艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2008ZX10002-011)
- 作品数：14 被引量：56H指数：5
- 相关作者：郝友华杨东亮丁红晖陆蒙吉徐春利更多>>
- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属同济医院埃森大学更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 嗜肝DNA病毒感染动物模型研究进展
- 目的动物模型是人们了解病毒复制、病毒感染自然史、病毒持续感染和致病的分子机制,研制有效抗病毒药物和疫苗的不可或缺的工具。嗜肝DNA病毒不仅包括HBV,也包括其它哺乳动物的嗜肝病毒,如土拨鼠肝炎病毒(WHV)、地松鼠肝炎病...
- 杨东亮
- 关键词：病毒感染HBV感染分子机制
- 文献传递
- HBV持续性感染中T细胞功能耗竭的机制研究进展被引量：12
- 2012年
- T细胞功能耗竭是HBV持续性感染的一个重要特征，由T细胞表面表达的抑制性受体、抑制性细胞及细胞因子组成的抑制性微环境在介导特异性T细胞功能耗竭中扮演着重要作用。改善或阻断这些抑制性环境相关因子有可能恢复和提高慢性乙型肝炎（CHB）患者的耗竭的病毒特异性的T细胞功能，并最终清除患者体内的病毒。
- 唐宗生郝友华杨东亮
- 关键词：T淋巴细胞T细胞功能
- 抗乙肝病毒新药Bay41-4109在HBV转基因小鼠中的药效学研究被引量：2
- 2011年
- 目的研究抗乙肝病毒新药Bay41-4109在HBV转基因小鼠体内的药效学作用。方法 SPF级TgM(HBV D1.3)小鼠分为Bay41-4109组[30mg/(kg.d)],拉米夫定组[30mg/(kg.d)]和溶媒组(0.5%羧甲基纤维素钠)3组,每组32只。利用免疫组化分析HBV转基因小鼠肝组织HBcAg变化,定量PCR技术研究HBV转基因小鼠肝组织HBV DNA及血清HBV DNA的变化,并从血清转氨酶及体重指标分析该药物体内作用的安全性。结果给药第50天,Bay41-4109组HBcAg阳性细胞核个数、阳性细胞核平均面积、光密度比值三项指标均明显低于溶媒组(P<0.05);用药第64天(停药2周),各组间上述三项指标均无统计学差异。拉米夫定组各时间点上述指标与溶媒组之间均无明显差异(P>0.05)。但Bay41-4109对肝组织及血清HBV DNA未见明显作用。该药未对HBV转基因小鼠血清转氨酶及体重产生明显影响。结论 Bay41-4109可有效抑制HBV转基因小鼠肝组织HBcAg表达,且效果优于拉米夫定。Bay41-4109是一种安全性较好的抗乙肝新药,其作用机制不同于拉米夫定。
- 李秀梅陈阳述刘光泽黎经纬陈媚娟周军辉孔祥平
- 关键词：抗病毒药
- 四种肝细胞系天然免疫相关分子的表达及HBV对其表达的影响
- 2011年
- 目的探讨四种肝细胞系Huh7、HepG2、HepG2.2.15和L02天然免疫相关分子的表达情况及HBV对其表达的影响。方法提取Huh7、HepG2、HepG2.2.15和L02四种肝细胞及转染后Huh7、HepG2和HepG2.2.15细胞mRNA,逆转录合成cDNA,采用PCR法检测天然免疫相关分子的表达情况。结果四种细胞均能表达TLRs家族的TLR1、TLR3、TLR4、TLR9,NLRs家族的NOD1和RLRs家族的RIG1等天然免疫相关分子;HepG2和Huh7转染HBV可复制性克隆后出现MDA5和A20的表达下调。结论四种肝细胞系均能表达一系列天然免疫相关分子,不同肝细胞系间表达存在一定的差异。HBV瞬时转染和稳定表达能不同程度地影响这些天然免疫相关分子的表达水平。
- 刘敏郝友华丁红晖喻涛吴珺徐春利陆蒙吉杨东亮
- 关键词：肝细胞系乙型肝炎病毒
- 三种常见肝细胞系免疫相关分子的表达被引量：2
- 2010年
