国家重点实验室开放基金(SKLZZ200907)
- 作品数：12 被引量：79H指数：5
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- 三七总皂苷抑制Hela细胞增殖的实验研究被引量：12
- 2012年
- 目的:研究三七总皂苷(PNS)抑制宫颈癌Hela细胞增殖的可能机制。方法:MTT法检测不同浓度PNS作用于Hela细胞24、48和72hHela细胞增殖率;检测PNS作用于Hela细胞24h荧光素酶报告基因(LUC)的变化;蛋白质印迹法检测200μg/mL PNS作用于Hela细胞4E-BP1、S6K1、mTOR及其磷酸化水平变化;ELISA法检测PNS作用于Hela细胞24hVEGF的变化。结果:PNS可以明显抑制Hela细胞生长,随时间延长及PNS剂量增加抑制率明显增高;LUC相对光单位值(RLU值)明显低于对照组,其S6K1、4E-BP1、mTOR蛋白表达及其磷酸化水平均明显降低,200μg/mL PNS作用于Hela细胞24h后其VEGF表达明显降低,差异均有统计学意义,P值均<0.01。结论:PNS能抑制Hela细胞增殖,其机制可能是PNS阻断mTOR信号通路,降低mRNA翻译效率,抑制蛋白质翻译起始复合物形成,从而抑制Hela细胞增殖。
- 邹存华付婷婷鲁强赵淑萍徐祥
- 关键词：三七总皂苷HELA细胞信号通路
- 卵巢癌细胞及组织中P38MAPK信号通路调控uPA蛋白的表达及临床意义被引量：5
- 2015年
- 目的探讨P38MAPK信号通路与u PA在卵巢癌细胞及组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学法检测u PA、P38MAPK、ERK、AKT蛋白在49例卵巢癌组织中的表达,Western blot检测HO8910及HO-8910PM细胞系中u PA、P38MAPK蛋白的表达,特异性抑制剂SB203580阻断P38MAPK信号通路后u PA蛋白表达水平的变化。结果 u PA、P38MAPK、ERK、AKT蛋白在卵巢癌组织中表达阳性率分别为61.22%、57.14%、53.06%、55.10%。u PA与p38MAPK蛋白表达呈正相关(r=0.8645,P=0.001),且与卵巢癌组织的临床病理分期、分化、转移程度有关(P均<0.05),而与患者的年龄、组织学类型无明显相关(P>0.05)。ERK、AKT蛋白表达与卵巢癌淋巴结转移、大网膜转移有关(P均<0.05),而与患者的年龄、组织类型、病理分期无明显关系(P>0.05)。HO-8910PM细胞系中u PA蛋白的表达水平明显高于HO8910,SB203580阻断P38MAPK信号通路后可降低u PA蛋白的表达,且随着SB203580浓度升高,u PA蛋白表达逐渐降低。P38MAPK及u PA蛋白的表达与卵巢癌的预后显著相关(r=3.897,11.044,P=0.048,0.001)。结论卵巢癌组织中P38MAPK信号通路处于激活状态;该通路的激活可上调u PA的表达,促进卵巢癌的恶性进展;P38MAPK信号通路和u PA可能在卵巢癌侵袭和转移的过程中发挥重要作用。P38MAPK和u PA蛋白有望成为卵巢癌预后评估的重要指标之一。
- 盛梅张海燕宋冬冬邹存华
- 关键词：P38MAPK信号通路
- HDAC2磷酸化区域突变体的构建及其对小鼠成纤维细胞增殖的影响
- 2015年
- 目的应用片段缺失突变技术鉴定HDAC2自身磷酸化对其Sumo-E3连接酶活性及蛋白质翻译的影响。方法以前期获得的鼠源性HDAC2Sumo-E3连接酶结构域基因片段为模板,设计片段缺失突变引物,经长片段重叠延伸PCR技术扩增获得片段缺失突变基因片段,后于Top10大肠杆菌中自然连接扩增获得pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3连接酶磷酸化结构域缺失突变的真核表达载体。然后将载体转染于L929成纤维细胞瞬时过表达突变基因,再经翻译反应性荧光素酶报告基因实验和Western-blot鉴定HDAC2自身磷酸化修饰对Sumo-E3连接酶介导的报告基因和靶蛋白质表达的影响。最后通过MTT实验检测HDAC2自身磷酸化修饰对其Sumo-E3连接酶介导的L929细胞增殖的影响。结果成功构建获得磷酸化修饰完全缺失的HDAC2片段缺失突变体pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3(DEL 394-424AA)。LUC报告基因检测结果显示,DEL 394-424AA片段缺失突变体促进LUC翻译是对照组的4.24倍,且能显著促进靶蛋白ODC和c-Myc的表达,以及L929小鼠成纤维细胞的增殖效应。结论 HDAC2自身磷酸化修饰对HDAC2Sumo-E3连接酶活性及其调节的蛋白质翻译和细胞增殖作用起负性调节作用。
