧光蛋白质粒构建
- 补充维生素D和钙对超重多囊卵巢综合征患者血糖和血脂的影响被引量：7
- 2015年
- 目的确定补充维生素D和钙对超重多囊卵巢综合征(PCOS)患者的糖代谢和脂代谢影响。方法对92例临床诊断为超重的PCOS患者进行随机双盲安慰剂对照的临床试验。参与者被随机分为4组:1联合给予钙剂+维生素D组(23例);2单纯给予钙剂组(23例);3单纯给予维生素D组(23例);4安慰剂组。药物干预8周,分别检测空腹血标本在治疗前和治疗后的糖代谢和血脂浓度。结果维生素D+钙组中血清钙浓度(P=0.01),维生素D含量(P=0.01)和极低密度脂蛋白胆固醇含量(P=0.002)明显高于其他组;血清胰岛素水平明显降低。总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇在4组间差异无统计学意义。结论代谢失调的肥胖PCOS患者补充维生素D和钙剂可降低患者的血脂、糖代谢异常的发生。
- 冯辉李保强
- 关键词：多囊卵巢综合征超重代谢异常
