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国家高技术研究发展计划(2006AA022127)
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张浩明
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miR-195重组腺病毒表达载体构建及在细胞中的表达
2008年
目的:利用AdEasy系统构建miR-195的腺病毒表达载体,为研究miR-195的功能提供条件。方法:将miRNA-195前体序列从已构建的pcDNA-miR-195载体中克隆进穿梭载体pAdTrack-CMV,通过与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中高效同源重组,获得完整的重组腺病毒质粒。利用HEK293细胞包装并扩增重组腺病毒Ad-195。Ad-195感染肺癌细胞A549后,利用miRNA的定量RT-PCR技术检测Ad-195在细胞中表达miR-195情况。随后荧光素酶报告基因实验证明,Ad-195表达的miR-195能够作用于BCL2基因上预测的miR-195靶位点。结果:实时定量PCR检测显示,Ad-195感染肺癌细胞A549后,miR-195表达水平有显著的上调。结论:miR-195的腺病毒表达载体构建成功,能够用于在细胞内过表达具有生物学功能的miR-195。
张浩明
付汉江
铁轶
朱捷
邢瑞云
汪成富
郑晓飞
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微RNA
腺病毒科
质粒
A549
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