河北省自然科学基金(C2004000559)
- 作品数：10 被引量：46H指数：4
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- 相关机构：河北医科大学第二医院天津医科大学总医院河北大学更多>>
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- 骨髓基质干细胞趋瘤性及神经分化潜能
- 2007年
- 目的:观察骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)向脑胶质瘤的趋向性及在荷瘤大鼠脑内的分化,初步探讨其机制。方法:培养BMSCs后,在体外应用显微镜直接观察及Transwell试验检测BMSCs向胶质瘤细胞及血管内皮细胞生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、血小板源性生长因子(PDGF)等的迁移特性,免疫荧光方法检测其在颅内向脑胶质瘤迁移的情况。在体外诱导条件下,观察BMSCs的分化;BMSCs移植到脑荷瘤大鼠脑内15 d后,免疫荧光方法检测其在体内的分化。结果:骨髓基质干细胞在体外表现出明显的向胶质瘤细胞及PDGF、EGF的迁移特性,在体内表现了明显的向脑内胶质瘤迁移的特性,并可迁移到肿瘤卫星灶周围。在体外诱导条件下BMSCs可分化为神经前体细胞(8.4%±3.5%)、神经元(53.7%±7.4%)及胶质细胞(22.3%±5.2%);在移植到荷瘤鼠脑内后,也可分化为神经前体细胞(8.3%±3.6%)、神经元(15.7%±4.3%)及胶质细胞(32.5%±7.2%),两者向神经元分化的比例存在差异(P<0.05),向神经前体细胞及胶质细胞的分化比例相似(P>0.05)。结论:骨髓基质干细胞有明显的胶质瘤趋瘤性,其向神经细胞分化的方向可能与其局部微环境有关。
- 焦保华李春晖史彦芳
- 关键词：脑肿瘤神经胶质瘤骨髓祖代细胞免疫荧光测定
- 转染HSV-tk骨髓基质干细胞旁观者效应机制的研究被引量：2
- 2007年
- 目的:研究转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)基因的骨髓基质干细胞(BMSCs)旁观者效应的机制。方法:培养BMSCs,扩增Ad-CMV-tk后转染骨髓基质干细胞(BMSCs/tk);应用Transwell培养板使BMSCs/tk与C6细胞不相互接触,观察旁观者效应;观察0.22μm滤膜过滤后的条件培养液对C6细胞的作用。建立大鼠脑荷瘤模型,移植BMSCs/tk后,测定其血清中IFN-γ的变化;免疫组化观察荷瘤大鼠肿瘤内部淋巴细胞浸润及微血管密度。结果:在混合培养实验中,BMSCs/HSV-tk诱导BM-SCs的凋亡率明显高于对C6的凋亡率,两者差异有统计学意义,q=8.214,P=0.032。应用Transwell培养板培养后,BMSCs/HSV-tk诱导BMSCs凋亡率明显降低。BMSCs/HSV-tk/G-CV培养上清液可明显诱导C6细胞凋亡,但将其用0.22μm的滤膜过滤后,诱导凋亡的作用消失。脑荷瘤大鼠移植BMSCs/HSV-tk后血清IFN-γ浓度明显增高,肿瘤组织内CD4+细胞数、CD8+细胞数明显增加,微血管密度降低。结论:BMSCs/HSV-tk通过诱导BMSCs细胞凋亡后释放的凋亡小体介导旁观者效应,并发挥免疫学调节机制,对C6细胞可产生明显的抑制作用。
- 李春晖焦保华
- 关键词：间质干细胞单纯疱疹病毒属旁观者效应
- 骨髓基质干细胞对脑胶质瘤大鼠的免疫调节作用被引量：1
- 2007年
