浙江省自然科学基金(Y2110928)
- 作品数：7 被引量：42H指数：5
- 相关作者：汤小康应航童培建李敏程婉更多>>
- 相关机构：浙江中医药大学浙江省中医院湖南中医药大学第一附属医院更多>>
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- 右归饮对模拟人体内应力环境中成骨细胞碱性磷酸酶分泌的影响被引量：7
- 2013年
- 目的探究牵张应力作用下右归饮含药血清刺激大鼠成骨细胞后,对其碱性磷酸酶(ALP)分泌的影响,评价右归饮在模拟人体内应力环境中促进成骨细胞增殖分化的作用。方法随机将40只SD大鼠均分为右归饮组和生理盐水组,右归饮组每天按含生药量20 g/kg灌胃,生理盐水组灌以等量的生理盐水,连续灌胃1周;末次灌胃2 h后,常规麻醉,心脏取血,分离提取血清,-20℃保存2组血清;采用序列酶消化法培养成骨细胞,传至第4代将细胞等量接种为6组,每组6孔,分别标记为无血清培养基对照组、生理盐水血清组、右归饮含药血清组、无血清12%牵张形变组、生理盐水血清12%牵张形变组和右归饮含药血清12%牵张形变组,无血清培养基同步化培养24 h;将右归饮含药血清及生理盐水血清分别作用于右归饮含药血清组、右归饮含药血清12%牵张形变组和生理盐水血清组、生理盐水血清12%牵张形变组细胞,同时采用0.5 Hz频率、12%形变量的牵张力对相应无血清组细胞、右归饮血清组细胞及生理盐水血清组细胞进行力学加载。分别于12 h和24 h对各组细胞行ALP定量测定,检测各组细胞ALP活性;加力24 h后,行碱性磷酸酶染色(CAKP),显微镜镜检拍照,检测成骨细胞胞浆内CAKP颗粒数目及分布;并利用统计学软件对数据进行分析。结果 0.5 Hz、12%牵张应力条件下无血清组细胞与常规培养条件下无血清组细胞比较,前者ALP表达受抑制(P<0.05);牵张应力条件下右归饮血清培养液与生理盐水血清培养液,较常规培养条件下2种血清培养液比较,均能刺激成骨细胞ALP表达(P<0.05),且力学环境下右归饮组ALP值高于生理盐水血清组(P<0.05)。结论无血清条件下,牵张应力表现出抑制成骨细胞ALP表达现象;右归饮在模拟人体牵张应力环境下能促进成骨细胞的增殖分化。
- 汤小康应航倪哲吉樊燕华李敏童培建肖鲁伟
- 关键词：牵张应力成骨细胞碱性磷酸酶右归饮
- 骨细胞分离培养及其与成骨细胞鉴别比较的实验研究被引量：7
- 2013年
- 目的:建立比较稳定的骨细胞实验室分离培养方法,并将其部分生物学特性与实验室培养的成骨细胞进行比较研究,明确两者区别。方法:采用序列酶消化法,分别从3只3dSD乳鼠骨骼中分离培养骨细胞和成骨细胞,培养24h后进行细胞形态学观察。第1代细胞用碱性磷酸酶试剂盒采用重氮盐法(改良Kaplow氏法)染色,采用免疫细胞化学法对细胞的骨钙素(BGP)染色,测定碱性磷酸酶并计算其活性。结果:骨细胞多呈星状或树枝状,且有很多的突触;成骨细胞呈长梭形,有少量的突触。骨细胞碱性磷酸酶染色,胞浆内cAKP颗粒不明显;成骨细胞碱性磷酸酶染色,胞浆内可见众多cAKP颗粒。骨细胞BGP染色阳性明显,成骨细胞BGP染色阳性不如骨细胞明显。ALP在骨细胞中分泌较成骨细胞低,且有统计学差异。结论:实验室条件下能培养出骨细胞,该类细胞和成骨细胞有明显区别。
- 汤小康程婉许兵应航童培建肖鲁伟
- 关键词：骨细胞成骨细胞细胞分离
- 牵张应力环境下六味地黄汤含药血清对成骨细胞增殖分化影响的研究
- 力学应变对于骨骼系统的生长发育、正常骨量的维持,及骨折的修复与塑形都具有极为重要的作用。成骨细胞是骨组织中机械应力的主要效应细胞之一,因此研究力学对成骨细胞的作用可以进一步了解体内骨骼的力学应答。中医理论认为,肾藏精,主...
