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河北省自然科学基金(C2008000216): 作品数：25 被引量：210H指数：10; 相关作者：张伟马晓燕张先舟王羽张会彦更多>>; 相关机构：河北农业大学中国检验检疫科学研究院保定市产品质量监督检验所更多>>; 发文基金：河北省自然科学基金河北省高等学校科学技术研究指导项目国家自然科学基金更多>>; 相关领域：轻工技术与工程医药卫生生物学农业科学更多>>

实时荧光环介导等温扩增技术检测乳粉中的肺炎克雷伯氏菌被引量：14: 2014年; 为了建立食品中肺炎克雷伯氏菌灵敏快速的检测方法,根据GenBank中已公布的肺炎克雷伯氏菌phoE基因设计引物,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测食品中肺炎克雷伯氏菌的方法,可直观判定检测结果,仪器亦可自动显示检测结果。对该检测方法的特异性、灵敏度等方面进行研究,并与聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法进行比较。结果表明,实时荧光LAMP检测方法特异性强、灵敏度高。用于特异性实验的21株实验菌株中,4株肺炎克雷伯氏菌,呈现阳性结果,而其他17株非肺炎克雷伯氏菌,均呈阴性结果;检测纯菌的灵敏度和检测人工污染乳粉的检出限分别为79 CFU/mL和79 CFU/g,是常规PCR检测方法的100倍。总之,本研究建立的实时荧光LAMP检测方法灵敏度高、特异性强、耗时短、结果判定直观,实现了对肺炎克雷伯氏菌的快速检测。; 陈文秀姜旋马晓燕张伟; 关键词：肺炎克雷伯氏菌 SYBR

环介导等温扩增技术检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的研究被引量：5: 2011年; 采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)。以小肠结肠炎耶尔森氏菌(AY004311.1)Ail基因序列作为靶序列,设计内、外引物,通过肉眼观察沉淀判断检测结果。结果表明:LAMP检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的灵敏度为6.3cfu/mL,人工污染鸡肉的检出限为340cfu/g。PCR检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的灵敏度为630cfu/mL,人工污染鸡肉的检出限为3.4×104cfu/g。采用试剂盒法提取DNA,从样品处理到报告结果,LAMP方法耗时2h,PCR方法耗时3h。因此,LAMP检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的灵敏度高,耗时短,特异性好,操作简便,无需特殊的仪器设备,适合在我国广大基层实验室开展应用,为快速检测食源性致病菌构建了一个新的技术平台。; 梁磊李英军孟兆祥马晓燕张伟; 关键词：环介导等温扩增小肠结肠炎耶尔森氏菌

LAMP技术检测食品中产肠毒素大肠埃希氏菌被引量：4: 2011年; 产肠毒素大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一种重要的引起人畜共患病的致病菌,能引起水样便及酸中毒,建立快速、准确的检测方法对预防和控制产肠毒素大肠埃希氏菌的感染具有重要意义。基于ETEC不耐热肠毒素LT基因序列,设计LAMP引物检测产肠毒素大肠埃希氏菌。结果表明:LAMP检测产肠毒素大肠埃希氏菌的检出限为32.9cfu/mL,人工污染生猪肉的检出限为55cfu/g。LAMP将可以成为替代PCR的核酸扩增新技术,为快速检测产肠毒素大肠埃希氏菌构建了一个技术平台。; 孟兆祥马晓燕张会彦张伟; 关键词：环介导等温扩增

改良环介导等温扩增技术快速检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌被引量：30: 2009年; 【目的】采用改良环介导等温扩增(LAMP)技术,快速检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌。【方法】以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的16S-23SrRNA间区序列作为靶序列,设计内、外引物和环引物,通过肉眼观察白色沉淀,判断检测结果。【结果】LAMP检测阪崎肠杆菌的灵敏度为0.101CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1.1CFU/g。采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时1h。而对照,PCR检测阪崎肠杆菌的灵敏度为101CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1100CFU/g。采用同样方法提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时3h。【结论】因此,LAMP检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌灵敏度高,耗时短,方法简便。; 胡连霞张伟张先舟袁耀武张蕴哲张会彦马晓燕苏旭东; 关键词：环介导等温扩增 LAMP 阪崎肠杆菌婴儿配方奶粉

一种DNA扩增的新技术:利用热稳定的Bst DNA聚合酶驱动跨越式滚环等温扩增反应被引量：13: 2013年; Bst DNA聚合酶具有热稳定性、链置换活性及聚合酶活性,在体外DNA等温扩增反应中起重要作用.本文利用Bst DNA聚合酶的5'→3'聚合酶、核苷酸(末端)转移酶及链置换酶活性发展了一种新的体外环式DNA扩增技术跨越式滚环等温扩增(saltatory rolling circle amplification,SRCA).在SRCA反应中,Bst DNA聚合酶以上游引物P1为模板合成其互补链RcP1,并和P1形成双链DNA;之后,Bst DNA聚合酶用其核苷酸转移酶活性在其P1的3'末端沿5'→3'方向随机掺入脱氧核糖核苷酸聚合形成寡聚核苷酸(dNMP)m序列,即DNA的合成反应跨越了RcP1与下游引物P2之间的缺口;然后,以下游引物P2为模板形成互补序列(RcP2);接着,Bst DNA聚合酶继续将脱氧核糖核苷酸随机添加到RcP2的3'末端,形成(dNMP)n序列.继而,Bst DNA聚合酶以RcP1为模板,继续催化聚合反应合成互补新链,并通过其链置换酶活性替换P1;如此往复,形成[P1-(dNMP)m-RcP2-(dNMP)n-…]序列.本文通过电泳、酶切、测序等方法对扩增产物进行分析,演绎出上述扩增过程,并就工作原理进行了讨论.该反应可能对开发等温扩增技术检测微生物有一定助益,也为解释环介导等温扩增技术中假阳性反应和滚环等温扩增反应中的背景信号提供了线索.; 孟兆祥张伟檀建新马晓燕; 关键词：BST DNA聚合酶 DNA扩增

