国家自然科学基金(81171953)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人永生化表皮细胞HaCaT电转染条件的优化被引量：4
- 2014年
- 目的比较不同电转染条件下,人永生化表皮细胞HaCaT的转染效率,探讨影响HaCaT电转染率和存活率的主要因素,筛选出HaCaT细胞最佳的电转染条件。方法应用电穿孔仪,设定不同的电压(180、360、540、720V)、脉冲时间(40、60、80、100、120μs)、脉冲周期(1、2、3、4、5次)和温度(室温和4℃)等条件,将质粒(pGPU6/GFP/nev)电转染至HaCaT细胞。电转染24h后,荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数,并随机取3个视野算平均值,计算电转染率;MTT法检测电转染后细胞的存活率。结果当HaCaT细胞浓度为1.5×106/mL,pGPU6/GFP/nev质粒浓度为2.0μg/mL,HaCaT细胞的最佳电转染条件为540V/60μs/Pulse1/RT,此时细胞生长状态最佳,电转染率可达到33.23%,细胞存活率为61.22%。结论本实验优化了HaCaT细胞电转染的最佳条件,提高了HaCaT细胞电转染效率,为后续基因功能的研究奠定了基础。
- 徐珊杜冲马艳民谢宏俊高杨石琦王新阳贺大林郭鹏
- 关键词：HACAT电转染
- 酰基缩肽1经SHH通路下调Gli和Bcl-2表达诱导肾癌细胞凋亡被引量：3
- 2014年
- 目的探讨酰基缩肽1(ADEP1)对肾癌细胞凋亡及SHH信号通路相关蛋白Gli-1和Bcl-2表达的影响。方法 50μmol/L ADEP1处理肾癌ACHN细胞和769-P细胞48 h,采用光学显微镜观察细胞凋亡的细胞形态学和细胞核形态变化,MTT法检测细胞增殖,实时定量PCR(qRT-PCR)检测SHH信号通路SHH和Gli-1 mRNA的表达,Western blot法检测Gli-1和Bcl-2蛋白的表达。结果 ADEP1可诱导肾癌细胞发生凋亡,降低SHH和Gli-1 mRNA表达,以及Gli-1和Bcl-2蛋白的表达。结论ADEP1可通过抑制SHH信号通路相关蛋白表达,诱导肾癌细胞发生凋亡。
- 徐珊杜冲马振坤高杨石琦王新阳张海龙贺大林郭鹏
- 关键词：肾癌细胞凋亡SHHBCL-2