- 目的研究骨髓基质干细胞(bone marrowstromal stem cells,BMSCs)在体外及脑荷瘤大鼠体内的免疫调节作用。方法培养BMSCs,以抗原致敏的树突状细胞(dendritic cell,DC)作为刺激细胞,将BMSCs与DC及T淋巴细胞混合培养,或应用Transwell将BMSCs与DC及T淋巴细胞以8μm的膜隔开培养,观察BMSCs对体外混合淋巴细胞反应的调节作用。建立大鼠脑胶质瘤模型,将BMSCs植入荷瘤大鼠脑内,观察对荷瘤大鼠的免疫调节作用。结果BMSCs不能刺激T淋巴细胞的增殖,但明显抑制DC对T淋巴细胞的激活作用;用Transwell将BMSCs与DC及T淋巴细胞以8μm的膜隔开,与BMSCs、DC、及T淋巴细胞混合培养相比,结果无统计学差异(P=0.934);在混合淋巴细胞反应早期加入BMSCs可产生明显的抑制效果,在晚期加入BMSCs则抑制效果明显降低(P<0.01)。流式细胞术检测显示混合淋巴细胞反应的T淋巴细胞凋亡不明显。体内检测显示,BMSCs对荷瘤鼠体内的IFN-γ、IL-2、IL-10水平无明显影响,肿瘤内浸润的淋巴细胞与对照组相比无明显减少(P>0.05)。结论BM-SCs可能通过分泌的细胞因子对T淋巴细胞产生一定的抑制作用。
- 李春晖焦保华
- 关键词：骨髓基质干细胞胶质瘤T淋巴细胞混合淋巴细胞反应
- 转染白介素18的骨髓基质干细胞对脑荷瘤大鼠的免疫调节作用被引量：6
- 2008年
- 目的:研究转染白细胞介素18的骨髓基质干细胞移植入胶质瘤荷瘤大鼠体内后的免疫调节作用。方法:培养骨髓基质干细胞,转染白细胞介素18,以未转染的骨髓基质干细胞为对照。ELISA方法检测BMSCs/IL-18培养上清液不同时间点的IL-18含量。建立荷瘤模型,进行BMSCs/IL-18移植,而后ELISA方法检测血清IFN-γ、IL-2、IL-10浓度。将BMSCs/IL-18、C6细胞、荷瘤鼠淋巴细胞共同培养观察体外细胞毒作用。流式细胞术检测荷瘤鼠脾细胞淋巴细胞亚群。TUNEL法检测肿瘤内部细胞凋亡情况,抗CD34染色观察微血管密度。结果:BMSCs/IL-18可长期稳定地分泌IL-18,移植到荷瘤大鼠体内后,其IL-2、IFN-γ血清浓度明显增高,IL-10明显下降。流式细胞术检测显示CD4+、CD8+T淋巴细胞比例均有增高。接受BMSCs/IL-18移植的荷瘤大鼠再次种植C6细胞后,可诱发快速的免疫反应。体外细胞毒试验显示,BMSCs/IL-18可明显激活淋巴细胞裂解C6细胞。TUNEL检测显示,在Group2大鼠中,肿瘤内部每视野凋亡细胞数为15.74±6.23,高于其他各组。微血管密度检测显示,Group2大鼠脑肿瘤微血管密度(6.51±2.71)明显低于Group1(13.52±3.06)、Group3(12.67±2.61)及Controlgroup(14.84±1.47)。结论:BMSCs/IL-18可通过诱导Th1细胞因子,抑制Th2细胞因子,激活细胞毒性T淋巴细胞,产生明显的抗肿瘤效果。
- 李春晖焦保华史彦芳
- 关键词：骨髓基质干细胞白细胞介素18免疫调节干扰素-Γ
- 骨髓基质干细胞移植对大鼠胶质瘤局部微环境的影响被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)移植对脑胶质瘤模型大鼠(荷瘤大鼠)胶质瘤的影响。方法:观察BMSCs培养上清液对C6胶质瘤细胞增殖活性、细胞周期的影响。观察脑内移植BMSCs对胶质瘤核增殖抗原(PCNA)表达阳性率、脑内胶质瘤微血管计数的影响及荷瘤鼠生存期的改变。结果:BMSCs培养上清液对胶质瘤细胞增殖没有明显的影响;BMSCs可抑制肿瘤边缘及卫星灶的肿瘤增殖,对肿瘤内部的细胞增殖没有明显影响。移植BMSCs后肿瘤边缘及卫星灶的微血管计数未见明显改变。移植BMSCs后的荷瘤大鼠脑内胶质瘤水肿有所减轻。结论:BMSCs移植可轻度抑制荷瘤鼠脑内胶质瘤细胞的增殖。
- 李春晖焦保华康春生刘晓智
- 关键词：骨髓基质干细胞大鼠胶质瘤血管密度增殖细胞核抗原
