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国家自然科学基金(81171973)
作品数:
5
被引量:9
H指数:2
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金艾顺
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芦凤亮
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韩晓建
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作者
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金艾顺
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全人源抗TRAIL-R1/-R2单克隆抗体肿瘤治疗的研究进展
被引量:2
2014年
目前全人源TRAIL受体(TRAIL-Rs)的单克隆抗体(单抗)对肿瘤靶向治疗已进入临床Ⅰ~Ⅳ期研究。TRAIL-Rs单抗可分别与死亡受体TRAIL-R1和TRAIL-R2结合,形成死亡诱导信号复合体(DISC),诱导肿瘤细胞凋亡,成为抗肿瘤抗体药物研发的热点之一。全人源TRAIL-Rs单抗与放疗、化疗药物或其它制剂以及免疫治疗方法联合应用在肿瘤治疗中取得了显著的效果,为临床抗肿瘤治疗提供了新方案。
宗卫娇
芦凤亮
刘晔
金艾顺
关键词:
TRAIL
TRAIL受体
肿瘤治疗
全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体单克隆抗体蛋白高效表达体系的建立及其功能性分析
被引量:2
2015年
目的建立高效表达全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体(TRAIL)-R1单克隆抗体(TR1-404)蛋白体系,并评价TR1-404抗体蛋白功能特性。方法构建pcDNA3.4载体抗体质粒,转染Expi293F^TM细胞,表达抗体蛋白。收集细胞培养上清,使用ProteinA/G纯化抗体蛋白。利用双抗体夹心和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体蛋白浓度及特异性。流式细胞分析检测TRl_404与Hela细胞和HCT116细胞表面TRAIL-R1的结合能力。MTT法检测在不同时间点TR1-404、TRAIL及二者联合作用对Hela细胞和HCT116细胞生存和增殖的影响。Annexin V/PI双染色检测Hela细胞和HCT116细胞凋亡。结果成功构建pcDNA3.4载体抗体质粒和建立Expi293F^TM细胞蛋白高效表达系统。精制的TR1-404抗体既与重组TRAIL-R1抗原特异性结合,也能与Hela和HCT116细胞表面的TRAIL-R1结合。发现TR1-404联合TRAIL作用于Hela细胞,肿瘤细胞凋亡效果显著提高。而在HCT116细胞中,TRAIL与TR1-404的联合作用未见显著提高。结论成功建立抗体蛋白高效表达系统。TR1-404抗体特异性与TRAIL-R1抗原结合。TR1-404抗体提高TRAIL诱导的Hela细胞凋亡作用。本研究为TRAIL—R1靶向的抗肿瘤治疗研究提供新方法。
石佳宁
韩晓健
吕福莲
毕冬梅
金艾顺
关键词:
肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体
单克隆抗体
凋亡
全人源抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-R1单克隆抗体诱导肿瘤细胞凋亡的体外实验研究
被引量:1
2013年
目的探讨本研究组制备的全人源抗人TRAIL—R1单克隆抗体TRAIL—R1-422(TR1-422)诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法利用竞争ELISA法鉴定TR1-422与TRAIL-R1结合特异性;流式细胞分析检测TRl-422与Jurkat细胞表面TRAIL—R1的结合能力;细胞计数法分析TR1-422在不同时间点对Jurkat细胞生存和细胞增殖的影响;镜下观察TR1-422对肿瘤细胞的作用;AnnexinV/PI双染色评价TRl-422诱导Jurkat细胞凋亡的作用。结果TR1-422抗体与重组TRAIL—R1抗原特异性结合;与Jurkat细胞表面TRAIL—R1结合,与无相关IgG抗体组比较荧光强度变化72.3%。1μg/mlTR1-422与10μg/ml抗人IgG交联作用于Jurkat细胞在不同时间点(24h和48h)的生存率分别为72.57%和64.08%,对照组分别为96.14%和95.69%,差异有统计学意义(t=2.534,P〈0.05;t=3.147,P〈0.05);镜下观察,72h后Jurkat细胞出现大量死亡;24h时AnnexinV阳性率达30%,而TR1-422单独作用为12.8%(t=2.355,P〈0.05)。结论本研究证实制备的全人源抗人TRAIL-R1单抗与抗体交联作用可促进肿瘤细胞凋亡,为抗肿瘤治疗提供基础数据。
杨复娇
刘晔
芦凤亮
宗卫娇
梁媛
高翔
金艾顺
关键词:
单克隆抗体
细胞凋亡
肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体及其I型受体单克隆抗体联合体内外抗肿瘤作用
被引量:3
2018年
目的建立高效表达肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(tumor necrosis factor related apoptosis—inducing ligand,TRAIL)单克隆抗体和TRAIL蛋白的方法,并验证抗体TR1-419与TRAIL的体内外联合抗肿瘤作用。方法利用Expi293蛋白表达系统表达抗体,采用ProteinG进行抗体蛋白的纯化。利用原核表达系统表达SUMO-Strep—TRAIL蛋白并通过N^2+“柱及Strep两步亲和层析获得高纯度的TRAIL蛋白。流式细胞术检测抗体与肿瘤细胞表面TRAIL—R1的特异性结合能力。采用MTT法验证制备的TRAIL联合TR1-419单抗蛋白对肿瘤细胞的杀伤活性。通过Western blot初步检测TRAIL联合TR1-419抗体体外杀伤肿瘤的机制。建立裸鼠肿瘤模型,验证TRAIL联合TR1-419体内抗肿瘤作用。结果成功建立了Expi293抗体蛋白高效表达系统及TRAIL蛋白原核表达系统。TR1-419单抗特异性结合表达TRAIL—R1的HeLa细胞;TRAIL显示抗肿瘤作用。TRAIL联合TR1-419作用于HeLa细胞,明显提高TRAIL杀伤肿瘤细胞的活性,同时激活Caspase8,启动凋亡信号转导通路。体内实验证明了TR1-419可增强TRAIL的抑制肿瘤生长作用。结论通过建立高效表达方法制备TR1-419抗体及TRAIL蛋白,并验证TR1-419可通过活化Caspase-8提高TRAIL在体内外抗肿瘤作用,为抗肿瘤免疫治疗提供新策略。
黄晶晶
孙欣
李亚英
韩晓建
金艾顺
关键词:
单克隆抗体
细胞凋亡
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在多种疾病中的生物学作用
被引量:2
2014年
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Apo2L/TRAIL)是肿瘤坏死因子家族的一员,可以诱导表达特异性死亡受体TRAIL-R1 (DR4)或TRAIL-R2 (DR5)的细胞凋亡.TRAIL可诱导多种肿瘤细胞凋亡,对正常细胞无杀伤性,因此将其作为抗肿瘤靶向治疗候选药物之一,备受关注.近期研究发现,TRAIL既通过其受体介导细胞凋亡信号通路,又可传导非凋亡的信号通路,在自身免疫病和感染性疾病中发挥重要生物学作用.因而简单阐明TRAIL在人类多种疾病中生物学作用的研究进展,对今后TRAIL研究方向和治疗策略的选择具有指导意义.
芦凤亮
吕福莲
刘晔
金艾顺
关键词:
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
肿瘤
自身免疫病
感染性疾病
生物学作用
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