- 肖勇黄宏郭韡邢伟李向云袁培淞徐祥
- 关键词：磷酸化修饰成纤维细胞
- P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中表达的相关性被引量：7
- 2015年
- 背景与目的:P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路参与多种肿瘤的发生、发展和转移过程,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)在肿瘤浸润和转移中发挥着重要作用。本实验研究卵巢癌组织中P38MAPK、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine threonine kinase,AKT)及uPA的表达与临床病理特征的关系,并分析上述蛋白与u PA表达的相关性,探讨P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测49例卵巢癌组织中u PA、P38MAPK、ERK和AKT蛋白的表达,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测不同卵巢癌细胞系HO8910、HO-8910PM、SKOV3和CAOV3中uPA和P38MAPK蛋白的表达,使用特异性抑制剂SB203580阻断P38MAPK信号通路后检测u PA蛋白表达水平的变化。结果:uPA、P38MAPK、ERK和AKT蛋白在卵巢癌组织中的表达阳性率分别为61.22%、57.14%、53.06%和55.10%。uPA蛋白的表达与P38MAPK呈正相关(r=0.865,P=0.001),且与卵巢癌组织的临床病理分期(P=0.029)、分化(P=0.03)和转移程度(P淋巴=0.022,P大网膜=0.012)有关,而与患者的年龄(P=0.754)及组织学类型(P=0.652)无关。ERK、AKT蛋白的表达与卵巢癌淋巴结转移(PERK=0.011,PAKT=0.022)和大网膜转移(PERK=0.006,PAKT=0.000)有关,而与患者的年龄(PERK=0.000,PAKT=0.022)、组织类型(PERK=0.771,PAKT=0.245)及病理分期(PERK=1.000,PAKT=0.254)无关。卵巢癌细胞系HO-8910PM中uPA蛋白的表达水平明显高于HO8910、SKOV3和CAOV3细胞系,使用SB203580阻断P38MAPK信号通路后可降低uPA蛋白的表达,且随着SB203580浓度升高u PA蛋白表达水平逐渐降低。卵巢癌中P38MAPK及u PA蛋白的表达与卵巢癌的预后显著相关(Log-rank=3.897和11.044,P=0.048和0.001)。结论:卵巢癌组织中P38MAPK信号通路处于激活状态;P38MAPK信号通路的激活可上�
- 邹存华王宏宋冬冬南平盛梅
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活剂细胞外信号调节激酶
- P38MAPK信号通路对卵巢癌中尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨卵巢癌细胞及组织中分子量为38 k D的促分裂素原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路对尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂(u PA)的影响。方法应用免疫组化SP法检测49例卵巢癌组织中u PA、P38MAPK、细胞外信号调节激酶(ERK)、蛋白激酶B(AKT)蛋白阳性表达率。Western blotting法检测卵巢癌细胞系HO-8910、HO-8910PM中u PA、P38M APK的表达,观察使用SB203580、U0126、M K-2206分别阻断P38M APK、ERK、AKT信号通路后u PA的变化。结果 u PA、P38MAPK、ERK、AKT在卵巢癌中阳性率分别为61.22%、57.14%、53.06%、55.10%。u PA与卵巢癌病理分期、分化转移有关(P<0.05),且与P38M APK呈正相关(P=0.01),与ERK、AKT表达无关(P>0.05)。ERK、AKT与卵巢癌淋巴结转移、大网膜转移有关(P均<0.05)。HO-8910PM细胞系中u PAt和P38M APK明显高于HO-8910;使用SB203580后u PA表达降低,而使用U0126、M K-2206后u PA无变化。P38M APK、u PA与卵巢癌患者术后生存率呈负相关(Log-rank=3.90,11.04,P=0.048,0)。结论卵巢癌中P38M APK信号通路激活并上调u PA的表达,ERK、AKT信号通路不参与调节u PA表达。P38M APK与u PA在卵巢癌侵袭、转移及评估预后过程中发挥重要作用。