- 单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因转染骨髓基质干细胞治疗大鼠脑胶质瘤被引量：3
- 2007年
- 目的 研究转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶（HSV-tk）基因的骨髓基质干细胞（BMSCs）对大鼠脑胶质瘤的治疗作用。方法 原代培养BMSCs，AdCMV-tk转染BMSCs。逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）检测BMSCs／tk对tk基因的转录。以BrdU标记BMSCs／tk，观察其趋瘤性。四甲基偶氮唑盐（MTr）法检测其对C6细胞的旁观者效应。将BMSCs／tk注入脑胶质瘤大鼠肿瘤对侧脑组织，原位末端标记（TUNEL）法检测脑内肿瘤细胞凋亡，动态MRI监测肿瘤体积的变化，观察荷瘤鼠生存期。结果全骨髓细胞培养法可获得纯化的BMSCs。感染AdCMV-tk 21d后，BMSCs仍有明显的tk基因表达。转染tk基因后的BMSCs仍具有明显的趋瘤性。BMSCs／tk不仅在体外可产生明显的旁观者效应，在荷瘤鼠脑内也显示了明显的诱导肿瘤细胞凋亡的旁观者效应，凋亡阳性率为20．38％±2．57％，与BMSCs组（2．56％±0．52％）和对照组（2．74％±0．38％）相比，差异均有统计学意义（P值分别为0．023和0．025）。BMSCs／tk移植3周时，BMSCs／tk组、BMSCs组和对照组肿瘤体积分别为（8．28±2．64）、（134．51±16．37）和（147．22±31．05）mm^3，BMSCs／tk组远小于BMSCs组（P=0．001）和对照组（P〈0．01），并且部分大鼠脑内肿瘤消失。BMSCs／tk组大鼠生存期为（52．60±13．11）d，与对照组相比明显延长（P=0．01）。结论 HSV-tk转染的BMSCs可能成为脑胶质瘤治疗的有效手段。
- 李春晖焦保华
- 关键词：干细胞单纯疱疹病毒-胸苷激酶胶质瘤基因治疗
- 骨髓基质干细胞培养、鉴定及标记的初步研究被引量：16
- 2006年
- 目的:对骨髓基质干细胞的培养方法、鉴定及标记技术进行初步研究。方法:采用贴壁法培养大鼠骨髓细胞,经反复传代细胞逐渐纯化,以流式细胞术检测细胞表面抗原。以BrdU标记骨髓基质干细胞,将骨髓基质干细胞注入大鼠脑内,2周后取脑作石蜡切片,进行免疫荧光染色。结果:通过贴壁法培养大鼠骨髓细胞可获得较纯化的细胞,并能在体外长期培养,流式细胞术检测显示CD34、CD31、CD45阴性,CD90、CD44、CD71阳性。BrdU可掺入DNA合成期的骨髓基质干细胞。结论:贴壁法可获得高纯度的骨髓基质干细胞,BrdU可作为骨髓基质干细胞体内示踪的理想标记物。
- 李春晖焦保华康春生王广秀刘晓智
- 关键词：骨髓基质干细胞CD分子BRDU
- 转染IL-18的骨髓基质干细胞对大鼠脑胶质瘤的作用被引量：10
- 2007年
- 背景与目的:脑胶质瘤因其广泛的浸润性、免疫逃逸等生物学特性使手术、放疗、化疗等方法疗效不佳。本实验观察具有肿瘤趋向性的骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)转染IL-18后对大鼠脑胶质瘤的作用。方法:贴壁法培养大鼠骨髓细胞获取纯化的BMSCs,采用流式细胞术鉴定。逆转录病毒LXSN/IL-18转染BMSCs,RT-PCR、免疫荧光检测IL-18基因转录及表达情况,MTT、流式细胞术检测转染前后BMSCs细胞部分生物学特性的变化。ELISA检测BMSCs/IL-18培养上清液对大鼠淋巴细胞的激活作用。体内实验中将荷瘤鼠模型分为4组,实验Ⅰ组、实验Ⅱ组、PBS组大鼠中分别注入BMSCs细胞、BMSCs/IL-18细胞和PBS,对照组不作处理,检测BMSCs/IL-18对荷瘤鼠的作用。