- 目的探讨三种常见肝细胞系Huh7、HepG2、HepG2.2.15免疫相关分子的表达。方法提取三种细胞的RNA并逆转录合成cDNA,用PCR方法检测细胞因子及其受体、MHC分子的表达情况。结果三种细胞均能表达Ⅰ型干扰素及干扰素受体、IL-7、IL-15等细胞因子,也能表达HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR及非经典的CD1d、MICB等MHC分子及其相关基因,HepG2、HepG2.2.15表达MICA。三种细胞均不表达IL-4、IL-5、IL-6、IFN-γ等细胞因子。与内参相比,IL-7及IL-15、HLA-A等的表达在HepG2和HepG2.2.15之间存在一定的差异。结论三种肝细胞系能表达Ⅰ型干扰素及干扰素受体、IL-7、IL-15、HLA等一系列的免疫相关分子。
- 刘敏郝友华胡斌宋景娇马德强徐春利陆蒙吉杨东亮
- 关键词：肝细胞干扰素白细胞介素
- 重组人磷脂爬行酶1的原核表达及纯化被引量：1
- 2011年
- 目的:建立重组人磷脂爬行酶1(hPLSCR1)原核表达及纯化工艺。方法:PCR扩增hPLSCR1编码基因并连接到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达,Western印迹鉴定所表达蛋白;优化表达条件后,Ni2+柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:构建了pET-28a-PLSCR1重组质粒,诱导表达后,经SDS-PAGE分析目的蛋白的表达量达32%,Ni2+金属螯合法纯化目的蛋白后纯度达到95%以上,Western印迹验证了融合蛋白的特异性。结论:建立了高效稳定的His-PLSCR1表达体系,获得大规模生产His-PLSCR1的分离纯化工艺,为进一步研究其蛋白功能奠定了基础。
- 朱向前杨静丁晓然王升启
- 关键词：原核表达纯化
- VPS4B显性负性突变体抑制乙型肝炎病毒复制
- 2011年
- 目的观察细胞液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)显性负性突变体VPS4B-K180Q在体外抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的效应。方法用不同剂量野生型VPS4B真核表达质粒pXF3H-VPS4B和K180Q突变型真核表达质粒pXF3H-K180Q与pHBV1.3共转染Huh7细胞,时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)定量检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg含量,Southernblot分析细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,实时定量PCR检测HBV相关mRNA水平变化。结果野生型VPS4B可抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较弱;低剂量突变型VPS4可显著抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较强,且均呈剂量依赖的抑制效应。结论 VPS4B及其显性负性突变体可在体外表现出抗HBV的作用,突变型VPS4B抑制HBV能力高于野生型VPS4B。
- 王维鹏夏剑波李磊郝友华杨东亮
- 关键词：乙型肝炎病毒
- 乙肝病毒感染不同阶段抗原肽特异性细胞毒性T淋巴细胞的初步研究被引量：15
- 2016年
- 目的:为了阐明HBV感染不同阶段机体免疫功能的不同。方法:分别构建了我国最高频等位基因HLA-A*0201三种常见抗原肽表位(HBVcore18-27、pol575-583、env335-343)四聚体复合物,并用这些四聚体检测HBV感染外周血单个核细胞(PBMCs)中HLA-A*0201限制性抗原特异性CD8^+T细胞的频率、功能及CD127的表达。结果:在大多数自限性HBV感染者的PBMCs中抗原特异性CD8^+T细胞的频率和增殖能力都高于慢性HBV感染者。