多重PCR快速检测婴幼儿奶粉中的病原菌被引量：2: 2012年; 为了建立同时检测婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌的多重PCR方法,根据阪崎肠杆菌ompA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、蜡样芽孢杆菌hblA基因分别设计3对引物进行多重PCR扩增,并对反应条件进行优化。结果多重PCR扩增出长度为514、156、235bp的特异性目的条带。不增菌的情况下,多重PCR同时检测3种病原菌的灵敏度是103cfu/mL,3种病原菌在奶粉中的检出限是104cfu/g。建立的多重PCR反应准确、快速、高效,为同时检测婴幼儿奶粉中的阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌提供了新方法。; 李洋洋张先舟王羽李英军张伟马晓燕吕婷; 关键词：多重PCR 奶粉病原菌

环介导等温扩增技术快速检测椰毒假单胞菌的研究被引量：10: 2013年; 建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测椰毒假单胞菌的方法。根据公布的椰毒假单胞菌16S～23SrRNA基因序列设计引物,建立了LAMP反应体系,在此基础上检测了蜡样芽孢杆菌菌液和人工污染蜡样芽孢杆菌的银耳样品,并将LAMP法与PCR法进行比较。结果表明,LAMP检测方法具有较高的特异性和敏感性,椰毒假单胞菌的检出限为5.4CFU/mL,是PCR方法检测灵敏度的1000倍,人工污染银耳样品中的椰毒假单胞菌的检出限为76CFU/g,样品中椰毒假单胞菌的检测过程(包括DNA提取、LAMP和电泳)可在2h内完成,因此LAMP可以简便快速有效地检测食品中的椰毒假单胞菌。; 马晓燕张蕴哲王羽刘哲王晓丽张伟; 关键词：环介导等温扩增椰毒假单胞菌

环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌的研究被引量：9: 2010年; [目的]采用环介导等温扩增技术,快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌。[方法]以单核细胞增生性李斯特氏菌(CMCC54001)的hlyA基因作为靶基因,设计引物,观察检测结果。[结果]确定了环介导等温扩增技术检测单核细胞增生性李斯特氏菌的最适反应条件。采用该方法检测单核细胞增生性李斯特氏菌的灵敏度为4.2CFU/ml。[结论]该研究建立了环介导等温扩增技术单核细胞增生性李斯特氏菌的检测方法。; 李秀敏王羽张先舟王小丽马晓燕张会彦张伟; 关键词：环介导等温扩增技术单核细胞增生李斯特氏菌

实时荧光LAMP技术快速检测变形杆菌被引量：4: 2016年; 建立一种快速检测变形杆菌的方法。采用实时荧光LAMP(Real Amp)技术检测变形杆菌,分析Gen Bank中公布的变形杆菌atp D基因序列,针对其6个区域设计4条引物,利用实时荧光监测仪等温(62℃)扩增模板DNA,通过与电脑相连进行实时监测,对该方法检测变形杆菌的特异性、灵敏度、人工污染猪肉检出限等方面进行研究,并将该检测法的灵敏度与普通环介导等温扩增(LAMP)检测法进行比较。结果表明,Real Amp检测方法比普通LAMP检测方法更加方便快捷,20 min内即可判定结果;用于特异性试验的19株试验菌株中,6株变形杆菌呈阳性结果,其他13株非变形杆菌均呈阴性结果;检测纯菌的灵敏度为8.1CFU/m L,是普通LAMP检测方法的10倍;人工污染猪肉的检出限为81CFU/m L。本研究建立的Real Amp检测方法操作简单,耗时短,特异性强、灵敏度高,能够实现对变形杆菌的快速检测。; 马桂芬张蕴哲付博宇袁耀武苑宁王鑫张伟; 关键词：LAMP 变形杆菌

环介导等温扩增技术检测沙门氏菌反应体系的优化被引量：10: 2010年; [目的]建立快速检测沙门氏菌的环介导等温扩增(LAMP)技术。[方法]以沙门氏菌的特异性基因(invA)序列为靶序列设计引物,并对该序列进行等温扩增;对Mg2+浓度、反应温度和反应时间扩增条件进行优化,并对沙门氏菌进行检测和鉴定。[结果]在Mg2+浓度为2.0mmol/L时,62℃反应40min,扩增可达最佳效果,LAMP法检测的灵敏度为7.8cfu/ml。[结论]建立了快速检测沙门氏菌的LAMP技术,该方法灵敏度高、耗时短、方法简便,便于在基层推广,为检测食源性致病菌构建了一个技术平台。; 张胜凯张先舟王羽马晓燕张会彦张伟; 关键词：环介导等温扩增沙门氏菌

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