结果:BMSCs/IL-18可稳定转录及表达IL-18,但转染后细胞增殖速度减慢,其培养上清液可诱导大鼠淋巴细胞IFN-γ分泌量增长约9倍。脑磁共振检测显示各组肿瘤体积为:实验组Ⅰ(18.26±6.84)mm3,实验组Ⅱ(6.37±1.52)mm3,PBS组(22.48±6.02)mm3,对照组(21.06±5.83)mm3。各组大鼠存活期分别为:实验组Ⅰ(25.3±6.4)天,实验组Ⅱ(84.7±16.3)天,PBS组(21.6±4.7)天,对照组(22.5±6.2)天。荷瘤大鼠脑内移植BMSCs/IL-18后,肿瘤组织中淋巴细胞数量增多,每个200倍光镜视野中,CD4+淋巴细胞数为(37.7±3.5)个,CD8+淋巴细胞数为(32.3±4.5)个。结论:BMSCs可稳定表达转染基因,BMSCs/IL-18对大鼠胶质瘤的生长有明显抑制作用。
- 李春晖焦保华
- 关键词：胶质瘤IL-18骨髓基质干细胞干扰素-Γ
- 骨髓间充质干细胞向脑胶质瘤趋向性的初步研究(英文)被引量：10
- 2006年
- 背景 骨髓间充质干细胞（MSCs）是存在于骨髓中的非造血类干细胞，具有自我更新及多向分化潜能。在大鼠脑外伤模型中的迁移能力已得到证实，而其对于脑胶质瘤的趋向性的研究尚处于初期。本实验通过将标记的MSCs移植到大鼠脑胶质瘤模型体内，观察它的迁移情况。方法 采用全骨髓细胞培养法，利用MSCs的贴壁生长及可在体外长期培养的特性，获取纯化的MSCs。采用流式细胞术鉴定其表面抗原及细胞周期。在处于对数生长期的MSCs培养皿中加入BrdUrd（终浓度10μg／mL），培养24～48h后进行移植。采用立体定向技术建立大鼠脑胶质瘤模型，3d后移植标记好的MSCs：在大脑半球组，BrdUrd标记的MSCs被注入大鼠脑胶质瘤模型肿瘤对侧大脑；在颈内动脉组，BrdUrd标记的MSCs被注入大鼠脑胶质瘤模型肿瘤同侧的颈内动脉。分别以BrdUrd标记的333细胞作为对照组。2周后，处死大鼠取脑组织制作病理切片，进行抗BrdUrd免疫组化及免疫荧光染色，观察MSCs的迁移情况。结果 全骨髓培养法获得了纯化的MSCs。移植到脑组织及颈内动脉的BrdUrd标记的MSCs表现出了明显的向脑胶质瘤迁移的特性。在大脑半球组，MSCs主要集中在肿瘤与正常脑组织的交界部位，在瘤内只有少量分布。在颈内动脉组，MSCs主要分布于肿瘤内部，在肿瘤与正常脑组织的交界位置有少量分布。结论 MSCs具有明显的向脑胶质瘤迁移的特性，同时亦可通过血脑屏障，有可能成为胶质瘤基因治疗的理想载体。
- 李春晖焦保华康春生刘晓智
- 关键词：骨髓间充质干细胞胶质瘤细胞迁移
- 替莫唑胺联合温阳通窍法对胶质瘤患者睾酮、MCP-1及临床疗效的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨替莫唑胺联合温阳通窍法对胶质瘤患者睾酮、MCP-1及临床疗效的影响。方法:收集我院胶质瘤患者48例,随机分为实验组与对照组,每组各24例。对照组患者予以常规治疗及替莫唑胺,实验组患者在对照组的基础上服用中药汤剂温阳通窍汤,两组患者均治疗6个疗程,1个疗程7 d。比较治疗前后两组患者睾酮(T)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及临床总有效率。结果:与治疗前比较,治疗后两组患者MCP-1水平均降低(P<0.05),T水平均升高(P<0.05);与对照组相比,实验组患者的MCP-1水平较低(P<0.05),T水平较高(P<0.05),临床总有效率较高(P<0.05)。结论:替莫唑胺联合温阳通窍法能够有效改善胶质瘤的临床症状,推测其机制与替莫唑胺联合温阳通窍法可使胶质瘤患者睾酮及MCP-1水平改善有关。
- 张立民成杰
- 关键词：替莫唑胺胶质瘤睾酮单核细胞趋化蛋白1
