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新疆维吾尔自治区科技支疆项目(201191157)
作品数:
2
被引量:1
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相关作者:
刘涛
卢晓梅
刘清
郑树涛
伊力亚尔·夏合丁
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相关机构:
新疆医科大学第一附属医院
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发文基金:
新疆维吾尔自治区科技支疆项目
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p38α丝裂原活化蛋白激酶在食管鳞癌细胞Eca109中的功能研究
2013年
目的探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在食管鳞癌细胞Ecal09中的可能作用。方法构建p38ct特异性的shRNA干扰载体,瞬时转染Ecal09细胞,运用qRT—PCR、免疫印迹分别检测p38ct干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果;运用MTr和流式细胞仪检测p38ct干扰后Ecal09细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化;运用细胞划痕实验检测p38α干扰后细胞迁移能力的改变。作为平行反向验证,转染含有p38c~全长cDNA的真核过表达质粒,运用免疫印迹检测p38ct过表达后在蛋白水平上的表达效果;运用MTT和流式细胞仪检测p38α过表达后细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化;运用细胞划痕实验检测p38ct的变化后细胞迁移能力的改变。结果p38ct基因在受干扰后,测定其蛋白水平表达水平(22.970±2.857)较空质粒组(35.658±2.286)降低,差异具有统计学意义(t=-4.475,P〈0.01)。观察Ecal09细胞的增殖变化,发现干扰48h后吸光度值(0.951±0.086)大于对照组细胞(0.811±0.012)(t=3.20,P〈0.05),表明Ecal09细胞增殖加快。观察细胞周期和凋亡变化发现,干扰48h后凋亡率(17.400±5.495)较空质粒组(1.000±O.721)增加(t=40.06,P〈0.01);干扰72h后细胞迁移速度(0.034±0.031)较空质粒组(0.278±0.021)加快(t=-5.79,P〈0.01),表明浸润能力增加。p38ct在过表达后,检测到其内源性p38α蛋白表达水平(41.1704-2.357)高于对照组(35.658±2.286)(t=4.41,P=0.005);48h过表达组吸光值(0.472±0.089)与对照组细胞吸光值(0.81l±0.012)相比,细胞增殖受到抑制(t=-7.50,P〈0.01),细胞生长活动在Gl期受阻(t=4.80,P〈0.01),并且其细胞凋亡(32.233±1.457)高于空质粒组(1.000±0.721)(t=17.20,P〈0.01),细胞迁移[(0.770±0.054)mm]较空质粒组[(0.278±
郑树涛
刘涛
刘清
鲁芒
高向朋
伊力亚尔·夏合丁
林仁勇
卢晓梅
关键词:
食管鳞癌
RNA干扰
过表达
食管鳞癌中微小核糖核酸-21的作用及对靶蛋白的影响
被引量:1
2011年
目的探讨微小RNA(miRNA)-21对食管鳞癌细胞Ecal09和哈萨克族食管癌的促增殖作用及对程序性细胞死亡基因4(PDCD4)表达的影响。方法将食管鳞癌细胞系Ecal09分为miRNA-21Mimics组(转染序列5'-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3’)、miRNA-21抑制剂组(转染序列5'-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3')、阴性对照组(转染随机序列)和正常对照组(不予转染等任何处理)。细胞按4.5×10^5个/孔接种于6孔板,基于RNA干扰(RNAi)技术、使用脂质体2000试剂进行细胞转染。采用细胞计数法检测转染后各组细胞的增殖情况。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT—PCR)检测各组细胞的miRNA-21转录水平。采用Western印迹技术检测转染后各组PDCD4蛋白表达情况。检测18对哈萨克族食管癌及其对应的癌旁正常食管组织中miRNA-21转录和PDCD4蛋白表达情况。结果转染48h后,与正常对照组比较,miRNA-21Mimics组Ecal09细胞数增加36%(P=0.002),miRNA-21抑制剂组细胞数减少28%(P=0.002),阴性对照组细胞数变化不明显(P=0.515)。转染48h后,miRNA-21抑制剂组、miRNA-21Mimics组、阴性对照组、正常对照组miRNA-21的相对表达量分别为0.37±0.10、9.17±1.08、0.74±0.23和1.04±0.34,PDCD4蛋白相对表达量分别为1.47±0.11、0.61±0.09、0.89±0.12、0.79±0.02。与正常对照组比较,miRNA-21抑制剂组miRNA-21相对表达量下降(P=0.031)、PDCD4蛋白相对表达量上调(P=0.001),miRNA-21Mimics组miRNA-21相对表达量上升(P=0.001)、PDCD4相对表达量下调(P=0.030),阴性对照组则差异无统计学意义(P值分别=0.272和0.541)。18对哈萨克族食管癌组织中16对的miRNA-21相对表达量(0.11±0.09)高于其对应的癌旁正常食管组织(0.03±0.03,P=0.001),PDCD4蛋白相对表达量(0.92±0.39)低于其对应的癌旁正常食管组织(1.57±0.8
刘涛
刘清
马文静
阿孜古丽·吐尔逊
郑树涛
伊力亚尔·夏合丁
马正海
卢晓梅
关键词:
微小核糖核酸
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