- 汤小康程婉应航李敏郭燕威童培建
- 文献传递
- 牵张应力环境下六味地黄汤含药血清对成骨细胞增殖分化影响的实验研究被引量：10
- 2013年
- 目的:探讨不同时间、不同形变量的牵张应力环境下,六味地黄汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞增殖分化的作用。方法:制备血清后,将六味地黄汤含药血清及空白对照血清分别作用于2组成骨细胞24h,然后采用频率0.5Hz、形变量分别为6%和12%的牵张应力,对六味地黄汤含药血清组及空白血清对照组的成骨细胞进行力学加载,分别于12、24h行碱性磷酸酶(ALP)活性测定(检测各组碱性磷酸酶活性)和MTT检测(检测受力后各组成骨细胞增殖的情况),并利用统计学软件对相关数据进行分析。结果:①在牵张应力环境下以0.5Hz的频率牵拉成骨细胞24h,6%与12%的形变量均能刺激成骨细胞增殖与分化,其中12%的形变量作用优于6%的形变量。②六味地黄汤含药血清短时间刺激对体外培养的SD大鼠成骨细胞尚未见促进增殖分化作用。结论:牵张应力环境能促进体外培养的成骨细胞增殖和分化,短时间六味地黄汤含药血清作用对成骨细胞影响不明显。
- 程婉汤小康应航李敏
- 关键词：成骨细胞细胞增殖补肾药
- 两种软骨终板细胞体外培养方法效果的比较研究
- 2016年
- 目的比较原代椎间盘软骨终板细胞实验室培养中Ⅰ型与Ⅱ型胶原酶消化效率的差异。方法提取新西兰大白兔椎间盘软骨终板组织,将其剪碎并随机分成2等份,标记为Ⅰ型胶原组和Ⅱ胶原型组;用0.25%的胰蛋白酶预消化后,分别用0.02%Ⅰ型胶原酶和0.02%Ⅱ型胶原酶在37℃消化3次,每次1 h;将3次消化所得的细胞悬液混匀后离心,获取细胞并进行培养与传代;对两组软骨终板细胞分别进行细胞计数、细胞形态学观察和细胞增殖情况检测等处理,比较两组软骨终板细胞数目、形态及增殖情况的差异。结果 1)细胞计数:Ⅰ型胶原组细胞3次细胞计数结果分别为5.75×104个/m L、5.50×104个/m L、6.25×104个/m L,获得软骨终板数目(5.83±0.31)×104个/m L;Ⅱ胶原型组细胞3次细胞计数结果分别为8.75×104个/m L、9.50×104个/m L、8.25×104个/m L,获得软骨终板数目(8.83±0.51)×104个/m L,Ⅰ型胶原组细胞总量明显少于Ⅱ胶原型组;2)细胞形态:两组软骨终板细胞多呈多角形,胞核大而圆,形态无明显差异。3)细胞增殖:Ⅰ型胶原组细胞MTT读数OD值为(0.561±0.003),Ⅱ胶原型组细胞MTT读数OD值为(0.562±0.002),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论Ⅱ型胶原酶较Ⅰ型胶原酶更适用于原代椎间盘软骨终板细胞的分离培养。
- 汤小康李敏应航卢敏
- 关键词：细胞培养
- 牵张应力环境下六味地黄汤对成骨细胞增殖分化影响的实验研究
- 目的探讨不同时间、不同形变量的牵张应力环境下,六味地黄汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞增殖分化的作用。方法制备血清后,将六味地黄汤含药血清及空白对照血清分别作用于两组成骨细胞24 h,然后采用0.5 hz频率、...
