国家自然科学基金(30471534)
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
- 相关作者：黄文祥吴利先王国富孙小平罗涛更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院大理学院汕头大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 屎肠球菌类毒力基因hyl的致病性研究被引量：3
- 2009年
- 采用菌落杂交法检测364株不同脉冲场电泳(PFGE)型的屎肠球菌中透明质酸酶(hyl)基因的分布。用自杀质粒pTX4577通过体内同源重组,筛选获得hyl基因的突变株,体外研究hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。采用小鼠腹膜炎模型体内研究hyl基因突变株的毒力下降情况。结果显示,在临床分离菌株中hyl基因阳性率为32.76%,明显高于非临床分离菌株(5.30%)。经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、PFGE和Southern印迹进行鉴定获得hyl基因突变株,命名为*hyl。突变株在体外的生长能力低于野生株。小鼠腹膜炎模型中,在相同细菌感染浓度(3.7×109cfu)下,野生株TX2466组小鼠的存活率为0,而*hyl组小鼠的存活率为50%,差异有显著性。hyl基因主要出现于临床感染的屎肠球菌中,在屎肠球菌致病中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。
- 吴利先黄文祥王国富孙小平
- 关键词：屎肠球菌毒力基因透明质酸酶
- 屎肠球菌hyl基因突变株的构建
- 2008年
- 目的:构建屎肠球菌类透明质酸酶(hyaluronidase,hyl)基因突变株,研究hyl基因的功能。方法:用pETX4577质粒构建屎肠球菌hyl基因重组自杀质粒,通过体内同源重组,筛选获得hyl基因的突变株,体外研究hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。结果:经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、脉冲场电泳和southern blot进行鉴定获得基因突变株*hyl。突变株在体外的生长能力低于野生株。结论:hyl基因突变株构建成功,hyl基因在生长中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。
- 吴利先王国富黄文祥
- 关键词：屎肠球菌突变株
- 屎肠球菌类毒力基因hyl功能的动物实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的构建屎肠球菌透明质酸酶基因(hyaluronidase,hyl)突变株(*hyl),通过动物实验来研究hyl基因的功能。方法通过小鼠腹膜炎模型和兔心内膜炎模型来评价屎肠球菌hyl基因突变株(*hyl)的毒力下降情况。结果突变株在小鼠腹膜炎模型中的半数致死量(LD50)提高了7倍,存活率也明显高于野生株,引起的兔心内膜炎的病理改变也较野生株轻微。结论hyl基因在屎肠球菌致病中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。
- 吴利先王国富黄文祥
- 关键词：屎肠球菌
- 屎肠球菌类透明质酸酶基因突变株的构建及功能研究被引量：3
- 2007年
- 目的构建屎肠球菌类透明质酸酶基因（hyl）突变株，研究hyl基因的功能。方法用自杀质粒pTx4577通过体内同源重组，筛选获得hyl基因的突变株，研究体外hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。通过小鼠腹膜炎和兔心内膜炎模型研究体内突变株的毒力情况。结果经同源重组，利用卡那霉素抗性筛选，PCR、脉冲场电泳和Southern印迹进行鉴定获得hyl基因突变株＋hyl，突变株在体外的生长能力低于野生株。小鼠腹膜炎模型中，在相同细菌感染浓度（3．7×10^9CFU／m1）下，野生株TX2466组小鼠在100h内的存活率为0，而＊hyl组小鼠的存活率为50％，差异有统计学意义（P〈0．01）。兔心内膜炎模型中，TX2466组主动脉瓣和壁性赘生物的菌落计数分别为（3．04±0．63）×10^6CFU／g和（6．87±0．58）×10^6CFU／g，而＊hyl组则分别为（0．21±0．06）×10^6CFU／g和（0．66±0．05）×10^6CFU／g，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论hyl基因突变株构建成功，hyl基因在屎肠球菌致病中起着重要的作用，可能是屎肠球菌的毒力因子之一。
- 吴利先黄文祥罗涛孙小平
- 关键词：肠球菌透明质酸葡糖胺酶突变动物
- esp和hyl基因在不同来源屎肠球菌菌株中的分布及与万古霉素耐药性的相关性研究被引量：6
- 2007年
- 目的检测屎肠球菌（Enterococcus faecium，Efm）可能的毒力基因esp和hyl在不同来源的临床分离屎肠球菌中的分布，探讨这两个基因与屎肠球菌致病性关系，以及万古霉素耐药性是否与其致病性有关。方法采用菌落杂交法检测364株不同PFGE型的屎肠球菌中esp、hyl、vanA和vanB基因的分布，同时采用NCCLS的微量稀释法测定这些细菌对万古霉素和替考拉林的MIC。结果临床分离菌株中esp（Efm）和hyl（Efm）的阳性率（59．5％和32．8％）明显高于非临床分离菌株（14．4％和5．3％）；非临床分离屎肠球菌中esp和hyl阳性的菌株，除了来自屎肠球菌感染患者粪便之外，其余绝大多数均为阴性。临床分离菌株中耐万古霉素菌株（VRE）esp的阳性率（64．8％）明显高于万古霉素敏感菌株（VSE，42．9％），且以vanA最为明显（72．7％），hyl基因在临床分离菌株中的分布与万古霉素耐药性无关。绝大多数hyl基因阳性菌株（94％）esp亦呈阳性。结论esp和hyl基因主要出现于临床感染的屎肠球菌，可能与其致病性有关。esp基因与万古霉素耐药性密切相关；hyl基因则仅与vanA型耐药有相关性。
- 黄文祥伍群
- 关键词：毒力基因屎肠球菌耐药性
- 屎肠球菌透明质酸酶全长基因的克隆表达和免疫原性
- 2007年
- 目的构建屎肠球菌透明质酸酶(hyaluronidase,hy1)基因重组表达质粒,在大肠埃希菌中表达获得重组蛋白.探讨Hy1蛋白经口服免疫小鼠后,机体产生的免疫应答。方法PCR扩增hy1基因片段,克隆至pQE-30质粒上,构建重组质粒pQE-hy1,转化E.coli DH5α,经异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白Hy1;Western印迹分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后,Hy1和屎肠球菌全菌蛋白TX0016分别给小鼠灌胃进行免疫,ELISA法检测小鼠血清IgG、IgA、小肠黏液sIgA和粪便sIgA。用TX0016进行腹腔攻击已免疫的小鼠,观察其免疫保护性。结果经测序hy1基因全长1662bp,为编码553个氨基酸残基的多肽。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析相对分子质量约为60000。可溶性表达占全菌的38%以上,经亲和层析后可获得纯度为92%以上的重组蛋白。Western印迹证实了其免疫反应性。灌胃免疫小鼠后,ELISA法榆测结果Hy1组血清IgA、IgG、粪sIgA、肠黏液sIgA分别为0.365±0.048、0.431±0.064、0.743±0.056和1.112±0.113.对照组则分别为0.051±0.013、0.098±0.019、0.102±0.032和0.187±0.051,差异有统计学意义(P<0.01)。用半数致死量(LD_(50))的细菌黾攻击后,Hy1免疫组小鼠的存活率为70%,而对照组为50%。结论融合蛋白Hy1经口服免疫可有效诱导黏膜免疫应答,产生高水平的sIgA,发挥局部黏膜免疫作用。
- 吴利先黄文祥罗涛焦晓阳
- 关键词：肠球菌透明质酸葡糖胺酶质粒