- 张春霞邹存华宋冬冬余江
- 关键词：卵巢肿瘤细胞外调节蛋白激酶蛋白激酶BP38MAPK信号通路
- 川芎嗪通过Akt信号通路影响前列腺癌PC3细胞的增殖和凋亡被引量：25
- 2013年
- 目的研究盐酸川芎嗪对前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mg/mL盐酸川芎嗪处理雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞,MTT法检测各组细胞的增殖能力,荧光显微镜观察细胞核形态学改变,Western blot检测Akt以及下游相关蛋白mTOR、p70S6蛋白及蛋白磷酸化的表达,以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果盐酸川芎嗪能有效抑制前列腺癌PC3细胞增殖,且显示浓度时间依赖性(P<0.05)。1.5、2.5 mg/mL的盐酸川芎嗪能够降低Akt和p-Akt的表达,进而下调mTOR、p-mTOR、p70S6及p-p70S6的表达(P<0.05);同时下调Bcl-2、上调Bax蛋白的表达(P<0.05)。结论 Akt及其下游信号通路介导了盐酸川芎嗪抑制前列腺癌PC3细胞增殖及促凋亡作用。
- 韩娇艳朱方强徐祥黄宏黄文秋崔文慧代卉蒋建新王莎莉
- 关键词：川芎嗪前列腺肿瘤AKT
- mTOR及其下游信号通路在骨髓间充质干细胞氧化应激损伤中的变化及作用被引量：11
- 2013年
- 目的研究小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow stem cells,mBMSCs)在氧化应激损伤中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliatargetofrapamycin,mTOR)及其下游信号通路的变化及其作用。方法从30只雄性健康昆明小鼠的股骨中分离、培养和扩增BMSCs。H2O2刺激mBMSCs建立氧化应激损伤模型。实验分为对照组(不予H2O2处理)、不同浓度H2O2(100、200、300、400、500、800、1 000μmol/L处理mBMSCs)损伤组(n=5)。采用MTT法检测24、48、72 h各组的细胞活力;倒置显微镜观察BMSCs的形态学改变;采用细胞核Hoechst33342染色观察凋亡细胞核形态;Western blot检测各组Bcl-2、Bax、mTOR及其下游蛋白以及蛋白的磷酸化的表达。结果 100～1 000μmol/L浓度的H2O2作用mBMSCs24 h后,其形态学和病理学发生浓度依赖性的改变。H2O2浓度在100～300μmol/L时,随着H2O2浓度的增高,mBMSCs的mTOR、p70S6K、S6的表达水平有增高的趋势,磷酸化水平明显增高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增高(P<0.01),凋亡蛋白Bax表达不明显(P>0.05)。H2O2浓度在400μmol/L以上时,随着H2O2浓度的增高,p-mTOR、p-p70S6K、p-S6、BCL-2的表达水平降低(P<0.05,P<0.01),而mTOR、p70S6K、S6蛋白变化不明显,同时Bax的表达水平明显增高(P<0.01)。结论一定强度的氧化应激可以降低mBMSCs存活率,促进细胞凋亡,其机理可能与抑制mTOR及其下游信号通路的活性和抗凋亡蛋白Bcl-2表达,促进凋亡蛋白Bax表达有关。
- 黄文秋黄宏徐祥韩娇艳代卉崔文慧蒋建新王莎莉
- 关键词：氧化应激骨髓间充质干细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白细胞凋亡