在低病毒载量的免疫低复制期抗原特异性CD8^+T的数量和在高病毒载量、肝脏损害免疫清除期及免疫耐受期抗原特异性CD8^+T细胞频率是相似的,同病毒定量及ALT水平无显著相关性。慢性HBV感染者抗原特异性CD8^+T细胞增殖能力和病毒滴度呈反比。在自限性HBV感染患者抗原特异性CD8^+T细胞分泌IFN-γ的功能明显高于慢性HBV患者,在免疫耐受期基本丧失产生细胞因子的能力;HBV感染后不同免疫状态的HBs Ag水平不同,免疫耐受期最高,其次为免疫清除期、再活动期,低复制期的最低。而且随着HBs Ag水平下降,同HBV DNA的相关性也逐渐下降。慢性HBV感染者中CD8^+CD127^+T细胞要低于对照组及自限性感染组,特别是在HBe Ag阳性的免疫耐受期及免疫清除期组患者中CD8^+CD127^+T细胞比例更低。结论:慢性HBV感染中抗原特异性CD8^+T细胞的频率不是决定免疫应答的唯一因素,慢性乙肝患者体内记忆性的抗原特异性CD8^+T细胞并未被完全清除或缺失,这为治疗性疫苗和免疫恢复治疗提供了可行性。
- 杨新星李东升周继光杨东亮郝友华
- 关键词：乙肝病毒T淋巴细胞免疫功能
- 1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠的制备及检测被引量：5
- 2011年
- 目的制备1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠,为乙肝的防治提供较好的动物模型。方法采用受精卵显微注射法,制备1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠;采用PCR、ELISA、荧光定量PCR和免疫组化方法检测HBV基因在转基因小鼠体内的整合、复制和表达情况。结果共注射受精卵2282枚,成活2024枚,注射成活率88.7%。共移植假孕雌鼠72只,59只怀孕,假孕雌鼠妊娠率81.9%。共产下F0代小鼠185只,PCR检测共有19只整合阳性,阳性率10.3%。血清荧光定量PCR结果显示,其中6只小鼠有HBV DNA复制,拷贝数为102~103拷贝/ml;经传代产下F1代小鼠96只,PCR检测HBV DNA阳性33只,阳性率34.4%。血清荧光定量PCR结果显示,其中10只小鼠有HBV DNA复制,拷贝数为102~103拷贝/ml;F0代和F1代小鼠随机分别各取3只进行肝脏和肾脏HBsAg免疫组化检测结果均为阳性,且肾脏表达高于肝脏。结论 1.3拷贝C基因可以在上述制备成功的C型HBV转基因小鼠体内复制和表达,并且可以遗传给下一代。
- 陈媚娟尤玉琴刘光泽佟明华黎经纬李秀梅孔祥平
- HBV转基因小鼠血液生理生化指标检测分析被引量：5
- 2011年
- 目的研究HBV基因整合对转基因小鼠代谢和血液指标的影响。方法以28只同一窝乙肝表面抗原（HBsAg）阴性小鼠和50只HBsAg阳性的HBV转基因小鼠为研究对象,鼠龄6~8周,眼眶静脉丛采血,检测血液常规指标白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、血小板（PLT）及淋巴细胞百分比（L%）、中间细胞百分比（M%）、分叶细胞百分比（G%）,血液生化指标葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、总蛋白（ALB）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）等,并对有差异的指标进行品种（HBsAg阳性鼠和阴性鼠）内及性别间比较分析。结果转基因小鼠血糖、尿素氮、肌酐、红细胞、血红蛋白、血小板指标与正常小鼠之间有显著差异（P〈0.05）,而其余指标无明显差异（P〉0.05）。上述6项指标在不同性别正常小鼠之间没有差异,而在不同性别转基因小鼠之间仅血糖存在差异,雄鼠血糖高于雌鼠（P〈0.05）。转基因雄鼠血糖、肌酐、尿素氮明显高于正常雄鼠,而转基因雌鼠红细胞、血红蛋白、血小板指标明显高于正常雌鼠（P〈0.05）。结论 HBVDNA对小鼠的生理生化指标有一定影响。
- 郑凤娇傅泳航刘光泽张建李秀梅陈媚娟孔祥平
- 关键词：血液化学分析