- 汤小康程婉童培建应航李敏
- 关键词：牵张应力六味地黄汤成骨细胞细胞增殖细胞分化
- 文献传递
- Ⅰ型与Ⅱ型胶原酶在原代成骨细胞培养中消化效果的对比研究被引量：6
- 2013年
- 目的:比较Ⅰ型与Ⅱ型胶原酶在原代成骨细胞培养中的消化效果。方法:取6只新生24 h内的SD大鼠,处死后取出颅盖骨并制成碎骨片。将碎骨片等分成2份,标记为Ⅰ组和Ⅱ组,分别用0.1%Ⅰ型胶原酶和0.1%Ⅱ型胶原酶在37℃消化2次,每次1 h。将2次消化所得到的细胞悬液混匀后进行细胞培养,并对2组细胞分别进行细胞计数,观察细胞形态、细胞增殖情况及碱性磷酸酶染色情况,并测定碱性磷酸酶含量。结果:①细胞计数。Ⅰ组细胞3次细胞计数结果分别为6.20×105个.mL-1、6.00×105个.mL-1、5.90×105个.mL-1;Ⅱ组细胞3次细胞计数结果分别为3.20×105个.mL-1、3.40×105个.mL-1、2.90×105个.mL-1。Ⅰ组细胞总量为Ⅱ组细胞总量的2倍左右。②细胞形态。2组细胞多呈梭形,表面有2～3个突触与周围细胞相联系,2组细胞形态无明显差异。③细胞增殖。Ⅰ组光密度(0.492±0.001)与Ⅱ组光密度(0.491±0.002)比较,差异无统计学意义(t=0.379,P=0.713)。④碱性磷酸酶染色。2组细胞用苏木素染色后,胞浆内均可见明显的咖啡色和红棕色颗粒。⑤碱性磷酸酶含量。Ⅰ组碱性磷酸酶含量[(2.929±0.024)金氏单位]与Ⅱ组[(2.933±0.024)金氏单位]比较,差异无统计学意义(t=0.389,P=0.706)。结论:Ⅰ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶均适用于成骨细胞的原代消化,但在消化1 h×2次条件下用Ⅰ型胶原酶容易获得更多的成骨细胞。
- 汤小康应航李敏包洁童培建
- 关键词：成骨细胞细胞培养技术胶原酶类动物实验
- 内服中药治疗骨折早期的研究进展被引量：14
- 2013年
- 目的:总结近年来内服中药治疗骨折早期的临床疗效。方法:对近10 a来中药治疗骨折的文献进行综述,总结内服中药治疗骨折早期的方法及其疗效。结果:内服中药治疗骨折早期疗效显著。结论:早期骨折应早期诊断、早期治疗、持续治疗,不忘化瘀,适量运动,合理膳食。
- 樊燕华汤小康童培建应航
- 关键词：内服中药骨折早期骨延迟愈合骨不愈合
- 牵张应力环境中补肾活血汤干预成骨细胞增殖分化效果及机制研究
- 2021年
- 目的观察牵张应力环境中补肾活血汤对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖分化效果,评估NO和PGE2在该过程中变化情况。方法制备补肾活血汤含药血清与空白对照血清,将其分别作用于SD大鼠成骨细胞。采用频率为0.5hz、形变量为12%的牵张应力,分别对含药血清组和空白血清对照组的成骨细胞进行力学加载。分别于加载时间的12 h和24 h,运用碱性磷酸酶活性试剂盒测定各组细胞ALP活性,运用MTT法检测各组细胞的增殖活性。力学加载时间的24 h后,通过硝酸还原酶法和ELISA法对各组细胞NO和PGE2表达量进行检测。运用统计学软件对相关结果进行数据分析。结果牵张应力环境影响SD大鼠成骨细胞24 h,能促进其增殖分化;牵张应力环境中补肾活血汤对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖有促进作用;牵张应力环境中成骨细胞NO表达呈现抑制,牵张应力环境中补肾活血汤对体外培养SD大鼠成骨细胞NO表达增强;PGE2的表达均未发现明显变化。结论牵张应力环境中补肾活血汤能促进SD大鼠成骨细胞增殖与分化,这种作用的实现与其调控NO表达可能存在联系。
- 汤小康唐成剑周长征卢敏李敏应航
- 关键词：牵张应力成骨细胞补肾活血汤前列腺素E