- 槲皮素活化mTOR信号通路对L929成纤维细胞增殖的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨槲皮素(Quercetin,QU)对L929成纤维细胞增殖的影响及其分子机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测QU对L929细胞增殖的影响,荧光素酶报告基因法检测QU对蛋白质翻译调控的影响、Western blot法检测QU对mTOR介导的蛋白质翻译调控通路关键基因mTOR、P-4E-BP1(翻译起始因子4E的结合蛋白)的磷酸化,细胞周期调控蛋白cyclin D1的表达及mTOR通路阻断实验。结果:MTT法检测结果显示在36 h干预点,浓度为1×10-4、1.5×10-42、×10-4、2.5×10-4 mol/L时,QU可明显促进L929细胞增殖(P<0.01);荧光素酶报告基因检测系统结果显示:在36 h干预点,2.5×10-4 mol/L QU与对照组相比,RLU(相对光单位)值明显增加(P<0.001);Western blot法检测结果显示,mTORc、yclin、D1和P-4E-BP1的表达明显增加。100ng/ml的雷帕霉素作用36 h后,与对照组相比,QU组P-4E-BP1、mTORc、yclin D1蛋白表达明显增加,雷帕霉素组明显减少,雷帕霉素+QU组蛋白表达明显增加,但较QU组有所减少。结论:QU可通过诱导mTOR信号通路活化,进而促进细胞周期调控蛋白cyclin D1的表达,诱导L929细胞的增殖。
- 董海良张颖黄谢梅黄宏郭韡邢伟郝进徐祥
- 关键词：槲皮素MTOR信号通路细胞增殖
- 人SUMO-2 shRNA干扰表达载体构建及其对细胞增殖的影响
- 2013年
- 目的构建干扰人SUMO-2表达的shRNA重组质粒载体,并筛选下调人SUMO-2表达的稳定细胞株。方法设计并合成针对人SUMO-2的shRNA寡核苷酸,并将其克隆至pLKO.1质粒载体上,转染HCT116细胞后经嘌呤霉素筛选获稳定表达细胞株,并通过免疫印迹鉴定SUMO-2的表达。结果成功构建干扰人SUMO-2表达的pLKO.1质粒载体,可在HCT116细胞中稳定表达,且能有效抑制SUMO-2蛋白质的表达。功能研究初步证明干扰SUMO-2表达可抑制细胞增殖并使处于细胞周期G1期的细胞比例上升。结论获得了干扰人SUMO-2表达的pLKO.1-shRNA质粒载体,以及下调SUMO-2表达的HCT116稳定细胞株。
- 李向云黄宏邢伟郭韡何静孙志亚徐祥
- 关键词：SHRNA干扰下调细胞增殖细胞周期
- 宫颈腺癌组织HPV16/18-E7与Cyclin D1/pRb及ER表达临床意义分析被引量：7
- 2014年
- 目的:探讨宫颈腺癌组织中HPV16/18-E7、Cyclin D1/pRb及ER的表达及临床意义。方法:收集2004-01-01-2012-01-01胜利油田中心医院病理科宫颈腺癌患者40例。应用免疫组化法检测40例宫颈腺癌组织中HPV16/18-E7、Cyclin D1及ER的表达,蛋白质印迹法检测HPV16/18-E7和Cyclin D1均阳性表达的宫颈腺癌组织中Cyclin D1及pRb的表达量。结果:免疫组化结果显示,宫颈腺癌组织中Cyclin D1阳性表达率为55.0%,HPV16/18-E7为85.0%,ER为72.5%。HPV16/18-E7蛋白及ER的表达与宫颈腺癌患者的年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分级及淋巴结转移等临床病理特征无关,P>0.05。Cyclin D1的高表达与宫颈腺癌的临床分期有关,χ2=6.234,P=0.013;与淋巴结是否转移有关,χ2=9.038,P=0.003;与患者年龄、肿瘤大小和组织学分级无关,P>0.05。蛋白质印迹法检测显示,HPV16/18-E7和Cyclin D1均阳性表达的21例宫颈腺癌组织中Cyclin D1出现不同程度的高表达,对照组7例组织中Cyclin D1蛋白低表达或无表达,差异有统计学意义,PCyclin D1=0.037;21例宫颈腺癌组织中pRb蛋白多为低表达或不表达,对照组pRb蛋白的表达无明显变化,PpRb=0.002。宫颈腺癌组织中Cyclin D1的表达与HPV16/18-E7蛋白呈正相关,χ2=17.56,r=0.902 4,P=0.042;ER与HPV16/18-E7蛋白表达呈正相关,χ2=5.431,r=0.345 8,P=0.02;Cyclin D1的表达与ER受体呈正相关,χ2=4.713,r=0.317 1,P=0.03。结论:Cyclin D1/pRb信号通路的活化可能是HPV16/18感染宫颈腺癌的发生机制,HPV16/18阳性宫颈腺癌组织中ER高表达,提示雌激素在高危型HPV16/18致癌过程中可能发挥作用。
- 于云英张建海邹存华宋冬冬赵淑萍盛梅胡营营
- 关键词：腺癌HPVL6
